硕士论文--二灵软胶囊的药学部分研究_图文

1、成都中医药大学 硕士学位论文二灵软胶囊的药学部分研究 姓名:郑翠英申请学位级别:硕士 专业:药剂学指导教师:徐超群 2009-04中文摘要二灵软胶囊处方来源于二灵散,由当归、白芷两味药物组成,主要用于治疗 风搏于肺,传于大肠,导致津液干枯,大肠失于润泽,排便不畅所致的 “ 风秘 ” 。 “ 风秘 ” 属于 “ 燥 ” 性便秘,而便秘是临床常见症状,发病率极高,治疗药物需求量 大,市场前景广阔。本课题以传统中医药理论为指导,根据现代临床用药特点,对二灵散重新进 行提取与制剂方面的研究,开发成为能够改善胃肠道功能、具有润肠通便作用的 二灵软胶囊,可以增加临床用药的选择性,具有较好的发展前景。在提取

2、工艺中,当归主要提取其挥发油部分,并以挥发油的收率为指标考察 了不同的提取方法,结果选择以超临界流体萃取法进行提取。超临界流体萃取法 的萃取条件为:萃取釜压力 20MPa ,萃取温度为 36 ,分离器压力为 6.5 MPa, 分离器温度为 70 , CO 2流速为 25L/h,蒸发器温度为 0.5 。白芷主要以欧前 胡素的得率为指标来选择其提取方法。在研究过程中,综合对渗漉法与回流法进 行了比较, 通过考察其对制剂成型的影响, 最终选择以回流法进行提取。提取条 件为:12倍量 80%乙醇加热回流提取 3次,每次 2h 。在制备工艺研究过程中,分别对软胶囊内容物的成型工艺、软胶囊囊皮处方 进行了

3、研究。成型工艺研究中,根据药物的用药特点,选择了以麻油作为内容物 基质;并以成品的外观性状、流动性、沉降比为指标,对助悬剂的种类、用量进 行了考察,最终选择以蜂蜡为助悬剂,用量为麻油用量的 6%。在软胶囊囊皮处 方的研究过程中,以柠檬黄的溶出速率为指标来间接考察不同明胶甘油比例、不 同大分子物质的加入对于胶囊皮崩解的影响,并最终筛选软胶囊的处方为:明胶 -甘油-PEG400-柠檬黄 (1:0.5:0.1:0.015。最后进行了中试放大研究,验证了 制备工艺工业化的可行性。在二灵软胶囊的质量标准研究中,进行了性状、鉴别、常规检查等研究,以 高效液相色谱法测定欧前胡素的含量来对产品进行含量控制。

4、对当归、白芷两味 药物进行了薄层色谱鉴别,并 确定了相应的条件。在质量标准可控的基础上对该 制剂进行了稳定性研究。以上结果表明:制备工艺合理可行、质量标准可控、成 品质量基本稳定。关键词 :二灵软胶囊 制备工艺 质量标准 稳定性研究AbstractThe formation of Erling soft capsule comes from Erlingsan,which includes danggui and baizhi.It is mainly used to deal with the defication problem,which has the “ dry” nature 。

5、If the wind effects the lung and the large instine,at last,it will result in the loss of the body fluid and make the stool difficult to be expelled out,then the the “ wind defication” appear.Defication is very fluent in clinic,lots kinds of drugs are needed,therefore,it can has a good market.Accordi

6、ng to the traditional chinese medicine theory and the feature of drug using in modern clinic,we did the new research to Erlingsan on its extracting part and pharmaceutics.We can enlarge the choice of medcine in clinic and make a good future if we can change Erling san into Erling soft capsule ,which

7、 is helpful in improving the function of the digestive system moisterning the intestine and freeing the stool.In its extraction research,we mainly meaned to extract the oil from danggui and at last we chose the Supercritical Extraction Technology,depending on the productivity.The condition of the Su

8、percritical Extraction Technology is that the pressure of 20MPa,the temperature of 36, the separating pressure of 6.5 MPa ,the separating temperature of 70 ,the CO2 fluent rate of 25L/h and the Evaporator temperature of 0.5 .When it means baizhi,we chose its extraction method depending on the produc

9、tivity of Coumarins.During the research progress,we compared the percolation method and refluent extraction method in many ways,but at last,considering its effect on the pharmaceutics,we choose the refluent extraction method with 12 times amount of 80% alcohol for three times,2 hours one time as the

10、 extract method of baizhi.In the manufacturing progress,we did some research on its formation of the content and the soft gelatin.In the first part, semame oil was chosen as the dispersed medium according to its using purpose.With the guideline of the external appearance fluent character the sedimen

11、tation ratio,the kind and the dosage of the suspending agent were researched and chosen as beeswax with the proportion of 6% corresponding to the amount of the oil.In the second part,by the rate of the dissolutionof the lemonwood,we reviewed the different rate of gelatin and glycerine different macr

12、omolecular s effect on the gelatin and we chose the formation as gelati n-glycerin e-PEG400-lemonwood(1:0.5:0.1:0.015.In the end, We enlarged the experiment according to the confined process and proved its feasibility in industrial production.During the quality standard research of Erling soft capsu

13、le,external appearance and characters,discriminate,the normal regulation check etc. were studied.we used the HPLC method to control the amount of coumarins in the drug.we used the thin layer chromatography method to identify baizhi and danggui,and built the proper method.The research indicated that

14、the technique of preoaration was reasonable and practical,the standards was controlled and the quality of the sample was steady and well.Key words:Erling soft capsule technique of preparation, quality standard, preliminary stability声明本 人 承 诺 :硕 士 学 位 论 文 二 灵 软 胶 囊 的 药 学 部 分 研 究 是本人在成都中医药大学攻读硕士学位期间在导

15、师指导下独立进行 研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。 该论文著作权归成都中 医药大学所有。由于本人的导师(或主要具体指导者系外校兼职导 师,并提供了该学位论文研究、撰写的主要经费,故该论文涉及的有 关知识产权等,按事先已有的约定执行。若无约定,则同样需征得导 师和成都中医药大学同意。本人同意:成都中医药大学有权通过影印、 复印等手段汇编学位 论文予以保存,并提供查阅和借阅;有权按照规定向国家有关部门、 机构送交论文及电子版,公布(或刊登论文内容。(注:论文涉及保密部分请事先做好处理 硕士生签名:导 师 签 名:年 月 日1前言1.1立题的依据和背景1.1.1便秘的发病及治疗原则便秘是指排

16、便频率减少, 7天内排便次数少于 23次,粪便量少且干硬, 并常有排便困难。便秘可以单独出现,也可以伴随多种疾病同时出现,其发病率 在世界范围内都比较高,在美国,便秘的发生率约为 2%,英国为 10%、日本为 4%,我国天津为 4.4%1。发病率女性高于男性、北方高于南方。我国大部分流 行病学资料认为,随着年龄的增长,便秘的发病率明显增加,老年人患病率大约 为 15%30%。长期卧床的老年人患病更高达 80%2。引起便秘的原因很多,如饮食过于精细、长期滥用泻药、疾病原因、生活规 律等。现代医学认为便秘可继发于直接影响肠平滑肌功能的各种因素,也可因结 肠及肛门功能异常所致。西医的治疗手段主要是容

17、积性通便、渗透性通便、刺激 性通便、润滑性通便等 3。中医则从整体观念出发,认为外因、内因和不内外因 均可导致便秘,便秘的发生与性别、年龄、地域气候、文化程度、精神心理状况 等因素均有关。凡可致 “ 津液亏耗,阴血不足,大肠枯涩 ” 的各种原因均可导致便 秘的发生。中医的治疗则根据不同的病机而采取不同的手段及方法。1.1.2中医对便秘的辨证论治从中医的角度来看,便秘的病机常涉及 “ 燥 ” 4。人体的排便,靠五脏六腑的 正常生理功能及相互之间的协调合作来完成, 对于便秘的治疗需要从脏腑功能的 失调方面来考虑。便秘的原因有多个方面,有因脏腑本身功能虚弱,脾胃功能受 损所致,胃气虚弱,大肠传导无力

18、,失于通降,肝肾阴匮乏,大肠失于濡润,肾 阳不足,气化失司所致;也有因脏腑功能不协调或功能失常导致,如肝郁脾虚, 气机不利,三焦气机壅滞,聚津为痰,津不下行所致;也有因脏腑受邪,久而不 去所致,如肺有痰饮或燥邪,使肺失其清肃功能,或因病理性产物如痰湿、 瘀血 阻滞大肠,气机受阻所致 5。中医针对不同的病机对便秘有不同的辩证,并针对各种辩证的特点,采用不同的论治原则。热结便秘者,宜泻热通便;气滞者宜行气导滞;气虚者宜益气润 肠;血虚者宜养血润燥;阳虚则用温肠通便之法。老年脏腑功能减弱,肠道传送 无力,故成便秘,主以虚秘、冷秘、气秘为主,治疗则应以润肠通便为主加以理 气健脾之品 6。中医在治疗便秘

19、方面尤其独特的特点和优势, 因此对于开发可以用于治疗或 者改善便秘症状的中药产品则具有很大的市场空间。并可以采用更健康、自然的 方式来引出新一代治疗或改善便秘症状的原则和方法, 也可以进一步开发中药的 市场价值,充分发挥其独特的功能。1.2二灵软胶囊的处方分析及药物研究1.2.1二灵软胶囊的处方分析二灵软胶囊来自原方二灵散。古用于治疗风秘,其使用原记载于仙拈集 卷二,有润肠通便的作用。主要用于治疗大便秘结之风秘者,风秘的病因即风搏 于肺,传于大肠,导致津液干枯,大肠失于润泽,排便不畅,属于 “ 燥 ” 性便秘。 故针对此种便秘,治则宜疏风和血润肠。本方由两味药物当归与白芷组成。当归,甘,辛,温

20、,归肝、心、脾经,具 有补血、活血,调经、止痛、润肠的功效。白芷,辛,温,归肺、胃经;具有解 表散风、通窍、止痛、燥湿止带、消肿排脓的功效,白芷用于治疗风秘在本草 纲目中就有所记载。 本方使用主要利用白芷疏风于外、当归和血润肠于内的功 效, 两味药物合理配伍,开发为可以改善胃肠道功能、具有润肠通便作用的药品 具有较好的发展前景。1.2.2当归、白芷的物质基础研究当归的化学成份主要分为挥发油和水溶性成份两大部分。当归挥发油中,成 分相对含量最高的是藁本内酯,占总量的 57.81%,除此之外,还有正丁烯基苯 酞内酯 7.94%、反式 -罗勒烯 4.09%、 a-蒎烯 3.38%7。当归的水溶性成份

21、研究较为深入的主要为有机酸类,如阿魏酸、当归多糖类成份。当归挥发油是其对血管平滑肌解痉作用的主要活性成分, 其中以藁本内酯的 活性最强。挥发油中高沸点部分含有兴奋子宫和抑制子宫的两种成分。正丁烯基 苯酞和藁本内酯在体外有松弛气管平滑肌的作用, 同时还有抑制血小板聚集的作 用。当归中性油能增强巨噬细胞的吞噬功能和促进淋巴细胞的转化。 有 机酸类成 分中的阿魏酸有很强的抗氧化活性。 当归多糖具有补血及调节免疫和物质代谢的 功能 8。白芷主要有效成分为香豆素类,含量为 0.211%1.221%9,其中主要有氧 化前胡素 0.06%0.43%,欧前胡素 0.1%0.83%,异欧前胡素 0.05%0.1

22、5%。 有研究测定不同生长期白芷中香豆精类含量,结果显示 3年以上、断面直径在 1cm 以上的白芷香豆精类含量显著提高。另外也有报道显示,白芷含挥发油 0.24%,已鉴定 29种成分, 其中主要有甲基环癸烷 12.4%, 1-十四碳烯 10.9%等; 也有报道含挥发油类成分 0.5%,并鉴定出 59种成分,主要有有机酸类、碳烯类 及醇类化合物等。白芷的化学成分复杂,经现代药理研究发现其在多方面都具有较显著的药理 作用。白芷具有较显著的解热、镇痛、抗炎作用,能对抗多种病原微生物,并对 皮肤、心血管、平滑肌、脂肪代谢及中枢神经等多方面都有一定的药理作用 10。2. 制备工艺研究2.1试验材料2.1

23、.1试验用药材来源及鉴定当归为伞形科 (Umbelliferae植物当归 Angelica sinensis (Oliv. Diels的干燥 根。本试验所用当归购自成都市中药材市场,并按照中国药典 2005年版一 部当归项下有关要求检验,结果符合规定。白 芷 为 伞 形 科 (Umbelliferae植 物 白 芷 Angelica dahurica (Fisch. Ex Hoffm.Benth. et. Hook.f.或杭白芷 Angelica dahurica (Fisch. Ex Hoffm.Benth. et. Hook.f. var.formosana (Boiss. Shan et

24、 Yuan的干燥根。本试验所用白芷购于四川 遂宁白芷 GAP 生产基地 (四川银发资源开发股份有限公司 , 并按照 中国药典 2005年版一部白芷项下有关要求检验,结果符合规定。2.1.2主要试验仪器与试药5+1升超临界萃取装置(四川德阳四创公司Agilent 1200高效液相色谱仪包括四元泵、脱气机、 VWD 紫外检测器和化学工 作站 (美国安捷伦公司 UV-2401PC 紫外分光光度计(日本岛津ZRS-8C 溶出度测定仪(天津大学无线电厂Thermo SNL216V/VC45 真空冷冻干燥仪(美国赛默飞世尔科技有限公司 101型电热鼓风干燥箱(北京市永光明医疗仪器厂DZF-6021型真空干

25、燥箱(上海精密实验设备有限公司分析天平 (Sartorius 十万分之一 欧前胡素对照品购自中国药品生物制品检定所(批号为:110826-200511 乙腈为色谱纯;水为纯净水;其他试剂均为分析纯;辅料均为药用规格2.2提取与干燥工艺研究2.2.1当归提取工艺研究当归药材中挥发油成分多达数十种,其中以藁本内酯为主,另外还含有少量 香荆芥酚、苯酚、对苯甲酚、别罗勒烯、正丁烯基辅内酯等。由于当归挥发油中 藁本内酯成分不稳定, 故本试验对当归挥发油提取工艺的考察主要以当归挥发油 的收率为指标。2.2.1.1有机溶剂提取法称取当归粉 300g ,放置于 2000ml 圆底烧瓶中,加乙醚 1200ml

26、,加热回流 提取 5h ,收集乙醚液体,减压回收乙醚至烧瓶中少量乙醚剩余,转移到已称重 的蒸发皿中,低温水浴挥干剩余乙醚,称重,计算挥发油得率约为 0.10%。 由试验结果可以看出, 挥发油得率低,且挥发油黏着在蒸发皿的内壁上,收 集困难,在挥去乙醚的过程中,由于挥发油溶解在乙醚中,因此难以判断乙醚是 否挥发完全,所得挥发油仍有少量乙醚残留。故本方法不适于挥发油的提取。2.2.1.2水蒸气蒸馏法当归挥发油属于轻油,因此采用中国药典 2005年版一部附录 XD 挥发 油测定法甲法进行挥发油的提取。根据文献资料可知,浸泡时间、加水量、蒸馏 时间为影响挥发油收率的主要因素,对每个因素各设计 3个水平

27、,见表 2-1。设 计正交试验表,进行试验。每组试验各取当归粗粉 500g ,按照试验条件进行挥 发油提取,对提取结果进行统计分析。正交试验设计及结果见表 2-2、方差分析 结果见表 2-3。表 2-1 正交试验因素水平表因素水平A 浸泡时间 (h B 加水量 (倍 C 蒸馏时间 (h1 6 6 62 12 8 83 24 10 10表 2-2 正交试验设计及结果A B C D试验号1 2 3 4收率 (%1 1 1 1 1 0.182 1 2 2 2 0.203 1 3 3 3 0.224 2 1 2 3 0.195 2 2 3 1 0.226 2 3 1 2 0.197 3 1 3 2 0

28、.208 3 2 1 3 0.179 3 3 2 1 0.21 0.6 0.57 0.54 0.61 0.6 0.59 0.6 0.59 0.58 0.62 0.64 0.58( 2+ 2+ 23×K0.3521 0.3525 0.3537 0.3522l 0.0001 0.0005 0.0017 0.0001表 2-3 方差分析来源 l v MS FA 0.0001 2 0.00005 0.5000B 0.0005 2 0.00025 2.5000C 0.0017 2 0.00085 8.5000D(误差 0.0002 2 0.0001查方差分析表,得 F 0.01(2,2=99.

29、00, F 0.05(2,2=19.00。由试验结果和方差分 析可知,三个因素对当归挥发油的提取效率均无显著影响。由挥发油的提取效率可知,水蒸气蒸馏法所得当归挥发油提取效率不超过 0.25%,提取效率低,难以满足生产需要。从挥发油的提取情况来看,水蒸气蒸 馏法所得挥发油较透明,有浓郁的当归香味,但是水蒸气蒸馏法提取当归挥发油收集不完全, 一是长时间的提取可以导致当归挥发油黏着在挥发油提取器的侧壁 上,难以收集;二是当归挥发油部分与水形成芳香水溶液,造成了一定的浪费; 所得当归油中含有少量水分,在挥发油脱水的过程中也会造成一定的损失。2.2.1.3超临界流体萃取法(1试验方法与结果 将当归药材粉

30、碎成 20目左右的颗粒,取当归 2.22kg 置 5+1升超临界萃取装 置的 5升提取釜中,采用超临界流体萃取方式,参考文献报道 11,12及操作人员的 长期操作经验, 拟定提取挥发油萃取条件。 萃取釜压力 20MPa , 萃取温度为 36 , 分离器压力为 6.5 MPa,分离器温度为 70 , CO 2流速为 25L/h,蒸发器温度设定 为 0.5 。超临界流体萃取得挥发油 24.8g ,计算收得率约为 1.12%。所得当归挥发油 具有浓郁的当归香气,较水蒸气蒸馏法所得挥发油颜色较深,超临界流体萃取法 挥发油收得率明显高于水蒸气蒸馏法,且提取时间短,提取效率高,所得挥发油 不含水分,无需脱

31、水,可以直接使用。提取后所得药材干燥。鉴于超临界流体萃 取法的种种优点,所以决定采用超临界流体萃取法进行提取。由于当归本身含油 量并不高,超临界流体法萃取得率已经得到加大提高,提取条件也较为成熟,故 以上述条件为提取条件,不另外进行摸索。(2验证试验取 20目左右的当归药材 3份,每份约 2.30kg ,在上述萃取条件下进行萃取, 结果见表 2-4表 2-4当归挥发油萃取试验验证结果编号 药材重量 (kg 挥发油质量 (g 挥发油收率 (%1 2.25 25.22 1.122 2.27 25.88 1.143 2.22 24.64 1.11结果表明:验证试验结果与以上试验结果一致,表明当归挥发

32、油萃取工艺稳 定。2.2.2白芷提取工艺研究2.2.2.1欧前胡素测定方法的初步选择为保证中药用药安全、合理,有效地控制中药及其制剂的质量,通常要建立 科学、可靠的定量分析方法。本试验以白芷中欧前胡素的含量作为指标成分,在 其相关质量研究文献报道的基础上进行摸索, 初步建立了欧前胡素的高效液相测 定方法,从而为二灵软胶囊的处方设计、工艺优化、成品质量及稳定性等工作提 供了可参考的分析手段和评价方法。本试验采用药典色谱条件进行测定,以 Agilent XDB-C18、 150mm×4.6mm、 5µm 色谱柱进行测定,主峰出峰时间在 20min 左右,出峰时间过长,所以改变

33、流动相,缩短出峰时间。(1溶液的制备对照品溶液的制备 取欧前胡素对照品于五氧化二磷干燥器中减压干燥 24小时,精密称取欧前胡素 8.49mg ,置于 25ml 容量瓶中,加甲醇定容至刻度,超 声使溶解,即得浓度为 0.3408mg/ml的欧前胡素对照品贮备液。精密量取欧前胡 素对照品贮备液 2ml ,置 10ml 容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得浓度 为 0.06816mg/ml的对照品溶液。样品供试品溶液 取白芷药材细粉 2g ,加入当归挥发油少许 (挥发油为水蒸 气蒸馏法所得 ,置于三角瓶中,加甲醇 50ml ,超声处理 30min ,过滤,取续滤 液,续滤液用微孔滤膜过滤,得样品溶

34、液。(2色谱条件的选择欧前胡素测定波长的选择取欧前胡素对照品溶液,在 200400nm 波长范围内,进行紫外扫描。扫描 结果见图 2-1。由扫描图可以看出 300nm 、 248nm 、 218nm 、 204nm 处分别呈现 吸收峰,但其中以 300nm 处吸收峰峰形规则,干扰小,因此选择 300nm 作为欧 前胡素的测定波长,见图 2-1。流动相的选择色谱柱:Agilent XDB-C18, 150mm×4.6mm、 5µm、检测波长:300nm 、柱温:25 、流速:1ml/min等基本色谱条件不变,进行流动相的选择。参考相关文献, 对不同流动相进行选择,结果以乙腈-

35、水(57:43为流动相分离效果最好,见 图 2-2。2.2.2.2白芷的提取白芷的化学成分主要分为两大类,即香豆素类以及挥发油类。香豆素类成分 的含量约为 0.211%1.221%,其中主要有氧化前胡素 0.06%0.43%,欧前胡素 0.1%0.83%,异欧前胡素 0.050.15%,其他香豆素类成分如比克白芷素、比克 白芷醚,脱水比克白芷素、新比克白芷醚、水合氧化前胡素、珊瑚菜素、花椒毒 素等。本试验以香豆素类有效成分中欧前胡素的含量为检测指标,对白芷进行提 取条件的摸索。文献报道中,多以乙醇回流法、乙醇渗漉法对其进行提取研究,也有部分文 献报道采用超临界流体萃取法进行提取。 本试验主要考

36、察了渗漉法与回流法在白 芷提取过程中的不同, 并在进行当归超临界萃取的同时对白芷的超临界萃取进行 了一次摸索性试验。(1超临界流体萃取法方法 将白芷粉碎成 20目左右的粗粉,取白芷 2.04kg 置 5+1升超临界萃 取装置的 5升提取釜中,采用超临界流体萃取方式,参考文献及操作人员的长期 操作经验,拟定萃取釜压力 25MPa ,萃取温度为 30 , CO 2的流速为 20L/h进 行提取。收集白芷萃取物 11.30g ,收率约为 0.55%,萃取物呈淡黄色油状液体, 有浓郁的白芷香味。方法 将白芷粉碎成 20目左右的粗粉,取白芷 2.01kg 置 5+1升超临界萃 取装置的 5升提取釜中,采

37、用超临界流体萃取方式,参考文献及操作人员的长期 操作经验,拟定萃取釜压力 22MPa ,萃取温度为 40 , CO 2的流速为 22L/h进 行提取。收集白芷萃取物 12.51g ,收率约为 0.62%,萃取物呈淡黄色油状液体, 有浓郁的白芷香味。精密称取两种萃取条件下所得白芷萃取产物 0.1071g 、 0.1068g , 分别置 10ml 容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,再分别精密吸取甲醇溶液 2ml ,至 25ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜过滤,高效液相色谱法测定其欧 前胡素的含量,计算两种萃取条件下欧前胡素的转移率分别为 为 25.12%、 30.18%。根据上述试验

38、结果可知, 两种条件下所得白芷萃取产物的萃取效率和转移率 均无法满足试验要求,故不选择超临界流体萃取方式进行白芷的提取。(2渗漉提取法与回流提取法的比较研究渗漉法与回流法是白芷提取常用的方法,文献的报道也比较多,两种方法各 有优缺点,本研究即针对本项目要求对两种提取方法进行比较,从而选择适宜本 试验要求的白芷提取方法。渗漉提取法乙醇浓度的选择 文献报道中 13,14,对于白芷提取所用的乙醇浓度差异较 大。 本试验采用超声的方法考察不同浓度乙醇对白芷提取的效果,以欧前胡素的 得率为指标进行评价。分别称取白芷粉末 2g, 精密称定,置 25ml 容量瓶中,分别加入适量浓度为 20%、 40%、 6

39、0%、 80%、 95%的乙醇,超声处理 30min ,放冷至室温,分别加相 应浓度的乙醇溶液至刻度,摇匀,过滤,分别精密量取 5ml 滤液于 10ml 容量瓶 中,加相应浓度的乙醇溶液稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜过滤,高效液相色谱法 测定其欧前胡素的含量,结果见表 2-5。表 2-5 不同浓度乙醇提取结果乙醇浓度 (% 20 40 60 80 95提取结果 (mg/g 0.5863 1.5809 1.8009 1.8387 1.8074 由表上结果可以看出,白芷的提取效率随乙醇浓度的增加而增加。但当乙醇 浓度大于 60%以后,白芷的提取效率随乙醇浓度变化增加不显著。因此在设计渗 漉法提取正交试

40、验时,则选择用 50%、 60%、 70%浓度的乙醇来进行考察。乙醇用量的考察 采用渗漉法对白芷提取过程中乙醇的用量进行考察, 取白 芷粗粉 50g ,加 60%乙醇浸泡 24h 后,以 3ml·min -1的速度进行渗漉,分别在渗 漉量为 2倍、 4倍、 6倍、 8倍、 10倍、 12倍乙醇量的情况下,精密量取渗漉液2ml ,置 10ml 容量瓶中,加 60%乙醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜过滤,高效 液相色谱法测定其欧前胡素的含量。 以欧前胡素的提取结果为指标,来考察不同 溶剂的提取效果,结果见表 2-6。表 2-6 不同渗漉量提取结果溶剂量 (倍 2 4 6 8 10 12 提取

41、结果 (mg/g 1.2826 1.7990 1.9366 1.9534 1.9983 2.0043 由表上结果可以看出,白芷的提取效率随乙醇用量的增加而提高,但当渗漉 量达 6倍量时,提取效率随乙醇用量增加提高不明显。因此在渗漉法提取白芷的 正交试验设计中,则选择以 4倍、 6倍、 8倍渗漉量进行考察。渗漉法提取正交试验研究 根据白芷的理化性质和前面所作的单因素试验 结果,并参考文献内容 13,14,设定影响白芷提取效果的主要因素为:乙醇浓度、 浸泡时间、提取溶剂量,每个因素设计三个水平,见表 2-7。以欧前胡素的提取 结果为指标,选择 L 9(34 正交表进行正交试验。每次用同一时间粉粹的

42、白芷粗粉 50g ,按照正交表设计开始试验,渗漉速度为 3ml·min -1。对提取结果进行统计分 析。正交试验设计表及结果见表 2-8,方差分析见表 2-9。供试品溶液的制备:精密量取渗漉液 2ml 至 10ml 容量瓶中,加相应浓度的 乙醇溶液稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜过滤,滤液即白芷供试品溶液。表 2-7 正交试验因素水平因素水平A 乙醇浓度 (% B 浸泡时间 (h C 溶剂用量 (倍数 1 50 12 42 60 24 63 70 48 82-8正交试验设计及试验结果A B C D试验号1 2 3 4试验结果 (mg/g1 1 1 1 1 1.54 1.532 1 2 2

43、2 1.91 1.893 1 3 3 3 2.01 2.014 2 1 2 3 1.89 1.895 2 2 3 1 1.96 1.956 2 3 1 2 1.43 1.437 3 1 3 2 1.89 1.888 3 2 1 3 1.69 1.689 3 3 2 1 1.94 1.94 10.89 10.62 9.30 10.86 10.55 11.08 11.46 10.43 11.02 10.76 11.70 11.17( 2+ 2+ 23×K58.5558 58.5547 59.1186 58.5822l 0.0196 0.0185 0.5824 0.0460表 2-9正交试

44、验结果分析来源 l v MS FA 0.0196 2 0.0098 2.3333B 0.0185 2 0.0093 2.2024C 0.5824 2 0.2910 69.2857D(误差 0.0460 11 0.0042查方差分析表,得 F 0.01(2,11=7.21, F 0.05(2,11=3.98因素 A 与因素 B 的 3个 水平间没有显著性差异,因素 C 有显著性差异,其影响因素大小为 C > A >B, 由直观分析可以看出最佳提取工艺为 A 3B 2C 3,即采用 70%乙醇浸泡 24h ,渗漉 8倍量。验证试验 称取白芷粗粉 3份,各 50g ,分别采用 70%乙醇

45、浸泡 24h ,渗漉8倍量,渗漉速度为 3ml·min -1的方法进行提取,测定欧前胡素的含量 , 结果见 表 2-10。表 2-10验证试验结果试验编号 1 2 3提取结果 (mg/g 2.12 2.06 2.11结果表明,验证试验结果与正交试验结果一致,表明白芷渗漉法提取工艺稳 定。干浸膏收率考察 精密量取白芷渗漉液两份,各 50ml ,分别至干燥至恒重 的蒸发皿中,水浴加热,挥去乙醇溶剂,在 105 条件下,干燥至恒重,计算该 提取工艺条件下白芷的干浸膏平均收率为 22.92%。回流提取法药材粒度的选择 分别称取不同粒度的白芷粉末各 50g ,精密称定,用 12倍量 80%乙醇

46、加热回流提取 3次,每次 2小时,合并提取液。精密量取提取液 2ml 至 10ml 容量瓶中,加相应浓度的提取溶剂稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜过 滤, 高效液相色谱法测定欧前胡素的含量,考察不同药材粒度的提取效果, 结果 见表 2-11。表 2-11 药材粒度考察结果粉碎度 粗粉 中粉 细粉提取结果 (mg/g 1.80 1.95 1.99由考察结果可知,粗粉的提取效率稍低,中粉与细粉提取效率较高,且差别 不大,因此选择中粉即可。回流法提取正交试验研究 参考以上试验结果及所查阅文献 15,选择影响 白芷提取效果的主要因素有:乙醇浓度、提取溶剂量、回流时间、提取次数,每 个因素设计 3个水平,见表

47、 2-12。以欧前胡素的提取效率为指标,选择 L 9(34 正交表进行正交试验。每次用同一时间粉粹的白芷粉末 50g ,按照正交表设计开 始试验。 对提取结果进行统计分析, 正交试验表设计及结果见表 2-13,方差分析 见表 2-14。样品供试品溶液的制备:精密量取合并的提取液 2ml 至 10ml 容量瓶中,加 相应浓度的提取溶剂稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜过滤,滤液即白芷的供试品溶 液。表 2-12 正交试验因素水平因素水平A 乙醇浓度 (% B 溶剂量 (倍 C 回流时间 (h D 提取次数1 70 8 1 12 80 10 2 23 90 12 3 3表 2-13正交试验设计及试验结果A

48、 B C D试验号1 2 3 4试验结果 (mg/g1 1 1 1 1 1.81 1.802 1 2 2 2 1.99 2.043 1 3 3 3 2.07 2.014 2 1 2 3 2.18 2.225 2 2 3 1 1.90 1.906 2 3 1 2 2.10 2.107 3 1 3 2 1.83 1.958 3 2 1 3 1.97 1.969 3 3 2 1 1.77 1.76 11.73 11.79 11.74 10.94 12.39 11.76 11.95 12.00 11.24 11.80 11.67 12.41( 2+ 2+ 23×K69.5551 69.445

49、3 69.4524 69.6374l 0.1099 0.0002 0.0073 0.1922表 2-14正交试验结果分析来源 l v MS FA 0.1099 2 0.0550 50.0000B 0.0002 2 0.0001 0.0909C 0.0073 2 0.0036 3.2727D 0.1922 2 0.0961 87.3636 误差 0.0100 9 0.0011查方差分析表,得 F 0.01(2,9=8.02, F 0.05(2,9=4.26因素 B 与因素 C 没有显著 性差异,因素 A 与因素 D 有显著性差异,其影响因素大小为 D > A >C>B,由直观

50、分析可以看出最佳提取工艺为 A 2B 3C 2D 3, 即采用 12倍量 80%乙醇加热回流提取 3次 , 每次 2h 。验证试验 称取白芷中粉 3份,各 50g ,分别采用 12倍量 80%乙醇加热回 流提取 3次 , 每次 2h ,进行提取,测定欧前胡素的含量 , 结果见表 2-15。表 2-15 验证试验结果试验编号 1 2 3提取结果 (mg/g 2.18 2.15 2.16结果表明,验证试验结果与正交试验结果一致,表明白芷回流法提取工艺稳 定。浸膏收率考察 精密量取白芷提取液两份,各 50ml ,分别至干燥至恒重的 蒸发皿中,水浴加热,挥去乙醇溶剂,在 105 条件下,干燥至恒重,计

51、算该提 取工艺条件下白芷的干浸膏平均收率为 14.07%。2.2.3干燥工艺研究本试验当归主要提取其挥发油部位,超临界流体萃取所得挥发油收率高,不 含水分,所以可以直接应用。干燥工艺主要针对白芷提取溶液进行研究。 分别量取 70%乙醇浸泡 24h ,渗漉 8倍量条件下所得的白芷渗漉液 3份,各 400ml ; 12倍量 80%乙醇加热回流 3次,每次 2h 条件下所得白芷提取液 3份, 各 600ml ,减压回收乙醇至小体积,转移至蒸发皿中,水浴加热至稠膏状态,分 别采用烘干法、减压干燥法、冷冻干燥法进行干燥,比较三种干燥方法所得干浸膏的状态,并考察欧前胡素的转移率,综合比较进行判断,结果见表

52、 2-16。 供试品溶液制备方法:三种干燥方法所得干浸膏,分别取少量,精密称定, 至容量瓶中,加甲醇适量超声溶解,放冷至室温,加甲醇定容至刻度,摇匀,微 孔滤膜过滤,高效液相色谱法测定其欧前胡素的含量,计算转移率。表 2-16三种干燥方法结果比较干燥方法 提取方法 欧前胡素转移率 (% 干浸膏状态渗漉法 65.26 烘干法回流法 66.31 干浸膏黏附在蒸发皿内壁,干浸膏坚硬, 难以取出,粉碎过程干浸膏变软。渗漉法 92.18 减压干燥法回流法 92.96 干浸膏成蓬松状态,易于取出,粉碎过程 顺利。渗漉法 99.85 冷冻干燥法回流法 99.96 干浸膏成蓬松状态,从冷冻干燥机取出, 表面出

53、现吸湿现象,且干浸膏内混有有油 状物质。粉碎过程中干浸膏吸湿软化。由表可知烘干法欧前胡素转移率低,所得浸膏坚硬,粉碎过程易软化;冷冻 干燥法转移率高,但所得干浸膏极易吸湿,且难以粉碎,所以烘干法与冷冻干燥 法不适于白芷提取液的干燥处理。减压干燥法转移率较高,干浸膏易于粉碎,适 于白芷提取液的干燥处理。2.3制剂成型工艺研究2.3.1剂型的选择2.3.1.1提取物的特性与要求二灵软胶囊由当归、白芷两味药物组成。在制剂的提取工艺中,当归主要提取其挥发油部分,所提取产物为脂溶性油 状物质;白芷主要提取其脂溶性部分,主要成分为小分子香豆素类化合物。该制 剂所选用的剂型应适用于脂溶性物质,能够有效保留脂

54、溶性成分,并宜于成型。 如制成液体制剂,如口服液、注射液等,由于制剂本身含有挥发油类成分,易造 成有效成分的挥发,难以避免挥发油等部分成分的氧化、聚合等反应,造成制剂 性质不稳定,影响药物的质量;白芷中有效成分的加入也会增加制剂的难度,影响制剂的美观,故不适宜制成液体制剂。如制成固体制剂,如片剂、颗粒剂等, 制剂难度降低,但由于挥发性成分较多,仍然存在制剂不稳定的因素,影响产品 质量。 如制成半固体制剂, 如软胶囊, 则可以有效得兼容两种脂溶性物质的混合, 并可以有效防止当归挥发油的挥发,便于制剂的成型。2.3.1.2软胶囊剂的特点软胶囊剂可以将油状药物、药物溶液、药物混悬液、糊状物甚至药物粉

55、末定 量压注并包封于胶囊内。软胶囊可以根据不同种类药物的需求、患者需要及临床 需要制成各种形状的密封胶囊,并可以通过软胶囊囊皮颜色的改变, 使软胶囊制 剂更加美观。另外,软胶囊制剂还具有生物利用度高、含量准确、均匀性好等优 点。对于油状药物,软胶囊制剂可以省去吸收固化等处理步骤,并有效避免油类 从辅料中渗出,其密闭性还有助于油类药物的稳定保存。故初步确定本制剂的剂 型为软胶囊剂。2.3.2软胶囊内容物制备工艺研究2.3.2.1药料的准备本品药料为白芷干浸膏粉与当归挥发油。当归挥发油为油状液体,与植物油 混溶, 可直接应用; 白芷浸膏粉为油不溶性物质, 需要与基质混合制备成混悬液。 混悬液的稳定

56、性与固形物粒度的大小有很大的关系,固形物的粒度越小,混悬液 的稳定性越好。以混悬液为内容物的软胶囊,为保证内容物的稳定性,一般固形 物的粒度不小于 100目,参考文献 16,本试验选择 120目白芷细粉。当归挥发油的准备:取当归,粉碎过 20目,在萃取釜压力 20MPa ,萃取温 度为 36 ,分离器压力为 6.5 MPa,分离器温度为 70 , CO 2流速为 25L/h,蒸发 器温度 0.5 的条件下进行萃取,收集所得挥发油,备用。白芷干浸膏粉的制备:取白芷,粉碎成中粉,用 12倍量 80%乙醇加热回流 提取 3次 , 每次 2h ,合并提取液,回收乙醇,减压干燥,所得干浸膏粉碎过 120

57、目筛,备用。2.3.2.2分散基质的选择软胶囊除少数液体药物外,大部分药物需要用适宜的液体基质溶解或混合。 常用的基质有植物油、芳香烃酯类、有机酸、甘油以及表面活性剂等。大多数软 胶囊选用油类物质或油与油的混合物作为基质, 水溶性强的药物,较多的可以应 用 PEG400作为分散介质。本试验所提取的当归挥发油、白芷醇提物均为脂溶性物质,所以选择的分散 介质应该为油脂性物质。软胶囊的油脂性基质主要为植物油类物质, 其原料天然 广泛,对身体无毒副作用,是较理想的分散基质。本试验所研制的二灵软胶囊主 要用于治疗风秘,而麻油是应用较为广泛的一类植物油,对身体无毒副作用,并 且本身具有一定的润肠通便作用,因此决定采用麻油作为分散基质。2.3.2.3助悬剂的选择(1助悬剂种类的选择中药软胶囊的制备,单纯依靠粉末与油进行混悬。常不能起到良好的混悬效 果,会出现内容物性状不均匀、易分层等缺点,造成后续工艺压丸困难,装量不 准确,制剂性质不稳定等。因此需要选择适宜的助悬剂降低粒子的沉降速度,使 内容物长时间保持稳定。助悬剂的种类很多,有低分子化合物、高分子化合物、还有部分表面活性剂 也可以作为助悬剂。本试验选择以麻油作为分散基质,助悬剂可以选用能够增加 分散基质粘度的固体类物质, 本试验分别以蜂蜡、 大豆磷脂、 单硬脂酸甘油酯为 助