第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析

1、第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析特殊杂质与检查 3结构与性质1鉴别试验2含量测定含量测定4又称又称: :解热镇痛抗炎药解热镇痛抗炎药（NSAID），阿司），阿司匹林类药物匹林类药物 具有解热、镇痛作用具有解热、镇痛作用 多数有抗炎、抗风湿作用多数有抗炎、抗风湿作用 共同的作用基础共同的作用基础 抑制前列腺素（PGs）的）的生物合成性质性质 （一）物理性质（一）物理性质 （1 1）固体）固体 具有一定的熔点具有一定的熔点 （2 2）溶解性）溶解性 游离芳酸类药物几乎游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶碱金属盐及其它盐易溶于

2、水，难溶于有机溶剂。于有机溶剂。 （二）化学性质 1. 酸性：芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在36之间，属中等强度的酸或弱酸； 邻位有X、NO2、OH等吸电子取代基存在使酸性增强；若羧基不直接与苯环相连，属于脂肪酸类，酸性较弱；酰胺结构，无明显酸性。 2. 水解性：酯键、酰胺键可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。 3. UV 3. UV 4. 取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别。具芳伯氨基的药物可用重

3、氮化偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。 第二节 鉴别试验 一、FeCl3反应 具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物 OHOHOOOOFeOH+ FeCl3+ H2O+ 3HCl紫堇色阿司匹林：紫堇色阿司匹林：紫堇色双水杨酯：紫色双水杨酯：紫色二氟尼柳：深紫色二氟尼柳：深紫色均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色色水杨酸反水杨酸反应应pH4-6 对乙酰氨基酚与三氯化铁显蓝紫色HONCH3OH对乙酰胺基酚 ParacetamolFeCl3+Fe1/3ONCH3OH+HCl蓝紫色NSOHCH3NOONOH吡罗昔康 PiroxicamNS

4、OHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康 Meloxicam显玫瑰红色显玫瑰红色显淡紫色显淡紫色酚羟基反酚羟基反应应二、缩合反应显色CH3HOOO酮洛芬+NHNO2NO2NH2CH3HOON NO2NNO2橙红色H2SO4-H2OH二苯甲酮结构二苯甲酮结构 三、重氮化-偶合反应 对乙酰氨基酚具有潜在的芳伯氨基，在酸性条件下反应可生成对氨基酚，再与亚硝酸钠进行重氮化反应，之后再与碱性-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。NHCOCH3HO+HCl+H2ONH2HOHCl + CH3COOHN2ClHO+2H2ONH2HOHClHNO2+N2ClHO+OHNaOHOHNNOH红色偶氮化合物水解反应水解反应产

5、生芳伯产生芳伯胺胺芳伯胺重氮化芳伯胺重氮化偶合反应偶合反应重氮化重氮化- -偶合反应偶合反应OCOCH3COONHCOCH3+3H2OHCl贝诺酯HONH2HCl+OHCOOHNaNO2,2HClHON2+Cl-OHNaOHOHNNOH橙红色四、四、氧化反应氧化反应甲芬那酸H2SO4深蓝色(O)K2Cr2O7随即变为棕绿色吲哚美辛H2SO4紫色(O)K2Cr2O7吲哚美辛HCl 绿色(O)K2Cr2O7 NaNO2放置后渐变黄色五、水解反应COOHOCOCH3Na2CO3COONaOHCH3COONa+CO2+H2SO4COOHOHH2SO4CH3COOH阿司匹林阿司匹林白色水杨酸白色水杨酸醋

6、酸醋酸可溶于醋酸铵（测定熔点），水杨酸白色双水杨酯稀盐酸NaOH 六、特征元素反应： 分子中含有氯、硫等元素可以转化为氯化物或硫化物进而进行鉴别。 如双氯芬酸钠与碳酸钠炽灼灰化，加水煮沸、滤过后，显氯化物的鉴别反应。 美洛昔康经高温分解产生H2S气体，与醋酸铅生成黑色硫化铅沉淀。（1） 测定测定max ；min。 例如：布洛芬用例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备溶液制备0.25mg/ml； max ； 265nm, 273nm; min。245nm, 271nm。（2） 测定测定max 例如：双氯芬酸钠，例如：双氯芬酸钠，20g/ml max =276nm; （3） 在在max 处测定一定

7、浓度供试液的吸收度处测定一定浓度供试液的吸收度A 。 例如：例如： 20g/ml甲酚钠酸甲醇液在甲酚钠酸甲醇液在max =279nm，A=0.690.74； 在在max =350nm，A=0.560.60。 1 1、紫外吸收光谱法、紫外吸收光谱法七、光谱法七、光谱法（4） 在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度 比值法）比值法） 例如：对氨基水杨酸钠例如：对氨基水杨酸钠10g/ml; A265/A299 = 1.501.56 再例如：二氟尼柳再例如：二氟尼柳20g/ml（盐酸乙醇液）（盐酸乙醇液）; A251/A315 = 4.24.6 2、 IR

8、：阿司匹林阿司匹林-COOH-OH-COOHPh-C邻位取代PhN-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚 八、色谱法供试品保留时间供试品保留时间对照品保留时间对照品保留时间第三节第三节 特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法一、阿司匹林和双水杨酯中游离水杨酸及有关物质的检查一、阿司匹林和双水杨酯中游离水杨酸及有关物质的检查ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,7075 C。ASAOH-CO2副产物水杨酸COOHOOOH双水杨酯COOHOHCOOHOHHOOOCOOHOOHOOHCOOHCOOHHOOOCOOHHOCOOHOO+COOHOO

9、OCOOH-+HPLC法法淡黄、淡黄、红棕、红棕、深棕色深棕色1、阿司匹林中游离水杨酸的检查 来源：原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水解产生（贮存过程中水解产生） 用用1%1%冰醋酸甲醇冰醋酸甲醇溶液制备供试品，溶液制备供试品，以防阿司匹林水以防阿司匹林水解解2 2、有关物质的检查、有关物质的检查OH(CH3CO)2OOCOCH3+OCOCH3COOHOCOCH3COO+OHCOOHOHCOO醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯HPLC法法3、双水杨酯中游离水杨酸的检查 水杨酸+Fe(NO3)3 显色 在=530nm处测定吸光度A，规定供试品溶液的吸光度不得大于水杨酸对照溶液的吸光度。二、甲芬

10、那酸中2,3-二甲基苯胺的检查甲芬那酸ClCOOHH3CCH3NH2NHCOOHH3CCH3+CuGC法法三、二氟尼柳中有关物质的检查FFNH2FFCOCH3FFOCOCH3FFOHFFOHCOOHFF+Cu偶联乙酰化(CH3CO)2O,AlCl3氧化H2O2水解OH/H-+羧化CO2,CH3ONaTLCHPLC所谓物质A和物质B的检查是采用自身对照法进行检查的相同药物,不同浓度,相互比较,主点限量四、萘普生的有关物质检查四、萘普生的有关物质检查MeOMeOCH3O酰化羧化MeOOHCH3COOH催化氢化MeOCH3COOH2-萘甲醚6-甲氧基-2-萘乙酮2-羟基-2-(6-甲氧基-2-萘基)

11、丙酸萘普生HPLC五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺HPLCClNO2NH2HOHONO2HONHCOCH3水解还原酰化ClNHCOCH3一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法苯甲酸苯甲酸pKa 4.20水杨酸水杨酸pKa 2.98酸性较强酸性较强COHOHO羧酸邻位羧酸邻位-OH-OH，吸电子基团，使酸性增加；，吸电子基团，使酸性增加；分子内氢键，更增加了其极性分子内氢键，更增加了其极性直接滴定Aspirin、丙磺舒丙磺舒(Ch.P. BP. JP等等) 苯甲酸苯甲酸(Ch.P等等)均均采用本法采用本法1.直接滴定法直接滴定法中性乙醇COOHOCOCH3NaOH20以下COONaOCOCH3H2O

12、阿司匹林在水中微溶，易溶于乙醇，固使用阿司匹林在水中微溶，易溶于乙醇，固使用乙醇为溶剂。乙醇为溶剂。中性乙醇：中性乙醇：对指示剂对指示剂( (酚酞酚酞) )而言为中性，而言为中性， 可消除滴定误差可消除滴定误差2 2、剩余量滴定法、剩余量滴定法NSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康 Meloxicam本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几乎不溶，在丙酮中微溶。所以乎不溶，在丙酮中微溶。所以CHP使使用用定量过量的氢氧化钠滴定液定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，溶解后，再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。烯醇式结烯醇式结构构:酸性酸

13、性3.水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法OCOCH3COOH2NaOHH2OOHCOONaCH3COONa2NaOH H2SO4 Na2SO4 2H2O取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4USP32-NF27（1）水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法含量% = ( V0-V) FTW 100%T = 0.5 12180.16 = 45.04 (mg/ml)滴定度滴

14、定度滴定度滴定度浓度浓度待测物反应待测物反应系数系数滴定液物反滴定液物反应系数应系数滴定液物摩滴定液物摩而质量而质量空白反应体空白反应体积积样品测定消样品测定消耗体积耗体积样品称重量样品称重量（2）.两步滴定法两步滴定法Aspirin片HOCCOOHCH2COOHCH2COOH枸橼酸枸橼酸HOCHCOOHCHCOOHHO酒石酸酒石酸水解产物水解产物水杨酸水杨酸HAc第一步：NaOH滴定所有的酸滴定所有的酸：酸性水解产物和酸性稳定剂及阿司匹林的游离羧基。第二步：水解后剩余滴定水解后剩余滴定取本品取本品1010片，精密称定，研细，精密称取适量片，精密称定，研细，精密称取适量( (约相当于约相当于阿

15、司匹林阿司匹林0.3g)0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇，置锥形瓶中，加中性乙醇( (对酚酞指示剂对酚酞指示剂显中性显中性)20ml)20ml，振摇使，振摇使ASAASA溶解，加酚酞指示液溶解，加酚酞指示液3 3滴，滴，滴加滴加NaOHNaOH液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)至显粉红色，至显粉红色，再精密加再精密加NaOHNaOH液液(0.1mol/L)40ml(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热，置水浴上加热15min15min，并时时振摇，迅，并时时振摇，迅速放冷至室温，速放冷至室温，用用H H2 2SOSO4 4液液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴定滴定，并将滴定的并将滴定的结果用空白试验校正。结果用空白试验校正。每每1ml1ml的的NaOHNaOH液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于18.02mg18.02mg的的C C9 9H H8 8OO4 4COONaOCOCH3NaOHCOONaOHNaAc H2O2NaOH H2SO4