多药耐药相关蛋白在肝细胞癌中的表达及其临床意义

1、多药耐药相关蛋白在肝细胞癌中的表达及其临床意义【摘要】目的研究人肝细胞癌组织中多药耐药相关蛋白(MRP)的表达情况并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测了110例随访资料完整的肝细胞癌石蜡切片组织中MRP表达情况,并与临床病理指标联系,进行统计学分析。结果本组肝细胞癌110例,表达阳性57例,其阳性率为52%。术前行经肝动脉栓塞化疗(TACE)及未行TACE治疗者的MRP阳性率分别为51%(19/37)和52%(38/73)。MRP与癌灶大小、数目、癌栓、有无包膜、组织分化、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)情况、是否合并肝硬化无关。MRP阳性患者的1、3、5年生存率分别为63%、26%和

2、10%；而MRP阴性者的1、3、5年生存率分别为89%、60%和53%，显著高于MRP阳性者（P0.01）。MRP阳性者的无癌生存期平均为11.8个月，显著低于MRP阴性者的36.2个月（P0.01）。结论术前TACE治疗与否不影响MRP表达。MRP的表达与HCC预后呈显著负相关，可能成为判断HCC预后的良好肿瘤标志物。【关键词】癌,肝细胞免疫组织化学MRPExpression of multidrug-resistance-associated protein in liver cancerFU Jianmin,ZHANG Wei,PENG Xianghong,et al. Cancer H

3、ospital ,Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences,Beijing 100021【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of multidrug-resistance-associated protein (MRP) in hepatocellular carcinoma (HCC) and its clinical implications.MethodsMRP-1(a monoclonal antibody) was used t

4、o detect immunohistochemical expression of MRP in paraffinembedded specimen of HCC by means of the avidin-biotin-peroxidase method.Results were compared with clinical pathology.ResultsMembrane bound and/or cytoplasmic globular positivity were observed in 57 (51.8%) of the 110 HCCs.There was no diffe

5、rence of MRP expression in patients whether or not undergoing preoperative intraarterial chemoembolization (TACE) (51.4%,19/37 vs. 52.1%,38/73,P0.05),nor there was significant difference between status of MRP and the size,number,emboli,capsule,differentiation of HCC and HBsAg of the patients.Patient

6、s postoperative disease-free survival in positive MRP (11.8 months) was significantly shorter than that of negative MRP (36.2 months),P0.01.The 1, 3, 5 years survival rate in MRP positive HCC patients were 62.7%, 25.5%, and 9.7% respectively compared with that of 89.1%, 59.6%,and 53.1% in MRP negati

7、ve patients P0.01.ConclusionsExpression of MRP in HCCs is associated with a shorter disease-free interval and shorter survival time, and preoperative TACE had no influence on the expression of MRP.【Key words】 Carcinoma,hepatocellularImmunohistochemistryMRP原发性肝癌已成为目前我国恶性肿瘤死亡的主要原因,大多数肝癌患者发现时即为中晚期,失去手术

8、机会,经肝动脉化学药物治疗栓塞(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)和全身化学药物治疗是主要治疗手段,但是常常出现耐药现象,导致治疗失败。1992年,Cole等1发现了一种新的基因,即多药耐药相关蛋白基因(multidrug resistance-associated protein,MRP),并证实其与癌细胞的耐药关系密切。鉴于目前国内外尚无有关肝癌组织中MRP表达研究的报道,我们应用免疫组织化学方法检测了原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中MRP的表达情况,现报告如下。资料与方法一、标本来源

9、所有标本取自1988年1994年我院腹部外科手术切除之HCC组织,按下列程序和条件筛选病例:（1）术后随访资料完整;（2）有肿瘤原发灶蜡块保存;（3）MRP染色效果良好。二、临床资料合格入选病例共110例,其中男性93例，女性17例，男女=5.51;年龄2872岁，中位年龄52.3岁;乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性80例,阳性率为72.7%;AFP阳性68例, 阳性率为61.8%。本组术前行TACE治疗37例, 常用药物及剂量为：阿霉素100 mg,丝裂霉素20 mg，5-氟脲嘧啶1 000 mg。术后行TACE治疗38例，无水酒精注射12例，全身化疗10例，复发后再次手术5例，放疗3例。

10、随访时间39年,1、3、5年生存率分别为75.5%、42.1%和31.7%;1、2、3年无癌生存率分别为50.0%、41.8%和29.1%。三、免疫组织化学染色全部标本经10%福尔马林固定,石蜡包埋,制备5 m厚切片,贴于经多聚赖氨酸处理过的切片上,70烘片2小时。首次加入的抗体(一抗)为鼠抗人单克隆抗体MRP-1(由荷兰大学自由医学院病理学教授Scheper惠赠),工作浓度150;ABC法免疫组织化学染色,切片加一抗前微波抗原修复10分钟,显色剂为DAB,PBS代替一抗作为阴性对照。四、统计学处理采用医学统计学软件SPSS进行2检验和处理生命表结果1.MRP表达阳性结果为细胞胞膜和(或)胞浆

11、染为黄色(1),染色结果分为“-”、“+”、“+”三级:未见阳性细胞为“-”;阳性细胞少于50%为“+”;阳性细胞多于50%为“+”。110例HCC组织中,有MRP阳性57例,阳性率为52%,其中MRP“+”阳性13例,“+”阳性44例。2.110例中术前行TACE治疗37例，其中MRP阳性19例,阳性率为51%;术前未行TACE治疗者73例,其中MRP阳性38例,阳性率为52%,两组间差异无显著意义。3.根据HCC的大小、数目、有无完整假包膜和门静脉癌栓、组织分化程度、HBsAg情况及是否伴随肝硬化分组,进行MRP表达与HCC临床病理分析,结果见表1。HCC组织中的大肝癌、无假包膜和伴有门静

12、脉癌栓者的MRP阳性率较高,但差异无显著意义(P0.05)。4.MRP阳性的病例,其1、3、5年生存率分别为63%(37/59)、26%(14/55)和10%(3/31);而MRP阴性者,其1、3、5年生存率分别为89%(49/55)、60%(31/52)和53%(17/32),明显高于MRP阳性者,两组间差异有极显著意义(P0.01)。5.MRP阳性病例的无瘤生存期平均为11.8个月,而MRP阴性病例的无瘤生存期平均为36.2个月,明显高于MRP阳性者,两组间差异有极显著意义(P0.01)。表1HCC某些临床病理指标与MRP表达的关系(例)肿瘤情况例数MRP阳性阳性2值P值+例数百分比直径(

13、cm) 326152911423532173121547 5522182331602.5210.283数目单结节965011354648多结节1432911793.4530.063包膜有61316243049无492272027550.1810.670癌栓有9216778无10151123850500.0250.875分化高43244151944中50227212856低1772810591.1390.566HBsAg 阳性80408324050阴性301351217570.1670.682肝硬化有9141 11395055无1912257371.4020.236注：2为组内比较 讨论原发性肝

14、癌对化学药物治疗(下称化疗)极不敏感,其耐药机制尚不清楚。早先发现的多药耐药基因MDR1的产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gy)在HCC组织中的表达约60%70%,且P-gy的表达与术前是否化疗无关,但与癌细胞组织类型相关2,即侵袭性强的癌细胞其P-gy高表达;Soini等3报道P-gy表达与HCC的生存率和无病生存期呈正相关,可作为判断HCC预后的指标。多药耐药相关蛋白基因(MRP)是从一株无MDR1基因表达的耐阿霉素的人小细胞肺癌细胞株H69AR中分离的一种新基因,位于人染色体16号p13区1带,分子量190KD,编码1531个氨基酸,该蛋白位于细胞膜上1。将MRP基因转

15、染给正常细胞后可使其对阿霉素、丝裂霉素等发生耐药4,国外已在人白血病、肺癌、食管癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌及黑色素瘤等组织中检测出MRP的表达5,但目前尚无有关MRP在肝癌组织中的研究报道。MRP主要介导癌细胞对阿霉素、丝裂霉素、足叶乙甙和长春新碱等耐药，而其中阿霉素和丝裂霉素为肝癌化疗一线药物。研究MRP表达与肝癌耐药和预后的关系，有助于选择合理的化疗方案，并避免药物浪费和副作用。本组采用免疫组织化学方法检测了110例HCC组织中MRP的表达,结果显示阳性率为52%(57/110),表达率较高;在术前行TACE治疗的HCC组织中,其MRP的表达(51%)与未行TACE治疗者(52%)基本相似,

16、提示大部分HCC可能为先天耐药,术前TACE不能诱导耐药发生。Ota等6发现MRP基因表达阳性的非小细胞肺癌预后较差,Sugawara等7利用免疫组织化学的方法获得相似结果。本组结果显示MRP阳性的HCC,其生存率和无病生存期均明显低于MRP阴性者,差异有极显著意义。并且伴有门静脉癌栓、多结节、大肝癌的HCC组织,其MRP高表达,提示MRP的表达与HCC的侵袭性相关,可能是恶性肿瘤侵袭进展的标志,MRP可作判断HCC预后的分子指标。目前,有关原发性肝癌耐药机制的研究尚少,难以得出明确结论,还有许多问题待研究解决。随着对HCC耐药机制的研究深入,有可能找到克服其耐药的方法,开发出对肝癌敏感的新型

17、化疗药，以提高肝癌的治疗水平。本文1见插页第1页作者单位：傅建民、赵东兵、冯强、邵永孚，(中国医学科学院 协和医科大学 肿瘤研究所 肿瘤医院腹部外科)张伟、彭向红、金顺钱肿瘤研究所肿瘤生物学检测中心100021 北京参考文献1Cole SP,Bhardwaj G,Gerlach JH,et al.Overexpression of a transporter gene in a mutidrug-resistant human lung cancer cell line.Science，1992，258:1650-1654.2Itsubo M,Ishikawa T,Toda G,et al.I

18、mmunohistochemical study of expression and cellular localization of the multidrug ressistance gene product P-glycoprotein in primary liver carcinoma.Cancer，1994，73:298-303.3Soini Y,Virkajarvi N,Raunio H,et al.Expression of P-glycoprotein in hepatocellular carcinoma:a potential marker of prognosis.J Clin Pathol，1996，49:470-473.4Zaman GJ Ven,Lankelma,J,Tellingen OV,et al.Role of gluta