LMP1043.10 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法操作指南.docx

1、甲氧基、乙氧基与羟丙基测定法操作指南文件类别管理规程文件属性回新建口修订（版本号/,第/次修订）变更信息修订号执行日期变更历史02015.10.12新建。/部门姓名签名日期制定人质量控制部董晓琴审核人质量控制部尹文批准人质量控制部刘羽发放范围：质量控制部目的6.参考文件序号名称和/编号1中国药典2015年版四部2中国药品检验标准操作规范2010年版附件N/A8.变更历史N/A建立甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法操作指南，指导检验员正确操作，确保检验结果准确可靠。1. 范围适用于甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定。2. 责任3.1检验员：按本文件执行。3.2恒广路实验室负责人：监督本文件的正确实施。3.

2、 缩写/定义N/A程序5.1概述：本法系采用气相色谱法或容量法测定甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素或羟丙甲纤维素等中所含的甲氧基、乙氧基和羟丙氧基含量，当容量法测定结果不符合规定时，以气相色谱法测定结果为判断依据。5.2第一法（气相色谱法）5.2.1仪器与用具5.2.1.1气相色谱仪：带氢火焰离子化检测器或热导检测器。5.2.1.2色谱柱：以硅酮（0V-7）为固定相、涂布浓度为20%的填充柱；或以6%氤丙基苯基-94%二甲基硅氧烷（或极性相近）为固定液的毛细管柱。5.2.1.3微量注射器：规格10U1和50ulo1.4分析天平：感量0.Img和0.Olmgo5.2. 1.5加热器：加热温度

3、150C,控温精度1C；带孔：直径20mm,深32mm,可振荡。5.2.1.6反应瓶：外径20mm,内径13mm,高50mm,带丁基橡胶塞，可密封。5.2.2试剂、溶液、对照品2.1碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷，使用前进行标化测定：分析纯以上。5.2. 2.2氢碘酸、己二酸、正辛烷和邻二甲苯：均为分析纯。5.2. 2.3内标溶液：称取正辛烷0.5g,置于100ml量瓶中，加邻二甲苯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。5.2. 2.4对照品溶液：反应瓶中加己二酸80mg,分别精密加入内标溶液和氢碘酸各2ml,密封，精密称定；根据各供试品中所含甲氧基、乙氧基或（和）羟丙氧基的量，用注射器穿刺加适量碘甲烷、

4、碘乙烷或（和）2-碘丙烷，精密称定，两次称重结果相减即为对照品加入量；振摇30s,静置，取上层液体即得。5.2.3测试3.1供试品溶液：取供试品约65mg,精密称定，置己称重的反应瓶中，加己二酸80mg,分别精密加入内标溶液和氢碘酸各2ml,密封,称重，130C150C振荡60min,或在130C150C加热30min,手工剧烈振摇5min,继续在130C150C加热30min,冷却至室温，称重，若失重小于反应瓶中内容物的0.50%,且无渗漏，取混合液的上层液体作为供试品溶液；若失重大于反应瓶中内容物的0.50%,则应重新制备供试品溶液（羟丙甲纤维素的加热温度为150C）o5.2.3.2系统适

5、用性试验：将色谱柱接入气相色谱仪，选择适宜检测器，柱温采用程序升温：100C维持8min,然后以每分钟50C的速率升温至230C,维持2min；进样口温度200C；检测器温度250C。照气相色谱法测定，理论塔板数按正辛烷峰计算不低于1500（填充柱）或10000（毛细管柱），各对照品峰及内标物质峰的分离度应符合要求。取对照品溶液连续进样5次，校正因子相对标准偏差应不大于3.0%。5.2. 3.3校正因子测定：取对照品溶液lul注入气相色谱仪，计算甲氧基、乙氧基或（和）羟丙氧基的校正因子f。5.2.3.4含量测定:取供试品溶液1U1进行测定，计算生成的碘甲烷、碘乙烷或（和）2-碘丙烷的量，折算成

6、供试品中甲氧基、乙氧基和羟丙氧基的含量。5.2.4记录5.2.4.1记录天平型号及室温和相对湿度，气相色谱仪型号、色谱条件，色谱柱型号和规格，振荡加热器型号、加热温度和时间，供试品与对照品的名称、批号、含量及取用量，系统适用性试验和含量测定的色谱图。5.2.5计算5.1碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷与甲氧基、乙氧基和羟丙氧基的转换系数，见表1。表1碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷与甲氧基、乙氧基和羟丙氧基的转换系数对照品对应被测定物质转换系数碘甲烷甲氧基0.2186碘乙烷乙氧基0.28892-碘丙烷羟丙氧基0.44175.2.5.2计算甲氧基%=(Qr/Qs)X(Ws/W)X0.2186X100%乙氧基

7、=(Qr/Qs)X(Ws/W)X0.2889X100%羟丙氧基%=(Qr/Qs)X(Ws/W)XO.4417X100%式中：Qr和Qs分别为供试品和对照品的峰面积与其对应的内标物质峰面积之比；Ws为对照品的取样量，mg；W为供试品的重量(按干燥品计)，mgo5.2.6供试品应测定两份，相对偏差不得过2.0%05.2.7附注：碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷的标化5.2.7.1纯度测定(气相色谱法)。避光操作。用6%氢丙苯基-94%二甲基硅氧烷(或极性相近)为固定液的毛细管柱；起起始温度为60C，维持8min,再以每分钟10C的速率升温至150C,维持lOniin；进样口温度为200C；检测器氢火焰离

8、子化检测器(FID)或热导检测(TCD)温度为250C。取本品lul,注入气相色谱仪，记录色谱图，按不加校正因子的峰面积归一化法计算主峰相对百分含量，应不得低于99.5%。5.2.7.2含量测定(容量法)。避光操作。取乙醇10ml,置100ml量瓶中，精密称定，加碘甲烷(或碘乙烷，或2-碘丙烷)1.0ml,精密称定，用乙醇稀释至刻度，摇匀；精密量取20ml,置100ml量瓶中，精密加硝酸银滴定液(0.Imol/L)50ml与硝酸2ml,时时振摇2h,避光，放置过夜，继续时时振摇2h,用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液20ml,精密量取续滤液50ml,加硫酸铁铉指示液2ml,用硫氤酸铉滴定液

9、(0.Imol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硝酸银滴定液(0.Imol/L)相当于14.19mg,的碘甲烷(CH3I)15.60mg的碘乙烷(C2H5I)或17.00mg的2-碘丙烷(C3H7I),含碘甲烷(或碘乙烷，或2-碘丙烷)不得低于98.0%o5.2.8注意事项5.2.8.1碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷均应避光保存，放置过程中释放出碘，使溶液颜色逐渐加深，含量降低，故每次测定前应进行标化测定，含量计算时应进行折算。5.2.8.2碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷均为极易挥发性物质，应在进样前，打开反应瓶密封盖，取上层液立即测定。5.2.8.3氢碘酸应为无色至微黄色液体，浓度应为

10、57%,可直接从市场购买。如果氢碘酸颜色加深或浓度偏低，可取氢碘酸试剂置于全玻璃仪器中,加适量次亚磷酸，使氢碘酸的颜色由棕色变为无色，加热，同时缓缓通入氮气，收集126127C的馅分，纯化后的氢碘酸贮存于有良好密封性的棕色玻璃瓶中，充氮保存，浓度约为57%。5.2.8.4反应条件对反应瓶的密封性要求苛刻，既要反应完全，又要防止渗漏，加热时间以60分钟为宜。5.2.8.5羟丙甲纤维素因分子结构位阻较大，加热温度需在150E才能与氢碘酸反应完全，其余物质可控制加热温度为130150笆。5.2.8.6碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷和氢碘酸均为强刺激性物质，操作过程中应注意安全。5.3第二法(容量法)5.

11、3.1羟丙氧基测定5.3.1.1仪器与用具如图lo图中D为25ml双颈蒸馅瓶，侧颈与外裹铝箔的长度为95mm的分馅柱E相连接；C为接流管，末端内径为0.25mml.25mm,插人蒸偶瓶内；B为蒸汽发生管(25mmX150mm),亦具末端内径为0.25mml.25mm的气体导入管，并与C相通；F为冷凝管，外管长100mm,与E连接；G为125ml具刻度的带玻塞锥形瓶，供收集馅液用。D与B均浸人可控温的电热油浴A中，维持温度为155C。5.3.1.2试剂、溶液、对照品试剂均为分析纯。滴定液的配制与标定应符合中国药典2015年版四部的规定。试液、指示液的配制均应符合中国药典2015年版四部的规定。5

12、.3.1.3测试取各药品项下规定量的供试品，精密称定，置蒸馅瓶D中，加入30%(g/g)三氧化铭溶液10mlo于蒸气发生管B中装水接近接头处，连接蒸馅装置。将B与D浸入油浴中，油浴面应与D瓶中液面一致，开启冷凝水，通入氮气流，并控制流速为每秒约1个气泡，于30min内将油浴升温至155C,并维持反应温度至收集馅液约为50ml。将冷凝管自分馅柱上取下，并用水冲洗，洗液并入收集液中在上述收集液中，用氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)滴定至pH值6.9-7.1(用酸度计)记录消耗的容积Vl(ml)；然后碳酸氢钠0.5g与稀硫酸10ml,静置至不再产生二氧化碳为止，加碘化钾l.Og,密塞，摇匀，暗处

13、放置5min,加淀粉指示液1ml,用硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)滴定至终点，记录消耗的容积V2(ml)o另做空白试验，分别记录消耗氢氧化钠(0.02mol/L)的容积Va(ml)与消耗硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)的容积Vb(ml)。5.3.1.4记录：记录天平型号及室温和相对湿度，供试品与试药的名称、规格及取用量，滴定液的名称、浓度(mol/L)及其消耗量(ml)。5.3.1.5计算羟丙氧基%=(VMTV2M2)X(0.0751/W)X100%式中：K为空白校正系数，MlVa/M2Vb；VI、Va分别为供试品与空白试验消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml；V2、Vb分别为供试品与

14、空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液的体积，ml；W为供试品的重量，g；Ml为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L；M2位硫代硫酸钠滴定液的浓度，mol/L；0.0751为羟丙氧基(-0CH2CH0HCH3)的毫摩尔质量。5.3.1.6供试品应测定两份，相对偏差不得过0.5%o5.3.1.7注意事项整个装置连接应紧密。称样后，应小心移入蒸馅瓶中，供试品不应黏附在瓶颈壁上，避免供试品未参加反应，使含量偏低。反应过程中，升温速度不宜太快，油浴温度宜控制在30min内升温至155160C左右，并一直控制在160C以下。通入氮气的速度不能太快,避免生成的醋酸来不及冷却而挥发，影响测定结果。第一步用氢氧化钠滴定液滴

15、定时，一定要严格控制终点，否则影响测定值。5.3.2甲氧基测定5.3.2.1仪器与用具如图2。A为50ml圆底烧瓶，侧部具一内径为1mm的支管供导入二氧化碳或氮气流用；瓶颈垂直装有长约25cm、内径为9mm的直形空气冷凝管E,其上端弯曲成出口向下、并缩为内径2mm的玻璃毛细管，浸人内盛水约2ml的洗气瓶B中；洗气瓶具出口为一内径约7mm的玻璃管，其末端为内径4mm可拆卸的玻璃管，可浸入两个相连接的接收容器C、D中的第一个容器C内液面之下。图2甲氧基测定仪器装置5.3.2.2试剂、溶液、对照品试剂均为分析纯。 滴定液的配制与标定应符合中国药典2015年版四部的规定。 试液、指示液的配制均应符合中

16、国药典2015年版四部的规定。5.3.2.3测试取规定量的供试品（相当于甲氧基10mg）,精密称定，置圆底烧瓶A中。在烧瓶中加入熔融的苯酚2.5ml、氢碘酸5ml,另在两个吸收管内，分别加入含10%醋酸钾的冰醋酸溶液6ml与4ml,再各加漠0.2ml；连接装置，并将圆底烧瓶A置于可控温的电热油浴中。通过支管将CO?或皿流缓慢而均衡地以每分钟12个气泡通入烧瓶，并缓慢加热使温度控制在恰使沸腾液体的蒸汽上升至冷凝管的半高度（控制升温30min使油浴温度上升至135140C），保持此温度约45min完全反应。拆卸装置，将吸收管C和D中的内容物倾入250ml碘瓶（内盛25%醋酸钠溶液5ml）中，用水淋

17、洗吸收管及其可拆卸的玻璃管，并入碘瓶中使总体积约为125mlo加入甲酸0.3ml,转动碘瓶至漠的颜色消失，再加入甲酸0.6ml,密塞振摇，使过量的漠完全消失，放置12min。加入碘化钾l.Og与稀硫酸5ml,用硫代硫酸钠滴定液（0.lmol/L）滴定（以淀粉指示液指示滴定终点），并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的硫代硫酸钠滴定液（0.lmol/L）相当于0.5172mg的甲氧基。5.3.2.4记录：记录天平型号及室温和相对湿度，供试品与试药的名称、规格及取用量，滴定液的名称、浓度(mol/L)及其消耗量(ml)。5.3.2.5计算甲氧基%=(V-V2)XFXO.5172/W1X100%式中

18、：VI、V2分别为供试品与空白试验在滴定时消耗硫代硫酸钠滴定液(0.Imol/L)的体积，ml；F为硫代硫酸钠滴定液(0.Imol/L)的浓度值与其名义值之比；W为供试品的重量，mg；0.5172为硫代硫酸钠滴定液(0.Imol/L)对甲氧基的滴定度(mg/ml)o由于-OCH3-HI0：l3L,故每一分子甲氧基消耗6分子Na2S203o5.3.2.6供试品应测定两份，相对偏差不得过0.5%05.3.3注意事项整个装置连接应紧密。称取的供试品应小心置于反应烧瓶A的底部中心，保证供试品能全部溶入苯酚2.5ml中。加热反应后生成的碘甲烷籍通入的CO?或嘘流一起自反应液中蒸t留出来,经过洗涤管，去除干扰物质(碘化氢和碘)。反应过程中，注意温度的控制，一般控制油浴温度不适宜超过140C,升温速度不宜太快(约30min),在到达温度后，45min可完成反应；如果供试品的分子中有2个以上甲氧基时，加热时间应延长为13h。通入的CO2或N2流应不含02；流速应为以每秒