DNA连接酶与DNA聚合酶的比较ppt课件

1、DNADNA连接酶与连接酶与DNADNA聚合酶的比较聚合酶的比较DNADNA连接酶连接酶 DNADNA聚合酶聚合酶催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键不需要模板不需要模板 需要需要DNADNA的一条链为模板的一条链为模板游离的游离的DNADNA片段片段 单个的脱氧核苷酸单个的脱氧核苷酸形成完整的形成完整的DNADNA分子分子 形成形成DNADNA的一条链的一条链基因工程基因工程 DNADNA复制复制 相同点相同点 不不同同点点 模板模板 作用作用对象对象 作用作用结果结果 用途用途 PCRPCR技术与技术与DNADNA复制的比较复制的比较DNADNA复制复制

2、 PCRPCR技术技术解旋酶催化解旋酶催化 DNADNA在高温作用下变性解旋在高温作用下变性解旋 细胞内（主要在细胞核内）细胞内（主要在细胞核内） 细胞外（主要在细胞外（主要在PCRPCR扩增仪内）扩增仪内） DNADNA解旋酶、普通的解旋酶、普通的DNADNA聚合酶等聚合酶等 耐热的耐热的DNADNA聚合酶（聚合酶（TaqTaq酶）酶） 细胞内温和条件细胞内温和条件 需控制温度，在较高温度下进行需控制温度，在较高温度下进行区区别别 解旋解旋方式方式 场所场所 酶酶 温度温度条件条件 合成的合成的对象对象 DNADNA分子分子 DNADNA片段或基因片段或基因联系联系 模板：均需要脱氧核苷酸链

3、作为模板进行物质合成模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成原料：均为四种脱氧核苷酸原料：均为四种脱氧核苷酸酶：均需要酶：均需要DNADNA聚合酶进行催化聚合酶进行催化引物：均需要引物，使引物：均需要引物，使DNADNA聚合酶从引物的聚合酶从引物的33端开始连接脱氧端开始连接脱氧核苷酸核苷酸基因工程的概念基因工程的概念基因工程的别名基因工程的别名 DNADNA重组技术重组技术 操作环境操作环境 生物体外生物体外操作对象操作对象 基因基因 操作水平操作水平 DNADNA分子水平分子水平基本过程基本过程 剪切剪切拼接拼接导入导入表达表达结果结果 人类需要的新的生物类型人类需要的新的生物类型和生

4、物产品和生物产品目的基因导入受体细胞目的基因导入受体细胞 微生物细胞微生物细胞 农杆菌转化法、农杆菌转化法、基因枪法、花基因枪法、花粉管通道法粉管通道法 显微注射法显微注射法 常用方法常用方法 生物种类生物种类 体细胞或受精卵体细胞或受精卵将含有目的基将含有目的基因的表达载体因的表达载体提纯提纯取受精取受精卵卵显微注射显微注射受精卵发育受精卵发育获得具有新获得具有新性状的动物性状的动物 以农杆菌转化以农杆菌转化法为例：法为例：将目的基因插将目的基因插入入TiTi质粒的质粒的T-DNAT-DNA上上农杆农杆菌菌导入植物导入植物细胞细胞整合到整合到受体细胞的受体细胞的DNADNA上上表达表达转化过

5、程转化过程 植物细胞植物细胞 动物细胞动物细胞 CaCa2+2+处理法处理法受体细胞受体细胞 受精卵受精卵原核细胞原核细胞CaCa2+2+处理细胞处理细胞感受态细胞感受态细胞重组表达载体与感受态细重组表达载体与感受态细胞混合胞混合感受态细胞吸收感受态细胞吸收DNADNA分子分子目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定 方方 法法检测转基因生物染色体检测转基因生物染色体DNADNA分子上是否插入了分子上是否插入了目的基因目的基因, ,采用采用DNADNA分子杂交技术分子杂交技术检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA，采用分子杂，采用分子杂交技术交技术分子分子水平水平检测检测 导入导入DNADNA 分子分子 转录转录 翻译翻译 除了分子检测外，还需要进行个体生物学水平除了分子检测外，还需要进行个体生物学水平的鉴定，如做抗虫或抗病接