河南中科院科技成果转移转化项目中期进展情况报告

1、河南省中科院科技成果转移转化项目 中期进展情况报告一.项目执行情况。河南兴鹤电子有限公司与北京中科院微生物研究所联合申请的“重组生物酶制剂开发”技术开发项目获得省科学院审批通过后， 公 司为了项目的顺利实施，首先通过招聘的方式从大学院校接受本科毕 业生XX名，充实加强研发团队，同时派遣两名技术骨干赴北京进行 为期6个月的专项技术培训。其次，公司通过优化组合为实验室和生 产车间的建设提供了共XXm2的建筑面积，并且聘请专业团队帮助设 计和建设符合国家标准的实验室以及相关的小试、中试发酵设备。第三，对生产工艺从实验室到工业生产的过程的转换进行试运行（如蒸汽供应和用量、工程菌的活化到高密度发酵控制等

2、）进行实验。现阶 段，试验基地和中试线基本建设完成。二.科技基础设施建设情况。1. 发酵小试、中试设备，多功能提取罐、恒温干燥箱、冷冰干燥机、高效液相色谱仪、细胞粉碎机、在线控制系统等 研发试验生产设备已做了部分购买，部分正在进一步的考 察中。2. 各类生产原材料基本到位，检测所需要的药品基本到位。3. 人员的招聘基本到位，正在进行理论培训工作。三.与中国科学院有关院所合作协议的落实情况。与北京中科院微生物所合作协议得到进一步发展， 我们派遣技术 人员到中科院微生物所进行理论和小试的实际学习操作。中科院微生物所自6月份以来先后两次派遣高级研究技术员到我项目建设现场 对我项目的进展情况进行指导。

3、四.项目实施的技术路线、关键技术选择等的科学性和先进性。1. 项目的技术路线。(1)菌种活化。将在低温保藏的菌种接种于活化斜面，在一定 的温度下，培养一段时间，活化菌种。(2)摇瓶培养。将活化好的菌种接种于摇瓶内，在一定条件下 培养12h 16h, OD达到一定水平。(3)种子培养。将摇瓶种子接种入一级种子罐，培养到一定OD 值,接入发酵罐，进行发酵培养，达到最优菌体浓度。(4)在一定温度，ph,通气条件下，进行发酵培养，当达到最 优菌体溶度时，加入诱导剂，积累目的产物到一定程度，可以结束发 酵，再经过一定的预处理。(5)菌液分离。利用离心机，板框过滤，膜分离等技术将菌体 和发酵清液分开。(6

4、)目的产物在菌体细胞内部。提取目的产物的流程，首先将 细胞破碎，经过离心处理去掉破碎的细胞碎片，留上清液，经过提取 纯化等工艺，再通过固定化等方法提取目的产物。(1)构建基于大肠杆菌的高效异源表达系统，通过现代蛋白质工程的方法提高D-氨基酸氧化酶的活性和可溶性表达水平；(2)采用板式换热器连消灭菌的方法，以达到灭菌温度稳定， 时间短，效果好，营养成分破坏小，既节省了原材料，还提高了菌体 生长效率，符合最佳高密度细胞培养的要求；(3)攻克膜分离技术，达到提高最终产品的质量和收率；(4)高密度培养的方式，达到提高最终目的产物产量的目标。五.主要技术经济指标的完成情况。(1)高效D-氨基酸氧化酶工程

5、菌的构建和高密度发酵条件研究 通过优化密码子实现 D-氨基酸氧化酶的高效表达。在 20L发酵罐的 实验条件下，通过优化碳氮源，利用非常廉价的豆泊作为原料，经过 水解处理后作为发酵培养基主要成分，工程菌的发酵活力可以达到 8000U/L,新的培养基配方可以导致生产成本的大幅下降。在此基础 上通过完善补料方式，发酵活力提高到 12000U/L。(2)固定化酶制备的技术突破以前使用的用于固定化的材料为国外进口，价格比较昂贵。为满足实际生产需要，通过试用10几种国产材料，并对固定化方法进行 考查，最后确立一种树脂作为固定化材料，通过交联法固定酶，通过 稳定性实验检验，性能良好。通过调配酶和树脂的用量，

6、可以生产出 符合质量标准(50U/m0的固定化酶。国产树脂的试验成功，为后期 的大规模生产节省成本。(3)用于工业生产的实验室和生产车间建设自行补充 六.项目的组织方式、协调管理情况。1 .项目承担单位、参加单位的任务分工与责任(1)项目承担单位的任务分工和责任河南兴鹤电子有限公司主要任务和责任包括以下几点资金投入，保证项目的顺利实施；建设生产车间并装修，以达到项目生产时所需的无尘、无菌、 合适的湿度和温度、地面和墙面的光滑度和密封性等要求；购买发酵系统小试、发酵中试、多功能提取罐、恒温干燥箱、 冷冰干燥机、高效液相色谱仪、细胞破碎机、在线控制系统等研发、 试验和生产设备；聘请生物技术专业人士

7、，与中国科学院微生物研究所共同攻克 项目产品成果转化时的关键技术；招聘和培训生产员工，保证成果转化成功后产品的正常生产。(2)参加单位的任务分工和责任中国科学院微生物研究所的主要任务和责任攻克项目成果转化过程中的关键技术；委派专业人士到兴鹤公司进行现场指导；保证菌种质量和生产工艺的成熟度；培训公司新聘请的生产员工；提供试验室建设和生产车间装修技术支持2 .项目组主要成员的任务分工与责任项目负责人秦秀宾董事长主要负责项目的总协调， 保证项目按计 划实施；项目技术负责人吴胜，主要负责项目技术进度按计划实施、 培训兴鹤电子公司相关试验和技术人员、 委派相关高技术人员到公司进行 技术指导；项目实施总经

8、理阮国祥，主要负责车间装修改造、设备购买和调 试、聘请专业技术人才和招聘试验、生产员工等。七.经费落实、管理使用情况金额（万元）申请拨款数量36设备改造与租赁 费8材料费16测试化验加工费128 .项目产生的经济、社会、环境效益和成果应用前景。项目完成后可以达到年产10吨重组生物酶制剂D-氨基酸氧化 酶的生产能力，按每千克3165元人民币计算，可以实现年销售收 入3165万元，净利润632万元，纳税473万元。替代国外进口，提升我国重组生物酶制剂国际竞争力。现阶 段国内应用的D氨基酸氧化酶70%U上依赖进口，该项目完成后生 成的产品完全可以替代进口，产品的价格和质量完全优于国外进口同类产品;迎

9、合国家“十二五”发展需求，响应河南省“十二五”战略 性新兴产业发展规划 “生物产业”一“生物制造”中“大力推 进酶工程、发酵工程技术”发展的战略；带动地方经济发展，推动地方产业转型升级，对鹤壁市高新 技术新兴产业培育有重大带动作用；提升企业核心竞争力。通过 该项目的实施，提升公司在生物技术行业的影响力，增强公司在 生物技术方面的市场竞争力；解决劳动力就业问题。本项目实施，能够在一定程度上解决 当地部分就业压力。9 .项目后期执行工作计划。自2014年12月起到2015年5月份。1 .人员培训完成，技术人员到位。2 .设备全部到位，并安装调试完成。3,中试线全面完成，开始运行，开始小批量生产。十.本项目实施过程由于受原董事长去世， 新任董事长秦秀宾同 志要完成对公司业务的全面交接工作需要一定时间的影响，导致我集团公司本项目被推迟建设。经过三个