妇科感染常见病原菌及检测方法（课堂PPT）

1、1 2妇科感染常见疾病妇科感染常见疾病阴道病阴道病/ /阴道炎阴道炎尿道炎尿道炎子宫颈炎子宫颈炎盆腔感染盆腔感染 子宫内膜炎子宫内膜炎 输卵管卵巢脓肿输卵管卵巢脓肿 输卵管炎症输卵管炎症3妇科感染实验室检查的意义妇科感染实验室检查的意义很多妇科感染症状、体征有很多相似之很多妇科感染症状、体征有很多相似之处。处。临床诊断本身既不敏感，也不特异临床诊断本身既不敏感，也不特异。 实验室诊断可以：实验室诊断可以：明确病原微生物，使治疗更具针对性；明确病原微生物，使治疗更具针对性；提高患者治疗依从性；提高患者治疗依从性；使患者更有可能遵从性伴侣告知使患者更有可能遵从性伴侣告知。4病例一病例一患者，女性，

2、患者，女性，2424岁，已婚，孕岁，已婚，孕2525周。外阴瘙周。外阴瘙痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符, ,外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。考虑什么病？进一步做什么检查？考虑什么病？进一步做什么检查？5阴道炎阴道炎正常情况下阴道内寄居有大量需氧菌及正常情况下阴道内寄居有大量需氧菌及厌氧菌，形成厌氧菌，形成正常的阴道菌群正常的阴道菌群。任何原因将阴道菌群生态平衡打破，可任何原因将阴道菌群生态平衡打破，可形成形成条件致病菌，引起阴道炎条件致病菌，引起阴道炎。 阴道粘膜生态系统阴道粘膜生态系统6阴道炎阴道炎临床

3、常见有：细菌性阴道病、念珠菌性阴临床常见有：细菌性阴道病、念珠菌性阴道炎、滴虫性阴道炎。道炎、滴虫性阴道炎。吴文湘, 廖秦平. 阴道炎的诊治进展J. 中国实用妇科与产科杂志, 2009(12):949-952.7阴道炎相关病原实验室检查阴道炎相关病原实验室检查酵母菌酵母菌（ pH4.5 ） 盐水湿片和盐水湿片和 10KOH 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子 置于置于 0.5mL 生理盐水或转生理盐水或转运拭子运拭子 ，室温室温， 2h定量革兰染色定量革兰染色 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子 转运拭子送检，转运拭子送检，室温室温， 12hDNA 杂交探针杂交探针 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子室温，室温

4、，7d毛滴虫毛滴虫（ pH4.5 ） 盐水湿片盐水湿片 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子 置于盐水送检置于盐水送检， 室温室温， 快速抗原检查快速抗原检查 阴道上皮阴道上皮/分泌物拭子分泌物拭子 转运拭子或盐水送检，转运拭子或盐水送检， 室室温，温， 24hDNA 杂交探针杂交探针 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子室温，室温，7d培养培养 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子 直接放入直接放入 InPouch TV 培养培养系统送检系统送检室温，室温， 48h核酸扩增实验核酸扩增实验阴道拭子、宫颈拭子、尿液、阴道拭子、宫颈拭子、尿液、液基细胞学标本、尿道拭子、液基细胞学标本、尿道拭子、直肠拭子、咽拭子直肠拭子

5、、咽拭子室温，室温，7d8病例病例1患者，女性，患者，女性，2424岁，已婚，孕岁，已婚，孕2525周。外阴瘙痒一周。外阴瘙痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符, ,外阴潮外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。红、充血，见大量黄色脓性分泌物。医生：医生： 根据病史及临床表现可初步诊断为根据病史及临床表现可初步诊断为。，以明确病原学诊断。，以明确病原学诊断。9念珠菌性阴道炎念珠菌性阴道炎主要病原菌为：主要病原菌为： 白色假丝酵母菌白色假丝酵母菌 约占约占80%-90% 光滑假丝酵母菌光滑假丝酵母菌 热带假丝酵母菌热带假丝酵母菌 近平滑假丝酵母菌近平滑假丝酵母菌

6、约占约占10%-20%10念珠菌性阴道炎的实验室诊断念珠菌性阴道炎的实验室诊断1. pH 4.51. pH 4.51. pH 4.52. 2. 盐水湿片盐水湿片+10% KOH+10% KOH3.3.定量革兰染色定量革兰染色Nugent评分评分4. DNA4. DNA杂交探针杂交探针线索细胞线索细胞KOH氢氧化钾氢氧化钾19盐水湿片盐水湿片线索细胞线索细胞是诊断是诊断BVBV的最敏感特异的指的最敏感特异的指标标。20胺试验胺试验将一滴阴道分泌物滴于玻片上，再加一滴将一滴阴道分泌物滴于玻片上，再加一滴10KOH，可闻到氨味或鱼腥样气味，即，可闻到氨味或鱼腥样气味，即胺试验阳性。胺试验阳性。10%

7、KOH氢氧化钾氢氧化钾21定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分定量革兰染色是定量革兰染色是BV 诊断最特异的检查。诊断最特异的检查。形态类别每个油镜视野菌体数 / 分值得分011 - 55 -3030加德纳菌加德纳菌/普雷沃菌普雷沃菌(革兰染色不定、球杆革兰染色不定、球杆菌菌)01234动弯杆菌动弯杆菌01234乳酸杆菌乳酸杆菌4321022定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分乳酸杆菌革兰染色乳酸杆菌革兰染色23定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分阴道加德纳菌革兰染色阴道加德纳菌革兰染色24定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分动弯杆菌革兰染色动弯杆菌革兰

8、染色25定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分线索细胞革兰染色线索细胞革兰染色26定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分分数解释标准：分数解释标准： 0-3 分分 正常正常 4-7 分分 中介中介 7-10 7-10 分分 细菌性阴道炎细菌性阴道炎27定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分乳酸杆菌乳酸杆菌0分，上皮细胞周围非常清楚。分，上皮细胞周围非常清楚。评分：评分：0分分28定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分乳酸杆菌乳酸杆菌0分，少量杂菌，见白细胞和菌丝。分，少量杂菌，见白细胞和菌丝。评分：评分：1分分 诊断：诊断：BV阴性，但诊断为阴性，但诊断为VVC

9、29定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分乳酸杆菌乳酸杆菌2分，加德纳菌分，加德纳菌/普雷沃菌等普雷沃菌等 3分，分，动弯杆菌动弯杆菌 1分。分。评分：评分：6分分 诊断：诊断：BV中间型中间型30定量革兰染色定量革兰染色 Nugent评评分分乳酸杆菌乳酸杆菌3分，加德纳菌分，加德纳菌/普雷沃菌等普雷沃菌等 3分，动分，动弯杆菌弯杆菌 4分。分。评分：评分：10分分 诊断：诊断：BV31阴道毛滴虫阴道毛滴虫 阴道的致病性厌氧寄生原虫，虫体为阴道的致病性厌氧寄生原虫，虫体为 8-45m，呈梨形或椭圆形，无色透明，大小为，呈梨形或椭圆形，无色透明，大小为白细胞的白细胞的2-3倍。倍。32毛

10、滴虫性阴道炎的实验室诊断毛滴虫性阴道炎的实验室诊断1. pH 4.51. pH 4.52. 2. 盐水湿片盐水湿片3.3.快速抗原检查快速抗原检查4. DNA4. DNA杂交探针杂交探针5. 5. 培养培养6. 6. 核酸扩增实验核酸扩增实验33盐水湿片盐水湿片34革兰染色革兰染色35快速抗原检查快速抗原检查检测阴道毛滴虫特定的抗原检测阴道毛滴虫特定的抗原已有商品化试剂已有商品化试剂最优试验条件并不需要活的微生物最优试验条件并不需要活的微生物36培养培养37核酸扩增试验核酸扩增试验APTIMA Trichomonas vaginalis (ATV) test（Gen-Probe, Inc. S

11、an Diego, CA）是近期）是近期FDA 批准的检查，既可用于女性批准的检查，既可用于女性TV 的筛的筛检，也可用于诊断。检，也可用于诊断。可以使用多种标本类型。可以使用多种标本类型。一些实验室也可通过比对，验证自己的一些实验室也可通过比对，验证自己的PCR方法。方法。38病例二病例二患者，女性，患者，女性，4040岁，已婚，阴道分泌物增多，岁，已婚，阴道分泌物增多，伴腰酸，偶有性生活后出血伴腰酸，偶有性生活后出血2 2年。检查外阴年。检查外阴正常，宫颈肥大，正常，宫颈肥大，度糜烂，接触性出血。度糜烂，接触性出血。考虑什么病？进一步做什么检查？考虑什么病？进一步做什么检查？39子宫颈炎子

12、宫颈炎子宫颈可因各种致病因素的侵袭而发生炎症，子宫颈可因各种致病因素的侵袭而发生炎症，有急性和慢性两种。有急性和慢性两种。急性宫颈炎急性宫颈炎沙眼衣原体、淋病奈瑟菌沙眼衣原体、淋病奈瑟菌慢性宫颈炎慢性宫颈炎性传播病原体性传播病原体：沙眼衣原体、：沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、单纯疱疹病毒淋病奈瑟菌、单纯疱疹病毒内源性病原体内源性病原体：葡萄球菌、：葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌等；链球菌、大肠杆菌等；部分与引起阴道炎的病原菌部分与引起阴道炎的病原菌相同相同40尿道炎尿道炎是指尿道黏膜的炎症是指尿道黏膜的炎症 。多为致病菌逆行侵。多为致病菌逆行侵入尿道引起。入尿道引起。淋病性尿道炎淋病性尿道炎 淋病奈瑟菌

13、淋病奈瑟菌非淋病性尿道炎非淋病性尿道炎 沙眼衣原体、解脲支原体、沙眼衣原体、解脲支原体、阴道毛滴虫、嗜血短杆菌、阴道毛滴虫、嗜血短杆菌、单纯疱疹病毒最常见单纯疱疹病毒最常见非特异性尿道炎非特异性尿道炎大肠埃希杆菌、链球菌属及大肠埃希杆菌、链球菌属及葡萄球菌属葡萄球菌属41尿道炎尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查宫颈炎相关病原实验室检查沙眼衣原体沙眼衣原体 核酸扩增实验核酸扩增实验尿液、宫颈内、阴道和尿液、宫颈内、阴道和/或尿或尿道拭子（直肠、咽部、结膜、道拭子（直肠、咽部、结膜、液基细胞学标本）液基细胞学标本） 实验室提供转运装置，实验室提供转运装置， 室温，室温， 2d 杂交探针杂交探针 宫颈

14、内或尿道拭子宫颈内或尿道拭子 实验室提供转运装置，实验室提供转运装置， 室温，室温， 2d 培养培养宫颈内、尿道、结膜、宫颈内、尿道、结膜、 NP、咽、直肠拭子咽、直肠拭子 实验室提供转运装置，实验室提供转运装置， 4冷藏；冷藏； 2h 直接免疫荧光染色直接免疫荧光染色结膜拭子结膜拭子 转运培养基，室温，转运培养基，室温，2h淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 革兰染色革兰染色 尿道分泌物尿道分泌物 直接涂片或将拭子置于转直接涂片或将拭子置于转运培养基，室温，立即运培养基，室温，立即核酸扩增实验核酸扩增实验尿液、宫颈内、阴道和尿液、宫颈内、阴道和/或尿或尿道拭子（直肠、咽部、结膜、道拭子（直肠、咽部、结膜、

15、液基细胞学标本）液基细胞学标本） 实验室提供转运装置，实验室提供转运装置， 室温，室温， 2d 杂交探针杂交探针 宫颈内或尿道拭子宫颈内或尿道拭子 实验室提供转运装置，实验室提供转运装置， 室温，室温， 2d 培养培养 宫颈内、尿道、结膜、宫颈内、尿道、结膜、 NP、咽、直肠拭子咽、直肠拭子 转运培养基，转运培养基， 室温，室温， 1h，不要冷藏不要冷藏 标本标本42尿道炎尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查宫颈炎相关病原实验室检查阴道毛滴虫阴道毛滴虫 盐水湿片盐水湿片 宫颈内或尿道拭子宫颈内或尿道拭子 置于置于0.5mL盐水，盐水， 30min-2h 快速抗原检查快速抗原检查宫颈内拭子宫颈内拭子

16、 实验室提供转运装置，实验室提供转运装置， 室温，室温， 24h 杂交探针杂交探针宫颈内或阴道拭子宫颈内或阴道拭子 实验室提供转运装置，实验室提供转运装置， 室温，室温， 7d 培养培养宫颈内或尿道拭子宫颈内或尿道拭子 直接接种在直接接种在InPouch TV培养系统，培养系统，2-5d核酸扩增实验核酸扩增实验阴道、宫颈内拭子，尿，液基阴道、宫颈内拭子，尿，液基细胞学标本，尿道、直肠、咽细胞学标本，尿道、直肠、咽部拭子部拭子实验室提供转运装置，实验室提供转运装置， 室温，室温， 2d HSV直接免疫荧光染色直接免疫荧光染色病变基底部刮取病变基底部刮取 床边制片，室温，床边制片，室温，24h培养

17、培养 病变基底部刮取病变基底部刮取 置于置于VTM/UTM，室温或，室温或置于冰上，置于冰上，2h核酸扩增实验核酸扩增实验病变基底部刮取或分泌物拭子病变基底部刮取或分泌物拭子 实验室提供转运装置实验室提供转运装置43病例二病例二患者，女性，患者，女性，4040岁，已婚，阴道分泌物增多，岁，已婚，阴道分泌物增多，伴腰酸，偶有性生活后出血伴腰酸，偶有性生活后出血2 2年。检查外阴年。检查外阴正常，宫颈肥大，正常，宫颈肥大，度糜烂，接触性出血。度糜烂，接触性出血。医生：医生：根据临床表现初步诊断为根据临床表现初步诊断为。取。取，嘱病人，嘱病人送检送检（注意保温），以明确感染病原体。（注意保温），以明

18、确感染病原体。44淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌革兰染色革兰染色 为革兰阴性双球菌，似肾形或咖啡豆状，常为革兰阴性双球菌，似肾形或咖啡豆状，常成双排列，凹面相对。成双排列，凹面相对。 急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒细急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒细胞内；慢性淋病患者的淋球菌多分布在细胞外。胞内；慢性淋病患者的淋球菌多分布在细胞外。 简便、快速，可做出初步诊断。简便、快速，可做出初步诊断。仅对男性患仅对男性患者进行涂片革兰染色者进行涂片革兰染色。 45淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌细胞内革兰阴性双球菌细胞内革兰阴性双球菌对对GC 特异性达特异性达95细胞外革兰阴性双球菌细胞外革兰阴性双球菌对对GC 特异

19、性达特异性达10-2946培养培养诊断淋病的重要手段诊断淋病的重要手段接种到接种到选择培养基选择培养基，置于，置于36、含、含5-10% CO2 ，湿润湿润环境中培养。环境中培养。如果床边直接接种标本到选择培养基，加如果床边直接接种标本到选择培养基，加CO2 药片形成气体环境，培养敏感性会更好。药片形成气体环境，培养敏感性会更好。47培养培养初代培养生长缓慢，初代培养生长缓慢，24小时后可形成灰色小时后可形成灰色/湿湿润、半透明的小菌落（直径润、半透明的小菌落（直径0.5-1mm）。）。氧化酶阳性、触酶阳性、葡萄糖产酸试验阳性氧化酶阳性、触酶阳性、葡萄糖产酸试验阳性且仅分解利用葡萄糖。且仅分解

20、利用葡萄糖。图片图片by陈东科陈东科48核酸扩增试验核酸扩增试验已有商品化试剂盒。已有商品化试剂盒。优点是快速、准确，缺点是试验设备要求优点是快速、准确，缺点是试验设备要求高。高。淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌DNA 在感染成功治疗后，在标在感染成功治疗后，在标本中仍可保留本中仍可保留3周之久，所以不能作为治疗周之久，所以不能作为治疗评估指标。评估指标。49杂交探针杂交探针目前目前FDA 已有批准的已有批准的GC的杂交试验试的杂交试验试剂盒。剂盒。不可针对尿标本。不可针对尿标本。50病例三病例三病人，女，病人，女，24岁，主诉为持续岁，主诉为持续3天的轻度排天的轻度排尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴

21、尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛，化脓性宫颈分泌物。压痛，化脓性宫颈分泌物。考虑什么病？进一步做什么检查？考虑什么病？进一步做什么检查？51盆腔炎盆腔炎盆腔炎症性疾病是女性上生殖道一系列疾盆腔炎症性疾病是女性上生殖道一系列疾病的总称。病的总称。包括：包括： 子宫内膜炎子宫内膜炎 输卵管卵巢脓肿输卵管卵巢脓肿 输卵管炎症输卵管炎症 盆腔腹膜炎盆腔腹膜炎52盆腔炎致病菌盆腔炎致病菌盆腔炎外源性病原体外源性病原体内源性病原体内源性病原体主要为性传播疾病主要为性传播疾病病原体：淋病奈瑟病原体：淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、菌、沙

22、眼衣原体、支原体等支原体等来自于原寄生于阴道来自于原寄生于阴道的正常菌群，包括：的正常菌群，包括：需氧菌和厌氧菌需氧菌和厌氧菌53内源性病原体内源性病原体需氧菌及兼性厌氧菌需氧菌及兼性厌氧菌： 金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、 阴道加德纳菌等阴道加德纳菌等厌氧菌：厌氧菌： 脆弱拟杆菌、消化链球菌、普雷沃菌、真杆脆弱拟杆菌、消化链球菌、普雷沃菌、真杆菌等菌等 感染特点：容易形成盆腔脓肿、感染性血栓感染特点：容易形成盆腔脓肿、感染性血栓静脉炎，脓液有粪臭并有气泡静脉炎，脓液有粪臭并有气泡54盆腔炎相关病原实验室检查盆腔炎相关病原实验室检查混合厌氧菌混合厌氧菌

23、阴道菌从阴道菌从肠杆菌科、肠杆菌科、链球菌、链球菌、支原体支原体血培养和血培养和AST来评估少来评估少见病原见病原血，血，20mL注入注入2瓶瓶，静脉穿刺采集静脉穿刺采集床边注入血培养瓶，床边注入血培养瓶，室温，室温，1h革兰染色革兰染色需氧和厌氧培养需氧和厌氧培养子宫内膜，输卵管子宫内膜，输卵管-卵巢脓肿和卵巢脓肿和/或输卵或输卵管内容物管内容物置入或注入无菌厌氧置入或注入无菌厌氧容器，室温，容器，室温，30min子宫内膜炎组织学证据子宫内膜炎组织学证据子宫内膜活检子宫内膜活检无菌容器，室温，无菌容器，室温，30min福尔马林容器，室温，福尔马林容器，室温，30min-4h淋病奈瑟菌淋病奈瑟

24、菌沙眼衣原体沙眼衣原体阴道毛滴虫阴道毛滴虫核酸扩增试验核酸扩增试验尿液，宫颈内拭子尿液，宫颈内拭子实验室提供转运装置，实验室提供转运装置，室温，室温，2dHIVHIV EIA抗体抗体血清血清促凝管，室温，促凝管，室温，2h55病例三病例三病人，女，病人，女，24岁，主诉为持续岁，主诉为持续3天的轻度排天的轻度排尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛，中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛，化脓性宫颈分泌物。化脓性宫颈分泌物。医生：医生：根据临床表现初步诊断为根据临床表现初步诊断为。进一步送检至少一套血培养，抽。进一步送

25、检至少一套血培养，抽取脓肿置于厌氧容器尽快送检，并取宫取脓肿置于厌氧容器尽快送检，并取宫颈内拭子送检，必要时取子宫内膜活检，颈内拭子送检，必要时取子宫内膜活检，以明确感染病原体。以明确感染病原体。56盆腔炎相关厌氧菌培养流程 分离培养分离培养挑取菌落挑取菌落需氧培养需氧培养厌氧培养厌氧培养厌氧培养厌氧培养生长生长不生长不生长生长生长专性厌氧菌：专性厌氧菌：做第二次耐氧试验做第二次耐氧试验形态染色形态染色 菌落特征菌落特征 生化反应生化反应 药敏鉴定药敏鉴定 气相色谱气相色谱厌氧（厌氧（+）需氧（需氧（-）兼性厌氧菌兼性厌氧菌标本标本肉眼观察肉眼观察染色镜检染色镜检57直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检 在接种时做涂片，革兰染色并镜检：在接种时做涂片，革兰染色并镜检：观察脓细胞的有无及特殊情况，细菌与细观察脓细胞的有无及特殊情况，细菌与细胞之间的相关性。胞之间的相关性。观察有无细菌，微生物的类型和大概的数观察有无细菌，微生物的类型和大概的数量以及有无芽孢、形状和位置、着色及菌量以及有