反相高效液相色谱法测定阿霉素聚乳酸微球的含量

1、中国药物与临床年月第卷第期阿霉素（adriamycin ）为蒽环类抗肿瘤抗生素，阿霉素抗肿瘤谱广，活性强，对白血病及各种实体瘤具有较好的疗效，是恶性肿瘤化疗方面最重要的药物之一。生物可降解材料聚乳酸（polylactide ）是一种优良的生物相容性及生物可降解的聚合物，被广泛地用于药物缓/控释系统，而研究最多的是聚乳酸微球1。阿霉素聚乳酸微球可达到缓释、靶向给药的目的，同时减少全身毒副作用，而其含量测定的方法，国内已报道的采用紫外分光光度法2，3。本文采用反相高效液相色谱法（HPLC ）测定聚乳酸微球中阿霉素的含量。现报告如下。1仪器与药品Agilent1200高效液相色谱系统（检测器VWD

2、G1314B 、Agilent Chemstation 色谱工作站）；AUY120电子天平（日本Shmadzu 公司）；KQ3200DE 型数控超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）阿霉素（浙江海正药业有限公司）；甲醇（天津市科密欧化学试剂开发中心，色谱纯）、乙腈（天津市科密欧化学试剂开发中心，色谱纯）。2方法与结果2.1色谱条件：色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C 18色谱柱；柱温：25；流动相：乙腈-甲醇-水（451）；检测波长：233nm ；流速：1ml/min；定量进样20l 。2.2阿霉素标准储备液的配制：精密称取阿霉素对照品5mg ，置50ml 容量瓶中，用流动相溶解

3、，并加至刻度配成100g/ml的标准储备液。2.3阿霉素聚乳酸微球供试品溶液的配制：精密称取阿霉素聚乳酸微球0.0051g ，置10ml 容量瓶中，加流动相超声处理10min ，放至室温后加流动相定容，摇匀，0.45m 微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。2.4专属性考察：按“2.1”项条件测定，对照品、供试品溶液的HPLC 图谱见图1，阿霉素的保留时间为2.852min ，辅料及其他杂质不影响阿霉素的检出。2.5标准曲线制备：取阿霉素标准储备液0.5、1、2、3、4、5ml 分别置10ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，配成5、10、20、30、40、50g/ml的对照品溶液，按色谱条件下进样测定

4、，以峰面积（A ）为纵坐反相高效液相色谱法测定阿霉素聚乳酸微球的含量阎志飞赵志娟丁红罗斌华基金项目：山西医科大学青年基金（02200809）作者单位：030001太原，山西医科大学药学院药剂学教研室（罗斌华现在湖北咸宁学院药学院）通信作者：赵志娟，Email ：zhaozhijuanzj【摘要】目的采用反相高效液相色谱法测定阿霉素聚乳酸微球中的含量。方法采用Agilent EclipseXDB-C 18色谱柱（150mm ×4.6mm ，5m ）, 以乙腈-甲醇-水（451）为流动相，检测波长为233nm 。结果阿霉素在550g/ml与峰面积呈良好的线性关系（r =0.9994），方

5、法平均回收率为99.92%，RSD=0.82%。结论反相高效液相色谱法测定阿霉素聚乳酸微球的含量简便易行，专属性强，灵敏度高，重复性好，结果准确。【关键词】色谱，高效液相法；阿霉素；微球体；聚乳酸HPLC determination of loading amount of adriamycin polylactic acid microspheres YAN Zhi-fei, ZHAO Zhi-juan, DING Hong, LUO Bin-hua. Department of Pharmaceutics, School of Pharmaceutial Science, Shanxi M

6、edical U niversity, Taiyuan 030001, China【Abstract 】Objective To determine the loading amount of doxorubicin polylactic acid microspheres by RP-HPLC. Methods An RP-HPLC method was employed for determination using Agilent Eclipse XBD-C18column (150mm ×4.6mm, 5m with a mobile phase consisted of a

7、cetonitrile-methanol-water (451. The length of wavelength was 233nm. Results Good linearity was achieved in the range of 550g/ml(r =0.9994.The recovery was 99.92%with RSD of 0.82%.Conclusion This method appeared easy-to-use, specific and sensitive, reproducible and accurate.【Key words 】Chromatograph

8、y, high pressure liquid ；Adriamycin ；Microspheres ；Polylactic acid0123456725020015010050001234567250200150100500b 供试品a 对照品图1对照品和供试品溶液的色谱图电流（m A U ）电流（m A U ）时间（min ）时间（min ）754··中国药物与临床2010年7月第10卷第7期Chinese Remedies &Clinics ，July 2010,Vol.10,No.7·作者·编者·读者·关于使用外文缩略语

9、的说明作者在临床和科研工作中常用的外文缩略语可不加说明，直接引用。但不常用的或近年新兴学科的缩略语，在文内首次出现时，应先写中文全称加括号注外文全名，加逗号，接写缩略语；文内再次出现时，可直接用缩略语。本刊编辑部标，浓度（C ）为横坐标作标准曲线，得回归方程为A =69.368C +19.617（r =0.9994）。阿霉素在550g/ml与峰面积呈良好的线性关系。2.6重现性测定：取6份同一批次的阿霉素聚乳酸微球，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取20l ，在“2.1”项的色谱条件下分析。微球的载药量为5.84%，RSD=1.1%（n =6），表明方法重复性良好。2.7进样精密度：

10、取供试品溶液，重复进样5次，每次20l ，记录峰面积值。计算阿霉素面积的RSD=1.2%（n =5）。2.8加样回收率试验：精密称取一定量的阿霉素聚乳酸微球，加流动相配成一定浓度溶液并测定，分别定量加入阿霉素标准品，测得峰面积，计算加样回收率，结果见表1。2.9样品测定：取3批阿霉素聚乳酸微球，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取20l 进样，测定3批供试品中的载药量分别为5.84%，5.78%，6.17%，平均为5.93%。3讨论对色谱条件进行选择时，曾参照文献4选用乙腈-甲醇-水（325018）为流动相，色谱峰峰型展宽，有拖尾现象；当增加流动相乙腈的量，色谱峰峰型变窄，减少峰的拖尾

11、，保留时间减小；但继续增加乙腈量对改变峰型没有影响。根据阿霉素的紫外吸收光谱特征，阿霉素在233nm 有最大吸收，而聚乳酸在此波长处也有吸收，故紫外分光光度法一般选择波长为聚乳酸无干扰吸收的488nm ，此处阿霉素吸收较弱，灵敏度较差。HPLC 可以将阿霉素和聚乳酸进行分离，阿霉素的保留时间为2.852min, 而聚乳酸的保留时间为1.797min ，分离度（R ）=5.5（一般认为R 1.5时两峰完全分离），符合要求，理论塔板数3426，故在该色谱条件下，可以在233nm 波长处进行紫外测定，提高了方法的灵敏度。参考文献1杨帆，陈一岳，林茵，等. 聚乳酸的降解性能及其微球剂的研究. 中国药房，2002，13（5）：263-265.2赵瑞玲，谢茵，丁红. 紫外分光光度法测定阿霉素聚乳酸微球含量. 山西医科大学学报，2003，34（2）：166-167.3靳浩，梅兴国. 阿霉素微球的制备工艺的优选. 中国医院药学杂志，2006，26（5）：585-588.4王增寿，计佩影，张华，等. 高效液相色谱法测定人血中表阿霉素的浓度. 中国医院药学杂志，2006，26（5）：527-528.（收稿日期：2010-03-30）表1