食品中维生素C含量的测定

1、食品中维生素 C 的测定摘要:维生素 C (抗坏血酸是一种己糖醛基酸,有四种异构体,其中 L-(+ -抗坏 血酸的活性最强,极易被氧化。它在细胞氧化、胶原蛋白的形成、铁离子由血浆到组织 器官中的转运、 肌体免疫及抗体形成中起着重要的作用。 测定维生素 C 常用的方法有 2, 6-二氯靛粉滴定法、 2, 4-二硝基苯肼法、荧光法及高效液相色谱法、极谱法等。 2, 6-二氯靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸, 该法简便、 快速, 但易受其他还原物质干扰、 对深色样液难辨终点; 荧光法、 高效液相色谱法及极谱法对实验仪器和技术的要求比较 高,综合各方面本文采用 2, 4-二硝基苯肼法,利用分光光度计分

2、别测定橙汁、猕猴桃 汁、梨汁的汁,再根据标准曲线计算其维生素 C 含量。关键词:维生素 C 、 2, 4-二硝基苯肼法、分光光度计、标准曲线前言:本文介绍了靛粉滴定法、高效液相色谱法及 2, 4-二硝基苯肼法这三种维生素 C 含量的测定方法, 通过分析比较并结合实验室的设备条件及对操作技术的要求, 采用 2, 4-二硝基苯肼法。先测总抗坏血酸,总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖 酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,然后与 2, 4-二硝基苯 肼作用,生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比,将红色脎溶于硫酸后进行比 色,由标准曲线计算样品中总 Vc 。用酸处理过的活

3、性炭把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸, 再继续氧化为二 酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与 2, 4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎,其成色的强度与二 酮古乐糖酸浓度呈正比,可以比色定量。由于橙汁中的 Vc 含量较高,所以所测样品为 1:10样液;梨的 Vc 含量较低,所 以测其原液;而猕猴桃中 Vc 含量也较高,为了实验的完整性及对照性,测定猕猴桃原 液及 1:10样液。实验方案:方案一:2, 6-二氯靛酚滴定法水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果,用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取 20g ,加入 20ml 2%草酸,用研钵研磨,四层纱布过滤,滤液备用。纱布可用少量 2%草酸洗几次,合并滤液,滤

4、液总体积定容至 50ml 。准确吸取标准抗坏血酸溶液 1ml 臵 100ml 锥形瓶中,加 9ml 1%草酸,用微量滴定管以 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色,并保持 15s 不褪色,即达终点。由所用 染料的体积计算出 1ml 染料相当于多少毫克抗坏血酸(取 10ml 1%草酸作空白对照, 按以上方法滴定 。准确吸取滤液两份,每份 10ml, 分别放入 2个锥形瓶内,滴定方法同前。另取 10ml 1%草酸作空白对照滴定。方案二:高效液相色谱法高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组 成。储液器中的流动相被高压泵打入系统 , 样品溶液经进样器进入流动

5、相 , 被流动相载入 色谱柱 (固定相 内 , 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数 , 在两相 中作相对运动时 , 经过反复多次的吸附 - 解吸的分配过程 , 各组分在移动速度上产生较 大的差别 , 被分离成单个组分依次从柱内流出 , 通过检测器时 , 样品浓度被转换成电信 号传送到记录仪 , 数据以图谱形式打印出来。方案三:2, 4-二硝基苯肼法实验仪器与药品 :吸量管、容量瓶、分光光度计、保温箱、比色管多支、草酸、活 性炭、硫脲、 2, 4-二硝基苯肼、 85%H2SO 4、橙汁、新鲜猕猴桃一个、梨实验步骤:1. 样品处理1.1称取猕猴桃 122g 加等量 2%草酸 于高速捣

6、碎机捣碎 取匀浆 20g 用 1%草酸 定容 100ml 过滤 取滤液 10ml 加 1%草酸 10ml 原液 配臵 1:10样品溶液1.2取一定量橙汁 用 1%草酸定容 100m l 配臵 1:10样品溶液1.3称取一定量梨 加等量 2%草酸 于高速捣碎机捣碎 取匀浆 20g 用 1%草酸定容100ml 过滤 取滤液 10ml 加 1%草酸 10ml 原液2. 样品还原型抗坏血酸的氧化处理加少量活性炭 用玻棒搅拌 1分钟 静臵过滤 各取滤液 2ml 于样品管和样品空白管 各管加入 1d 硫脲溶液3. 呈色反应于样品管中加入 2, 4-二硝基苯肼 0.5ml 分别于两个管加盖 于 37 保温箱

7、 2.5小时 取出后样品管放入冰水中 样品空白管取出后冷至室温 在样品空白管加入 2, 4-二 硝基苯肼 0.5ml 样品管和空白管都于冰浴中4. 85%硫酸处理滴加 85%H2SO 42ml 于各管中 边滴边摇 防止温度升高炭化后呈黑色 冰浴中 30min 后取出 室温下放臵 30min5. 样品比色测定用 1cm 比色皿,以空白液调零点,在 540nm 测吸光值,从标准曲线上查出相应的含 量。6. 标准曲线的绘制试管号 0 1 2 3 4 5方案讨论:以上三种方案都是常用的维生素 C 含量的测定方案,其中 2, 6-二氯靛酚滴定法测定的 是还原型抗坏血酸, 该法简便、 快速, 但易受其他还

8、原物质干扰、 对深色样液难辨终点; 而高效液相色谱法对实验仪器和技术的要求比较高, 不适合实验室的操作环境。 所以综 合各方面考虑本文采用 2, 4-二硝基苯肼法, 利用分光光度计分别测定橙汁 1:10样液、 猕猴桃原液及 1:10样液、梨汁原液中维生素 C 的含量。结果与分析:标准曲线: 计算:X=100C/W式中 X 样品中抗坏血酸的含量, mg/100ml;C 由标准曲线查得或由回归方程算得试样测定液总抗坏血酸含量(mg ; W 测定时所取滤液相当于样品的用量(ml 。1. 猕猴桃原液的吸光值为 0.567,根据标准曲线,其总抗坏血酸含量 C 为 1.067mg ; 则 X=100

9、15;1.067/2=53.35mg/100ml;2. 猕猴桃 1:10样液的吸光值为 0.134, 根据标准曲线, 其总抗坏血酸含量 C 为 0.235mg ; 则 x=100×0.235/2=11.75mg/100ml;3. 橙汁 1:10样液的吸光值为 0.393, 根据标准曲线, 其总抗坏血酸含量 C 为 0.733mg , 则 X=100×0.733/2=36.65mg/100ml;4. 梨汁原液的吸光值为 0.022, 根据标准曲线 , 其总抗坏血酸含量 C 为 0.020mg;则 X=100×0.020/2=1.00mg/100ml;数据分析:根据计

10、算结果可知,猕猴桃汁、橙汁中的维生素 C 含量较高,而梨汁中的维生素 C 含量较低。猕猴桃原液中的维生素 C 含量为 53.35mg/100ml,其 1:10样液的维生素 C 含量为 11.75mg/100ml,两者维生素 C 含量相差不是很大,不能很好的体现稀释 10倍的关系。 梨汁原液的维生素 C 含量为 1.00mg/100ml,含量较低。误差可能来源:样品在恒温水浴中加热时间不够,导致生成脎的量不够,而生成脎的量与总抗坏血 酸含量成正比,即最后测得总抗坏血酸含量较少,致使实验误差;加入 85%硫酸后, 将试管从冰水中取出, 溶液的颜色会继续变深, 所以必须计算好, 加入硫酸后准时在 3

11、0min 内比色,实验过程中加入硫酸后没有估计好时间。硫脲可防止抗坏血酸被氧化, 且可帮助脲的形成, 最终溶液中硫脲的浓度均需一致, 否则影响色度,而在实验过程中加硫脲时,每次所滴的量可能有所偏差。本实验中的总抗坏血酸是指抗坏血酸和脱氢抗坏血酸二者的总量,若所测样品本身 含有二酮古乐糖酸抗坏血酸的氧化产物,则导致检测总抗坏血酸含量偏高。注意事项及说明1、硫脲的作用在于防止抗坏血酸的继续被氧化和有助于脎的形成。2、 加硫酸显色后, 溶液颜色可随时间的延长而加深, 因此, 在加入硫酸溶液 30min 后, 应即立比色测定。3、检测过程中,测定样的吸光值不落在标准曲线上,可重新调整测定样品的量或标准 曲线的浓度范围。4、本实验适用于水果、蔬菜及其制品中总抗坏血酸的测定。5、硫酸可防止抗坏血酸被氧化,且可帮助准于的形成,最终溶液中硫酸的浓度均需一 致,否则影响色度。参考文献:【 1】张起书 食品中维生素的测定 食品检验与分析实验教程 宁夏人民教育 出版社 2006【 2】 王元红、 徐家敏 食品中维生素 C 的测定 食品检验与分析实验技术 中国海 洋大学