C小鼠免疫功能及细胞因子的作用

1、发醉黄黄对BALB/C小鼠免疫功能及细胞因子的作用作者：王晓波，刘殿武2,郭丽莉，王本华【摘要】目的研究发酵黄苣对小鼠免疫功能及细胞因子的影响。方法将小鼠随机分成正常对照组、免疫抑制组、黄苣对照组和发酵黄苣低、中、高3个剂量组(剂量分别为1,2,5g/kg),饮水法喂饲小鼠，分别检测以下指标：小鼠胸腺和脾脏指数，淋巴细胞亚群，淋巴细胞增殖功能，腹腔巨噬细胞吞噬功能、IL-1、IL-2分泌。结果与免疫抑制对照组比较，发酵黄苣高、中剂量能显著促进淋巴细胞的转化，使CDSCD4、CD4/CD8明显上调，促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力，促进白介素-1(IL-1)和白介素-2(IL2)的产生(P均&

2、;lt;0.05)。结论发酵黄苣能提高机体的免疫功能，具作用机制与激活T细胞、T淋巴细胞亚群、巨噬细胞功能及促进细胞因子分泌有关。【关键词】发酵黄苣;免疫功能；细胞因子；小鼠黄苣作为常用的补益类中药，具有补气固表及健脾利肺的功效。目前国内外现代研究也已证实，黄苣含有多糖、甘类、生物碱、黄酮、微量元素及其氨基酸等成分具有调节机体免疫功能的作用1,2。为了进一步开发传统的中药剂型，研究发酵黄苣对小鼠免疫系统及功能的作用，对传统中药的二次开发提供理论及应用的可行性依据。1材料与仪器1.1动物及细胞株健康BALB/C小鼠，雌雄各半78周龄，体质量1822g,由河北医科大学实验动物中心提供；C57BL/

3、0雌性体质量1820g,一级动物，合格证号：冀医动字第04035号。基、 小牛血清： 美国GIBCO司;胰蛋白酶、 曝噪蓝（MTT）、 刀豆蛋白（ConA）为Sigma公司产品。抗Thy1、2;抗LST4抗Lyt2美国FLUKA公司;环磷酰胺，上海第二制药厂制造，（CycloPhosPhamideCP）二甲基亚碉（DMSO购于上海化学试剂公司，其余试剂均为分析纯。1.3仪器倒置显微镜（PM-10AD） ,OLYMOUS日本。 二氧化碳孵箱（TC2323美国SHEL.LA公司）;酶标仪（奥地利J公司）。流式细胞仪，美国（FAC阳20）。2方法2.1动物分组处理与给药BALB/C小鼠随机分成6组，

4、每组7只动物，分别为生理盐水对照组、环磷酰胺组、黄苣对照组、发酵黄苣小剂量组（1g/kg）、中剂量组（2g/kg）和高剂量组（5g/kg）。黄苣组（1g/kg）每天每只灌服0.5ml,对照组灌服等量生理盐水。环磷酰胺组ip给药连续3d造模。第8天各组颈椎脱臼处死小鼠，无菌取胸腺、脾测定。2.2脏器/体重比值测定实验结束，称质量、胸腺重、脾重，取小鼠脾脏和胸腺称重（湿重），计算脏器指数（尸脏器重量（g）/动物质量（g）x100%2.3小鼠脾细胞悬液的制备及脾淋巴细胞活力的检测采用MTT法网小鼠分组与喂饲方法同上。无菌取脾，经过研磨200目细胞筛网过滤、经常规裂解红细胞，hanks液洗涤，离心2次

5、，制得单细胞接种于96孔板（100膜孔），每组6个平行孔，每孔100/37日呆湿培养68h后， 每孔加MTT104继续培养4h后， 每孔加入DMSO150w,1振荡5min,紫色结晶完全溶解后于酶标仪570nm测定A值。2.4小鼠脾细胞亚群测定（流式细胞仪）4将68周龄、体质量（202） gBALB/C性小鼠随机分成6组， 每组6只。 无菌取小鼠胸腺细胞，4%甲醛固定，预冷PBS青洗，加入荧光标记的CDSCD4CD8单克隆抗体50%137C30min1000r/min离 心10min,加 入 荧 光 标 记 的 二 抗 工 作 液50%137c30minRNase消化，1ml碘化丙咤，每份样本

6、平均测定1X10妗，分析相应阳性细胞的含量。2.5小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定5小鼠分组与喂饲方法同上。按常规制备小鼠腹腔巨噬细胞，置24孔培养板每孔加细胞悬液1ml,5%CO237W养2h,去上清液，用RPMI1640培养液洗去未贴壁细胞，每孔加入0.1%中性红生理盐水液1ml,5%CO237W养2h后， 甩弃中性红， 并用预温的BPS青洗未吸收的中性红，吸水纸吸干，每孔加入细胞裂解液1ml,静置4C过夜，用蒸储水调零，于722分光光度计550nm处测定吸光度A值，A值表示巨噬细胞吞噬功能的强弱。2.6腹腔巨噬细胞产生IL-1的诱生及测定5小鼠分组与喂饲方法同上。将24孔板中贴壁纯化的腹腔巨

7、噬细胞各孔加入LPS（冬浓度10g/m婚养24h后收获上清，为诱生的IL-1粗品，-20日呆存待测。无菌取C57BL/6小鼠胸腺细胞，用10%小牛血清的RPM-1640清洗并调细胞浓度1X10仆/ml,加入96孔平底板，每孔0.1ml,同时加入1C端释的诱生IL-10.1ml,ConA监浓度2.5g/ml）0.1ml每只鼠3个复孔，置5%CO237C培养，用MTT比色法测定胸腺细胞的增殖。2.7脾细胞IL-2的诱生及测定6小鼠分组与喂饲方法同上。按常规制备脾细胞，调细胞浓度为2.5X106/ml,置24孔板孔/1ml,加入ConA（浓度2.5区g/ml）1m孔，置5%CO237C培养40h后，收获上清为诱生的1-2,-20日呆存待测。常规制备正常小鼠脾细胞，调细胞浓度2.5X1061/ml,加入96孔平底板，每孔0.1ml,加入1C8稀释的诱