用MTT法进行白血病体外药物敏感性检测的临床意义

1、用MTT法进行白血病体外药物敏感性检测的临床意义         10-11-15 16:07:00     作者：陈新峰， 杨菁     编辑：studa20【摘要】  目的 探讨使用MTT比色法进行白血病体外药物敏感性检测的可行性，为MTT法作为肿瘤药敏检测技术应用于临床提供理论依据。 方法 采用MTT比色法测定47例血液病患者外周血和骨髓白血病细胞对14种临床常用化疗药物的敏感性，并与化疗药物的实际疗效作对照。 结果 4

2、7例患者中，体外敏感/体内敏感（S/S）30例、体外敏感/体内耐药（S/R）7例、体外耐药/体内耐药（R/R）9例、体外耐药/体内敏感（R/S）例；体外药敏与体内疗效的总符合率为82.98%，阳性符合率为81.09%，阴性符合率90%。敏感度96.77%，特异度56.25%。 结论 采用MTT法预测化疗药物的敏感性，临床相关性好。 【关键词】  白血病； 比色法； 氮蓝四唑； 药物耐受性； 药物筛选试验，抗肿瘤化学治疗是白血病的最主要治疗方式，由于肿瘤细胞的异质性和患者的个体差异，同一类型血液病的不同患者对化疗药物的敏感性各不相同，甚至同一患者在不同的化疗阶段对同一种药物的敏感性也有

3、差异，血液病患者原发性耐药的情况也时有发生。若可在化疗前预测患者对药物的敏感性，针对不同的患者采用个案化化疗方案，必将有效的提高临床化疗的有效性和经济性。MTT法是一种体外药敏检测方法，具有快速、简便、灵敏、成功率高的特点1。笔者采用MTT法测定47例白血病患者白血病细胞体外对14种化疗药物的敏感性，研究体外药敏实验结果与体内敏感性的相互关系，以期为MTT法应用于临床指导合理用药提供理论依据。    1  对象和方法    1.1  对象  2007年10月-2008年9月本院血液科的复发（32例）和初治

4、（15例）急性白血病患者，男性24例，女性23例，年龄中位数37岁(1674岁）；其中急性淋巴细胞性白血病（ALL）21例，急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）26例。所有白血病患者均按临床表现、骨髓形态学检查、免疫学分型和染色体检查确诊。当幼稚细胞数>30×109L-1时取外周血、<30×109L-1时取骨髓作为检测标本。标本用50 IU/mL的肝素钠抗凝。    1.2  仪器和试剂  二甲基噻唑烃基二苯四唑溴化物（MTT）购自美国Sigma公司，用生理盐水配成5 mg/mL，备用。淋巴细胞分离液（比重1.07

5、7）购自中国医学科学院生物工程研究所；RPMI1640购自美国GIBCO公司；ELX800型酶标仪购自美国BIOTEK公司。    1.3  化疗药物及其浓度  所有药物按说明书选用规定的溶媒溶解成工作液，终浓度采用化疗药物临床使用剂量在体内的血浆峰浓度2。药物浓度及厂家分别为:(1)高三尖杉酯碱（H）0.06 g/mL（杭州民生药业集团公司，批号：0801219）；(2)甲氨喋呤（MTX）20 g/mL（江苏连云港恒瑞医药股份有限公司，批号：07120812）；(3)盐酸阿糖胞苷（Arac）25 g/mL（哈尔滨博来制药有限公司，批号：080

6、406）；(4)硫酸长春地辛（VDS）0.8 g/mL（杭州民生杭州民生药业集团公司，批号：0803069）；(5)硫酸长春新碱（VCR ）2 g/mL（深圳万乐制药厂，批号：0802V2）；(6)盐酸柔红霉素（DNR）0.4 g/mL（深圳万乐制药厂，批号：0710F1）；(7)盐酸表柔比星（EPI）5 g/mL（辉瑞制药厂，批号：0801012）；(8)盐酸阿柔比星（ACM）0.4 g/mL（深圳万乐制药厂，批号：0709B1）；(9)盐酸多柔比星（ADM）10 g/mL（深圳万乐制药厂，批号：0801E1）；(10)盐酸米托蒽醌（MIT）0.25 g/mL（江苏奥赛康制药有限公司，批号：

7、070901）；(11)盐酸吡柔比星（THP）0.8 g/mL（深圳万乐制药厂，批号：0801C2）；(12)依托泊苷（VP16）62.5 g/mL（江苏连云港恒瑞医药股份有限公司，批号：08013131）；(13)盐酸依达比星（IDA）8.02 g/mL（意大利法玛西亚普强公司，批号：7QG004W）；(14)盐酸福达拉滨(Fludara)160.6 g/mL（意大利拜耳医药保健有限公司，批号：265A）。    1.4  方法    抑制率=1-（D用药组-D空白组）/（D对照组-D空白组）×100% 

8、;   MBDI=（化疗前骨髓白血病细胞数-停止化疗后最低时骨髓白血病细胞数）/化疗前骨髓白血病细胞数×100%    （3）敏感性  参照文献5，将体内外实验结果与临床疗效的关系分为：真阳性(体内/体外均敏感，S/S)，即体内使用1种或2种体外敏感药物获得CR或PR；真阴性(体内/体外均不敏感，R/R)，即体外药物不敏感，体内使用为NR；假阳性(S/R)，即体内使用1种或2种体外敏感药物未获CR或PR；假阴性(R/S)，即体内使用体外不敏感药物获得CR或PR。    总符合率=(S/S+R/R)/总例数×100%    阳性符合率=(S/S)/(S/S+S/R)×100%    阴性符合率=(R/R)/(R/R +R/S)×100%    敏感度=(S/S)/(S/S+R/S)×