大鼠急性脊髓损伤后血小板衍化生长因子_B的表达

1、大鼠急性脊髓损伤后血小板衍化生长因子_B的表达         08-11-29 13:30:00     作者：徐锡金    编辑：studa20【摘要】  目的：探讨血小板衍化生长因子_B(PDGF_B)在脊髓损伤(SCI)后对脊髓功能恢复的作用。方法：健康雌性SD大鼠48只随机分为免疫组化组(30只)和反转录_聚合酶链反应(RT_PCR)组(18只)。麻醉后，用改制的型纽约大学装置建立大鼠脊髓急性损伤模型。用免疫组化检测

2、急性SCI后不同时段PDGF_B在脊髓中的表达，用RT_PCR检测PDGF_B的mRNA在急性SCI后不同时段表达的变化。结果：PDGF_B蛋白表达：急性SCI后24h，PDGF_B在损伤区周围神经元的表达开始增加(592±323)，并于7d后维持在一定水平，14d后PDGF_B阳性细胞数增多，28d达高峰(8500±1349)，主要表达于坏死区增生的神经胶质细胞。PDGF_B mRNA表达：SCI后1d，PDGF_B mRNA表达降低，3d接近正常，随后略有下降，14d后mRNA表达升高，28d基本回到正常。结论：急性SCI后，PDGF_B对损伤脊髓的功能恢复有重要作用。

3、 【关键词】  血小板衍化生长因子 脊髓损伤 神经营养因子AbstractObjective: To explore the role of platelet derived growth factor_B(PDGF_B)on spinal cord functional reco_very after acute spinal cord injury(SCI)in rats Methods: Forty_eight health SD female rats were randomly assigned into immunohistochemistry group(n=30),

4、RT_PCR group(n=18). After anesthesia, the rat model with acute SCI was established using the modified weight_drop device from New York University. Immunohistochemistry method was used to detect the expression of PDGF_B protein after SCI,and RT_PCR was used to monitor the changes of PDGF_B mRNA. Resu

5、lts： After SCI, the expression of PDGF_B was different from that of control group. One day later, the numbers of PDGF_B positive cells and the PDGF_B mRNA were showed to increase tendentiously. Until 28 days, the numbers of PDGF_B positive cells reached the peak because of proliferative gligcyte Con

6、clusion: After SCI, PDGF_B plays an important role in spinal cord functional recovery after SCI.    Key Wordsplatelet derived growth factor; spinal cord injury; neurotrophic factor脊髓损伤(SCI)后的神经元再生修复一直是神经科学领域的前沿课题。在SCI的病理过程中，多种神经营养因子参与其中。血小板衍化生长因子(Platelet_derived growth factor, PDGF)是

7、由多种细胞合成和分泌的，它与神经细胞上的特异性受体(PDG_FR)结合后能促进神经细胞增殖、分化、趋化和预防程序性死亡的作用。PDGF，尤其是PDGF_B及其受体在神经系统中有广泛的表达，与脑部肿瘤、脑血管疾病和脱髓鞘疾病等多种神经系统的疾病发生密切相关1，为进一步了解PDGF_B在中枢神经损伤后及修复中对神经元的保护作用，本研究采用纽约大学(NYU)装置建立大鼠SCI模型，用免疫组化和反转录_聚合酶链反应(RT_PCR)方法，检测大鼠脊髓急性损伤后不同时段PDGF_B表达的变化,观察PDGF_B表达的变化规律，探索对损伤脊髓神经的保护作用及其对损伤脊髓功能恢复的影响。  

8、  1 材料与方法    11动物分组健康成年雌性Sprague_Daley(SD)大鼠(南方医科大学动物实验中心提供)48只,体质量160200g,随机分为免疫组化组又分6个小组(n5)：正常对照组、伤后1，3，7，14和28d组和RT_PCR组又分6个小组(n3)：正常对照组、伤后1，3，7，14和28d组。12SCI模型制备与取材大鼠按3mL/kg体质量腹腔注射质量分数01%(30mg/kg)的戊巴比妥钠。术区备皮，体积分数75%的酒精消毒，铺巾。做背部正中切口(T9T11)，钝性分离皮下组织、肌肉，暴露T10棘突。用咬骨钳仔细咬去T10棘突及椎板

9、，充分暴露该段脊髓背面及两侧1。用改制的型NYU装置(撞击高度25mm，撞击针10g，接触面积2mm2)对暴露脊髓的T10节段进行撞击,造成相当于中度SCI程度。撞击成功的标志：大鼠尾巴痉挛性摆动，双下肢及躯体回缩样扑动，双下肢呈驰缓性瘫痪。术区撒青霉素粉，用周围组织填充椎骨缺损部位，分层缝合。术后皮下注射青霉素10000u，开台灯保暖2。术后1、3、7、14、28d及对照组按05mL/100g体质量腹腔注射01%戊巴比妥钠，深度麻醉。开胸暴露心脏，行左心室_主动脉插管，剪开右心耳，灌注NS200mL，然后灌注预冷的体积分数3%的福尔马林200mL，至动物肢体僵硬。固定2h后，以撞击点为中心，

10、取出损伤部位(节段T9T10)及其近、远端各2个节段的脊髓，测量其左、右横径和前、后径后用体积分数10的福尔马林继续固定24h，重新修整后石蜡包埋切片(约5m)，每隔20张切取1张。    13方法    131动物行为评分    分别于SCI后3、7、14、21、28d对两组进行BBB(Basso, Beattie, Bresnahan locomotor rating scale)评分，检测其术后运动功能的恢复情况1。    132免疫组化    采用链霉素生物素蛋白_过氧化物酶连接法：切片以二甲苯脱蜡10min×2次，梯度酒精(100、 90、 85、 75)各洗1min，001mol/LPBS振动漂洗5min，微波抗原修复，入体积分数3的H2O2中处理15min以阻断内源性过氧化物酶，蒸馏水振动漂洗3min×3次；然后用正常山羊血清工作液封闭10min；入兔抗大鼠PDGF_B多克隆抗体(1100，武汉博士德公司，中国)4冰箱过夜；生物素化标记山羊抗兔IgG 37孵育15min；卵白素标记的辣根过氧化物酶复合物37孵育15min；各步抗体反应间均用001mol/LPBS漂洗3min