b6相色谱仪(HPLC)设备验证方案及记录

1、高效液相色谱仪验证 设备验证记录题目编号页数版本2000起草人及日期审核人及日期批准人及日期一、 方案（一）验证目的：证实Echrom98高效液相色谱系统的流速、梯度混合比例、每米理论塔板数、重现性、分离度及噪声、漂移等确实能达到生产要求，为生产提供依据。（二）验证指标：1、高效液相系统的实际流速与设备显示的数值的偏差2、 每米理论塔板数是否大于100003、 分离度是否大于1.54、 各组分重现性是否良好5、 噪声、漂移试验是否达到要求（三）验证依据：1、药品生产验证指南2、高效液相色谱仪使用说明书（四）验证的必备条件：1、 洁净容量瓶（100ml、200ml、500ml）2、 d=0.1电

2、子秤3、 高效液相处于正常运行状态4、 已脱气的流动相5、洁净厂房经过验证并合格 设备验证记录题目编号页数版本2000设备概况：本高效液相色谱系统由双泵系统、进样系统、样品分离系统、检测系统及色谱工作站与打印系统组成，双泵系统可由手动（面板控制）或电脑控制任意设定流速、限压及梯度洗脱条件。其限压设定对仪器提供过压保护，样品分离系统主要由色谱柱及其保护柱组成，可按不同柱填料的功能与样品组分性质将样品中各组分分离，在流动相的作用下进入检测器，检测系统为紫外可变波长检测器，波长在190870nm连续可调，衰减输出信号方便，检测灵敏，对紫外、可见区有吸收的物质均可产生信号且与浓度成正比。色谱工作站可控

3、制操作，记录运行信号，数据处理，保存并打印记录文件。使该系统可用于混合组分的分离与纯化，安装在本岗位的主要作用是用于白介素2的最终纯化，以除去其中的杂蛋白及其它组分并保持其生物活性。 设备验证记录题目编号页数版本2000设备资料档案：高效液相色谱仪A泵泵紫外可变波长检测器Echrom98色谱工作站出厂日期2001.11.022001.11.022001.05.102001.10.10设备出厂编号P2600406P2600407U208157D200230S00本公司设备编号FD-jx-01-01FD-jx-01-01FD-jx-01-02FD-jx-01-03生产厂家大 连 依 利 特 科 学

4、 仪 器 有 限 公 司电源22022V频率500.5Hz功 耗200W流量范围0.5ml/min50.0ml/min工作温度535湿度85%相对湿度流量精确度1.0%(10ml/min); 2.0%(10ml/min)最高工作压力20MPa（流量10ml/min）；10Mpa(流量30ml/min)流量稳定度1.5%RSD噪 声2.010-4AU（254 nm）漂 移5.010-4AU/hr(254nm)安装位置基因工程车间纯化二室设备验证记录题目编号页码版本2000二、设备安装确认：1、 电源 设计要求 安装情况 电 压 220V 频 率 50Hz 接地要求 接地 结 论： 确 认 人：

5、日 期： 2、 振动源及稳定性：安放仪器的工作台应稳固且宽度大于80cm，安装处没有振动源。结 论： 确 认 人： 日 期：3、 安装环境要求：安装场所应清洁无尘，无易燃易爆及腐蚀性气体，排风良好，无较强的电场或磁场。温度1530，相对湿度在20%85%范围内。结 论： 确 认 人： 日 期： 4、 资料整理 存放地点操作说明书维修手册色谱工作站说明书电脑系统说明书打印机说明书设备验证记录题目编号页码版本2000三、设备运行确认：1、 泵的运行确认：1、1、 打开泵电源，泵电源指示灯亮；1、2、 屏幕显示当前压力及前次设定的流速、限压；1、3、 按功能键，设定流速及限压，屏幕上应显示与设定数值

6、一样的数字；1、4、 将泵入口管放入装有注射用水的血清瓶中，设定流速为10.0ml/min，限压为10.0MPa，让泵运行，泵屏幕上显示流速为10.0ml/min，限压为10.0MPa，压力为1.2MPa，泵出口处有水流出；1、5、 关闭电源，电源指示灯灭。结 论： 确认人： 日 期：2、检测仪的运行确认：2、1、打开检测仪电源，屏幕上显示数字；2、2、调节输出衰减，不同衰减，屏幕上显示数字不同；2、3、调节衰减，屏幕上显示所调的结果；2、4、关闭检测仪电源，屏幕上数字消失。结 论： 确认人： 日 期：3、电脑系统的运行确认：3、1、打开电脑主机及显示器电源，电源指示灯亮；3、2、将电脑进入工

7、作站系统，电脑立即进入工作站系统；3、3、设定梯度，以注射用水为流动相，让泵运行，泵按设定的梯度运行并记录结果。3、4、按工作站的程序保存运行结果，退出工作站；3、5、关闭电脑电源, 电源指示灯灭。结 论：确认人： 日 期：设备验证记录题目编号页码版本2000四、设备性能确认： 1、 预试验验证：检查泵连接管路是否畅通，确认系统密封性是否良好及限压保护是否正常。1、 1系统密封性试验：严格按该仪器使用说明书连接泵、过滤网、进样器、色谱柱、保护柱、检测器及其废液排出管路，检查电源连接符合要求后开启电源，以100%甲醇为流动相，按功能选择设定流速为20ml/min，限压为10.0MPa。按说明书启

8、动仪器，观察泵的声音正常。气泡排尽后，废液出口流出液体，证明管路畅通，待压力平稳后保持10 min，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到9.0MPa， 系统仍无泄露及运行管路无气泡产生。结 论：确认人： 日期：1、2限压保护实验：以HPLC级水为流动相，选择功能设定一限压为2.0MPa。再逐渐加大流速使实际压力逐渐达到2.0MPa。在实际压力达到限定压力（2.0MPa）的一秒钟内，泵自动停止，证明限压保护（2.0MPa）合格，再于保护柱前端增加一0.22um滤膜，目前限压为5.0MPa，逐渐加大流速（流速为35ml/min），至柱压实际达到5.

9、0MPa时泵自动停止，限压为5.0MPa合格。同法设定为10.0MPa，泵自动停止。结 论：确认人： 日期：1、 3流速及梯度混合实验：1、3、1 流速各设定单泵流速分别为5ml/min, 10ml/min, 15ml/min, 20ml/min, 30ml/min,以注射用水为流动相，于废液出口用洁净并已称重的容量瓶（100 ml，200 ml，500 ml）分别收集各流速10分钟流动相流出液的重量，用d=0.1g电子秤称重，计算其实际流速，结果见下表，测三次： 设备验证方案题目编号页码版本2000 第一次运行结果：设定流(ml/min)10分钟流出液重量（g）水 温()水 密 度(g)实际

10、流速(ml/min)偏差%A泵510152030B泵510152030操作人： 复核人： 日 期：第二次运行结果：设定流(ml/min)10分钟流出液重量（g）水 温()水 密 度(g)实际流速(ml/min)偏 差%A泵510152030B泵510152030操作人： 复核人： 日 期：设备验证记录题目编号页码版本2000第三次运行结果：设定流(ml/min)10分钟流出液重量（g）水 温()水 密 度(g)实际流速(ml/min)偏 差%A泵510152030B泵510152030操作人： 复核人： 日 期：验证结果：验证人员：日 期：1、3、2 梯度混合试验：由梯度控制装置设置阶梯式的梯

11、度洗脱程序。设定溶剂A为注射用水，B为0.1%丙酮水溶液，B经由5个阶梯从0%变到100%，设定梯度见下表。开机后先以A溶剂冲洗系统，待基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。求出各溶剂配比时的输出信号值或记录仪读数。重复测量三次，计算平均值。从B溶剂的含量及相对应的输出信号值或记录仪读数i(第i段梯度准确度，%)和m(第i段输出信号值或记录仪读数平均值)计算梯度准确度Gci(各段输出信号值或记录仪读数平均值)，取Gci最大者作为仪器梯度准确度误差。运行结果见附图。计算公式：Gci=（i-m）/m100%设备验证记录题目编号页码版本2000设定梯度如下：时 间（min）流 速（ml/mi

12、n）A%B%梯度状态0201000130201000150208020180208020110020604011302060401150204060118020406012002020801230202080125020010012802001001计算结果如下：B 溶 液 梯 度0%20%40%60%80%100%记录仪读数（电信号）123i-m123Gci123设备验证记录题目编号页码版本2000运行结果见附图：第一次运行结果图：操作人： 复核人： 日 期：第二次运行结果图：操作人： 复核人： 日 期：第三次运行结果图：操作人： 复核人： 日 期： 验证结果：验证人员：日 期：设备验证记录

13、题目编号页码版本20002、系统适应性试验 2、1 每米理论塔板数测定：严格按该仪器使用说明书操作，条件为：ODSC18柱，规格为225cm, 粒径20m,孔径300,紫外检测器检测波长为280nm，输出衰减为0.005,流动相A为0.1%TFA水溶液，流动相B为0.1%TFA乙腈溶液,流速为10ml/min。样品为硝基苯，浓度为10%，进样量100ul。在50%B状态下洗脱，测三次，运行结果见附图： 第一次每米塔板数：N=5.54(tR/W1/2)21000/250=操作人： 复核人： 日 期：第二次每米塔板数：N=5.54(tR/W1/2)21000/250=操作人： 复核人： 日 期：第

14、三次每米塔板数：N=5.54(tR/W1/2)21000/250=操作人： 复核人： 日 期：验证结果：验证人员： 日 期：2、2 分离度测定：严格按该仪器使用说明书操作，条件为：ODSC18柱，规格为225cm, 粒径20m,孔径300,紫外检测器检测波长为280nm，输出衰减为0.005,流动相A为注射用水，流动相B为纯甲醇，流速为10ml/min。样品为8 ul/ ml硝基苯、2.04mg/ml萘的溶液， 进样量为50ul。在70%B状态下洗脱，测三次，结果见附图：设备验证记录题目编号页码版本2000第一次分离度R=（tR2-tR1）/（W1+W2）=操作人： 复核人： 日 期：第二次分

15、离度R=（tR2-tR1）/（W1+W2）=操作人： 复核人： 日 期：第三次分离度R=（tR2-tR1）/（W1+W2）=操作人： 复核人： 日 期：验证结果：验证人员：日 期： 2、3重现性测定：严格按该仪器使用说明书操作，条件为：ODSC18柱，规格为225cm, 粒径20m,孔径300,紫外检测器检测波长为280nm，输出衰减为0.005,流动相A为注射用水，流动相B为纯甲醇，流速为10ml/min。样品为8 ul/ ml硝基苯、2.04mg/ml萘的溶液， 进样量为50ul。在70%B状态下洗脱。系统于前次运行结束后充分洗脱，经流动相平衡1小时以上，重新进样，在相同条件下运行，见附图

16、：操作人： 复核人： 日 期：验证结果：验证人员：日 期：设备验证记录题目编号页码版本20002、4噪声、漂移测试：选用C18色谱柱，100%甲醇为流动相，流速为10ml/min,紫外检测仪的波长为254nm，衰减器调到最灵敏档（即0.005）,开机预热，待仪器稳定后记录基线60 min，计算基线噪声和漂移。峰形图：第一次：基线噪声：漂 移：操作人： 复核人： 日 期：第二次：基线噪声：漂 移：操作人： 复核人： 日 期：第三次：基线噪声：漂 移：操作人： 复核人： 日 期：设备验证记录题目编号页码版本2000验证结果：验证人员：日 期：2、5色谱工作站功能的确认：电脑系统工作界面为Windows9