小球肾炎动物模型研究概述

1、小球肾炎动物模型研究概述    【摘要】     慢性肾小球肾炎（choronic glomerulonephritis）的发病机制有多种，设计模型时都是针对某一发病机制，使动物出现类似人类肾炎的情况而建模。本文对肾小球肾炎动物模型的造模机制、造模方法等方面进行了归纳和总结，简要阐明其中存在的问题。     【关键词】  肾小球肾炎；动物模型；造模机制；造模方法        肾小球肾炎

2、是由多种病理类型的原发性肾小球疾病发展而来的，以血尿、蛋白尿、高血压和水肿为主要临床表现的慢性疾病。目前认为肾小球肾炎是一种自身免疫反应性疾病，通过免疫作用而造成肾脏损害。    1  Heymann肾炎模型本模型是通过针对自身抗原的免疫复合物（IC）诱发而成，故称其为自身免疫复合物性肾炎（autologous immunecomplex，AIC）。Heymann肾炎模型根据是否由同种动物提供抗体分为主动型和被动型两种模型。主动型Heymann肾炎模型机制:动物由自体抗肾抗体或自体抗原抗体复合物刺激引起肾小球基膜产生免疫反应形成肾炎。被动型Heymann

3、肾炎模型机制：用甲种动物的肾皮质匀浆免疫乙种动物,使后者产生抗甲种动物的抗肾血清（抗肾抗体）,然后将这种抗肾血清注射给健康的甲种动物,而使其产生肾炎。主动型Heymann肾炎，孙永宁1用大鼠肾皮质匀浆加弗氏完全佐剂制备乳化液,同种大鼠腹腔注射次乳化液，2 ml/只，每周注射1次，共注射7次。现研究常用模型为被动型Heymann肾炎模型。其具体造模方法2为大鼠后足垫注射含6.5 mg免疫球蛋白的完全弗氏佐剂0.25 ml后，由大鼠尾静脉注射1.0 ml兔抗FXIA抗血清，qd，共2天，造模完成。这一实验模型与人类原发性膜性肾病非常相似，其特征为弥漫性基膜增厚伴钉突形成。  &

4、#160; 2  原位免疫复合物性肾炎模型该模型的特点是在肾小球基膜上直接形成免疫复合物。由细菌感染合并异种免疫蛋白联合作用造成模型。杨宏等3制作家兔原位免疫复合物肾小球肾炎模型:将大肠杆菌毒素和阳离子化牛血清白蛋白（BSA）溶于0.15 mol/L、pH值为7.2的磷酸缓冲液（PBS）溶液中,最终浓度为每1 ml溶液中含1 g大肠杆菌毒素和1 mg牛血清白蛋白,每只兔经耳缘静脉注射2 ml预免疫,7天后开始正式免疫造模:每只免疫兔每天经耳缘静脉给予阳离子化牛血清白蛋白20 mg（预先溶于PBS溶液中）,共7周。肾脏组织学检查显膜性肾小球肾炎的典型病变，故一般认为，膜性肾炎病理模型是

5、原位免疫复合物性肾炎模型的典型病理代表。    3  马杉肾炎此模型4又称Masugi肾炎、肾毒血清性肾炎、大鼠抗肾小球基膜（GBM）肾炎。其基本原理5是以A种动物的肾小球基膜作为抗原，与完全佐剂一起注射到B种动物身上，使之产生抗A种动物的肾小球基膜抗体，将含有此种抗体的B种动物血清给A种动物静脉注射，A种动物经过一定的潜伏期之后尿中出现明显蛋白，伴肾小球增生，终至新月体形成与完全纤维化改变，是利用异体抗GBM抗体直接诱导后产生的具有典型的人类新月体性肾炎病理变化的动物模型6。毕柳等7报道,英国Kazuhiro等用牛肾小球基膜免疫Wistar大鼠造成实验

6、性自身免疫抗肾小球基膜肾小球肾炎。伍小波等8用鼠肾皮质匀浆每周3次，每次10 ml免疫大耳白兔，在最后加强免疫后第11天，从兔耳缘静脉采血测效价，利用双向琼脂扩散法测定兔抗大鼠GBM-Ab的效价为116,收获血清-30 保存备用。正常兔IgG加等量完全弗氏佐剂皮下注射SD大鼠进行预免疫,预免疫后第7天和第8天后从大鼠尾静脉注射稀释一倍兔血清，剂量1 ml/只，连续两天为致病免疫。本模型的优点9是造模简单、阳性率高、重复性好，常被用于多发性肾炎的研究。缺点是病情反应较重，易导致部分动物中途死亡，同时在人的肾炎中，与这种模型相似的发病机制的病例很少，仅限肺出血-肾炎综合征（Goodpasture综

7、合征）。    4  系膜增殖性肾炎（MsPGN）模型机制有以下两种，由细菌感染合并异种免疫蛋白联合作用造成模型及单纯异种免疫蛋白造成模型。朱声永等10复制家兔膜增殖型肾炎模型（按北京医科大学第一附属医院肾炎研究室介绍的方法复制）,预免疫:每只家兔背部皮下注射牛血清白蛋白1 mg,每周1次,连续3次。第4周时每只家兔耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素1 g,共1次。正式免疫:第3周开始每只家兔耳缘静脉注射牛血清白蛋白25 mg,每日1次,每周6次,共6周,并于最后1周中血清白蛋白剂量加倍注射。按照吴衡生法11制备兔模型，每只兔第1天从耳静脉一次性注射牛血清白蛋白

8、250 mg/kg。第4周分别从兔耳静脉抽血做各项检查。第8周后处死动物，做肾脏病理检查，此病理改变与人类MsPGN极相似。由于兔模型费用昂贵，石志超等12制备大鼠血清白蛋白模型，即每只大鼠尾静脉注射1 g/kg结晶性小牛血清白蛋白，7天造模成功。目前,国际上普遍采用抗Thy-1抗体诱导的肾炎模型研究人类系膜增殖性肾小球肾炎的发病机制。“抗Thy-1抗体肾炎模型”可用抗Thy-1多克隆抗体或抗Thy-1单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）经静脉注射大鼠而建立。如蒋文功等13对单克隆抗体OX-7诱导的系膜增殖性肾小球肾炎大鼠模型的研究，经大鼠尾静脉单独注射单克隆抗体OX-

9、7（1 mg/kg）,第7天模型制作成功。抗Thy-1单抗引起的肾病可能于1周后缓解，故冯媛等14用单侧肾切除后3天按5 mg/kg体重静脉注射磷酸盐缓冲溶液溶解的Thy-1单抗1-22-3法造模。单纯性MsPGN模型制作方法简便易行，且病变稳定可靠，重复性好，因此越来越受到人们的重视。    5  血清病肾炎模型它是一种经典的免疫复合物肾病模型，包括急性血清病肾炎和慢性血清病肾炎两类：急性模型由一次性大剂量注入牛血清白蛋白抗原，使动物的免疫系统产生抗BSA抗体，并和循环中剩余的抗原结合，形成循环免疫复合物（CIC）滞留于肾脏。丁秋兰等15按Dixon方

10、法首先将牛血清白蛋白用生理盐水溶解。按250 mg/ml剂量1次家兔耳静脉注射，即成功制作急性兔肾毒血清性实验模型。慢性模型由多次注入牛血清白蛋白（每日1次），使动物体内抗原持续对免疫系统形成刺激，随着血清中抗BSA抗体的增多，可溶性CIC在循环中出现，分别沉积在肾小球毛细血管壁或系膜区，形成肾小球肾炎。杨解人等16选用新西兰大耳白兔,耳缘静脉注射C-BSA 10 mg,1次/d,共5周,第6周剂量加倍的方法成功制作家兔C-BSA肾炎模型。由于慢性血清病肾炎复制周期长、阳性率低，而急性血清病肾炎较慢性血清病肾炎模型方便省时且抗原消耗少，因而得到更为广泛的应用。   

11、; 6  氨基核苷肾病模型此模型又名嘌呤霉素肾病，属于肾毒性药物导致肾损伤造成的肾炎模型。现常用17，18注射盐酸阿霉素（ADR）、氯化汞、灌服碳酸锂等制造模型。彭蕴茹等19用盐酸阿霉素复制模型，大鼠一次性尾静脉注射盐酸阿霉素7.5 mg/kg，于第10天获得满意造模效果。    7  其他肾炎模型如IgA肾病模型、局灶性节段性肾小球硬化模型、狼疮性肾炎模型等。20世纪70年代末Rifai等用牛血清白蛋白（BSA）作为载体交联二硝基苯酚（DNP）6；20世纪80年代初Isaacs等用带不同电荷的右旋糖酐经腹腔静脉注射，结果均诱发小鼠IgA肾病。刘志红等20每周一次，连续3周给大鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）0.4 mg/kg成功地复制出IgA肾病模型。局灶性节段性肾小球硬化模型（嘌呤霉素一侧肾切除嘌呤霉素法，或5/6肾切除等）。狼疮性肾炎模型包括自发性肾炎小鼠模型及慢性移植物抗宿主病模型。这些肾炎模型由于临床病理类型的发病较少见或模型制作的繁琐复杂性而应用较少。综上所述,肾小球肾炎动物模型的研究已经越来越细致和深入。其中马杉肾小球肾炎模型因