反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸

1、分 析 化 学 实 验 报 告实 验 名 称：反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸 专 业： 化学教育 班 级： 11化学班 姓 名： 指 导 教 师： 郭老师 日 期： 2013.9.7 一、实验目的 1、学习高效液相色谱仪的操作。 2、了解高效液相色谱法测定苯甲酸的基本原理。 3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。一、 实验原理 苯甲酸为具有苯或甲醛的气味的鳞片状或针状结晶，具有苯或甲醛的臭味。熔点122.13，沸点249，相对密度1.2659（15/4）。在100时迅速升华，它的蒸气有很强的刺激性，吸入后易引起咳嗽。微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。苯甲酸是弱酸，比脂肪

2、酸强。苯甲酸是重要的酸型食品防腐剂。在酸性条件下，对霉菌、酵母和细菌均有抑制作用，但对产酸菌作用较弱。抑菌的最适pH值为2.54.0，一般以低于pH值4.55.0为宜。在食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁，最大使用量不得超过2.0g/kg；在果酱(不包括罐头)、果汁(味)型饮料、酱油、食醋中最大使用量1.0g/kg；在软糖、葡萄酒、果酒中最大使用量0.8g/kg；在低盐酱菜、酱类、蜜饯，最大使用量0.5g/kg；在碳酸饮料中最大使用量0.2g/kg。 用高效液相色谱法将饮料中的苯甲酸与其它组分（如：柠檬酸（钠）、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的苯甲酸标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在

3、整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR和峰面积A后，可直接用tR定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的苯甲酸含量。 三、仪器和试剂 1、Agilent 1220高效液相色谱仪。2、色谱柱：Kromasil C18，5µ 150×4.6mm。3、流动相：75%甲醇（色谱纯）+25%PH=3.3的磷酸缓冲溶液（过三次）。 4、苯甲酸标准贮备溶液：准确称取0.0109g含量99.5%苯甲酸，用过三次的蒸馏水溶解，定量至50mL容量瓶中，并稀释至刻度。标样浓度217g·mL-1。4、测饮料试液：雪碧四、实验内容1、 将

4、标准贮备液分别稀释为0.434、0.868、2.17、4.34、8.68、21.7、43.4g·mL-1的标准系列溶液，并贴上标签。（稀释为50mL）2、 谱仪器条件：泵的流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：20L；柱温：室温。3、 仪器基线稳定后，进苯甲酸标准样，浓度由低到高。4、 品处理如下：（1）将约100mL雪碧置于一100mL洁净、干燥的烧杯中，用超声波脱气10min，以赶尽雪碧中二氧化碳。取5mL雪碧样品转移至50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。5、 将雪碧样品注入2mL样品瓶中备用。6、 “Agilent 1220高效液相色谱仪操作规程”分析饮料试液

5、。5、 结果处理1、 C=43.4时的谱图为下图1： 图12、 样品谱图为下图2： 图23、各浓度及数据 浓度 名称进样量/uL保留时间峰面积峰面积%峰高峰高率%0.434202.4931979801.45246304.30.868202.4974532653.4311975.852.17202.4973862122.75546628.934.34202.49710717538.0310494315.388.68202.493174543613.0419427826.7621.7202.497377084222.3346024146.5743.4202.500732748337.5888815664.26样品202.507378832932.0037016243.42五、计算苯甲酸的含量由标准曲线可得：C=（A-223503）/164090 A为样品峰面积；A=3788329 算得C=21.725ug/mL 1mL雪碧里含苯甲酸的量为：21.725ug/mL*50mL/5mL=217.25ug/mL=217.25ug/mL 500mL雪碧里含苯甲酸的量为：217.25ug/mL*500mL=108625ug=0.107g所以苯甲酸含量为0.107g/500mL=0.107g/500g=0.214g/kg 注意： 1、若出峰时间短，则