转移因子对猪瘟和猪蓝耳病疫苗免疫增强效果试验

1、转移因子对猪瘟和猪蓝耳病疫苗免疫增强效果试验    核心提示：转移因子（TF）是白细胞中有免疫活性的T淋巴细胞所释放的一类小分子可透析物质，具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、增强淋巴细胞转化、提高机体免疫功能等作用，该活性产物能够将致敏淋巴细胞的免疫信息传递给.转移因子（TF）是白细胞中有免疫活性的T淋巴细胞所释放的一类小分子可透析物质，具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、增强淋巴细胞转化、提高机体免疫功能等作用，该活性产物能够将致敏淋巴细胞的免疫信息传递给未致敏的受体淋巴细胞。猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征是危害养猪业的重要传染病，兽医临床上常遇到免疫效果

2、不理想或免疫失败的问题，而转移因子作为一种新型的免疫增强剂，在提高疫苗的免疫抗体水平和抗病能力上发挥着特定作用，本实验旨在探讨转移因子与猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征疫苗联合应用时对免疫抗体水平的影响。    一、材料和方法    （一）实验动物 同品种、体重相近的3032日龄仔猪（未免疫猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征疫苗）72头，由成都乾坤动物药业有限公司实验猪场提供。    （二）实验药品及试剂 猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒（批号：08615）、猪繁殖与呼吸综合征病毒IgG抗体检测试

3、剂盒（批号：08620），均由深圳绿诗源生物技术有限公司提供。猪瘟细胞苗由中牧集团提供（批号：0812331），猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗由上海海利有限公司提供（批号：081202）。    （三）转移因子提取 取成年健康牛的新鲜脾脏，去除被膜和结缔组织，匀浆后加入3倍体积的无菌生理盐水，用36%的乙酸调pH值至4.5，置-30冷冻后再37摇床上解冻，反复冻融5次。用4%的NaHCO3调pH值至6.6，于4、3 000 r/min离心30 min，离心取上清液用0.45 m的微孔滤膜过滤，将滤液通过中空纤维超滤器超滤，截留分子量6 000，收集超滤液，加

4、5的烟酰胺，0.22m微孔滤膜过滤除菌，并进行蛋白质鉴定及多肽含量测定。    (四)猪瘟疫苗免疫试验 将36头仔猪随机分为2组，试验组和对照组各18头，做好编号。免疫前1天每头仔猪前腔静脉采血2 ml，分离血清测定猪瘟母源抗体水平。试验组于第2天每头注射混合的猪瘟疫苗1头份转移因子2 ml，对照组每头注射猪瘟疫苗1头份，14 d后采血测定猪瘟抗体水平，测定方法参照试剂盒，结果判定标准为：OD值0.2为抗体阴性，0.20.4为可疑，0.4时为抗体阳性，试验数据采用SPSS软件作T检验，进行显著性分析。    （五）

5、猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫试验 将36头仔猪随机分为2组，试验组和对照组各18头，做好编号。免疫前1天每头仔猪前腔静脉采血2ml，分离血清测定猪繁殖与呼吸综合征母源抗体水平；试验组于第2天每头注射混合的猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗1头份转移因子2 ml，对照组每头注射猪繁殖与呼吸综合征疫苗1头份，14 d后采血测定猪繁殖与呼吸综合征抗体水平，测定方法参照试剂盒。其结果判定标准为：OD值0.2为抗体阴性，0.20.4为可疑，0.4时为抗体阳性，试验数据采用SPSS软件作T检验，进行显著性分析。    二、结果    （

6、一）转移因子提取 提取的转移因子蛋白质反应阴性，多肽含量采用Folin酚法测定为5.4 mg/ml。    （二）猪瘟疫苗免疫试验 由表1可见，对照组和试验组在免疫前一天的母源抗体平均值已下降至可疑范围（OD值在0.20.4）内，抗体水平接近阴性，两组之间差异不显著（t = 0.204，P>0.05），此时免疫猪瘟疫苗受母源抗体的干扰较小，可缩短免疫后产生抗体的时间；免疫后14 d，试验组和对照组的抗体水平均转为阳性（OD值0.4），位于临界保护力之上，说明猪瘟疫苗免疫成功，其中试验组的抗体OD值比对照组提高了5.31%，差异显著（t = -2.6

7、29，P    （三）猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫试验 从表2可以看出，免疫前一天对照组和试验组的母源抗体平均水平均在可疑范围内（OD值在0.2至0.4之间），其差异不显著（t = -1.040，P>0.05）；免疫后14天，试验组和对照组均获得具有免疫保护力的抗体水平（OD值0.4），其中试验组的抗体OD值比对照组提高了8.24%，差异显著（t = -2.356，P    三、讨论与分析    转移因子具有广泛的免疫学调节活性、非特异性免疫学活性和特异性免疫学活性，其作

8、用不受动物种属的限制，即牛的转移因子能将其免疫活性转移给猪、羊、犬、鸡和人，在兽医临床上已有许多应用的报道，如对猪、鸡、犬、牛均有显著的效果，但尚未有牛脾转移因子与猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征疫苗联合应用的报道。本试验以牛脾脏为原料，采用低温反复冻融及超滤工艺制备的转移因子，多肽含量高达5.4 mg/ml，比朱天新等采用新工艺制备的猪脾转移因子多肽含量高1.6 mg/ml，并具有良好的生物学活性，能显著提高猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫的抗体水平，说明牛脾转移因子可以非特异性的将其免疫功能传递给猪，增强猪群免疫功能，因此，牛脾转移因子可以与猪群的疫苗联合应用，增强疫苗的免疫效果。 &#

9、160;  以牛脾为原料制备的转移因子，用作猪的免疫增强剂，可以减少猪源性病毒污染的风险，减少猪群之间病毒性传染病的相互传播，比猪脾转移因子更具安全性，作为一种新型、高效、安全的生物药品，牛脾转移因子在兽医临床上具有广阔的应用前景。 Keywords: Transfer factor immune effects enhance 参考文献 1 FUJISAWA T, YAMAGUCHI Y. Postoperative immunostimulation after complete resection improves survival of patients with

10、stage I nonsmall cell lung carcinomaJ. Cancer, 1996,78(9):1892-l898 2 PIZZA G, De VINCI C, CUZZOCREA D, et a1.A preliminary report on the use of transfer factor for treating stage D3 hormone2 unresponsive meta static prostate cancerJ. Biotherapy,1996,9(10):123-132. 3 PRASAD U, Bin JALALUDIN M A, RAJ

11、ADURAI P, et a1. Transfer factor with anti-EBV activity as adjuvant therapy for nasophargngeal carcinoma: a pilot studyJ. Biotherapy,1996,9(1-3):109-115. 4 何理平.转移因子在动物医学上的研究进展J. 江西畜牧兽医杂志,2004,2: 3-5 5 闫肃, 杨琳,申镇维, 等. 转移因子口服液制备方法的研究J.中国卫生工程学,2007,6(6): 355-356. 6 顾平, 陈德有.猪脾转移因子生产工艺的改进J.中国生化药物杂志，2001,2

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