岛津LC-20A型高效液相色谱仪操作规程——相关操作

1、岛津LC-20A型高效液相色谱仪操作规程1实验前的准备1.1准备所需的流动相，自动进样器用的清洗液（甲醇-水50:50），用合适的有机滤膜（0.45 m）滤过。流动相装入溶剂储液瓶，确认吸滤头已置于液面以下。1.2配制样品和标准品溶液，用合适的滤膜(0.45 m)滤过。1.3根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（连接时注意方向）。2开机2.1接通电源，打开输液泵（脱气机自动打开）、检测器、自动进样器、柱温箱，顺序无关紧要；等待各仪器单元的指示灯变为绿色时进行下一步操作。2.2 打开电脑，双击桌面“LCsolution”图标，单击“仪器1”，弹出“登录”窗口，单击“确认”，听到两声蜂鸣，表示LCs

2、olution色谱工作站与仪器联机正常。2.3在LCSolution工作站 “仪器参数视图”中“自动排气”项进行排气时间设置，对输液泵及自动进样器进行必要的Purge操作，排出相应流路中的气泡；检查输液泵在动作前的压力显示值，必要时对此压力进行调零。3参数设定点击“仪器参数视图”进入仪器参数设置界面：选中“正常”或“高级”项，分别设定“数据采集”、“LC时间程序”、“检测器A”、“柱温箱”、“控制器”、“自动进样器”等参数。3.1“泵”参数：“模式”控制送液模式，“泵A总流速”设定流速，“溶剂B（C、D）浓度”为各相所占百分比，“压力限制（泵A）” 设置系统所能承受的压力范围，通常将“最大值”

3、设置为18.0，“最小值”设为0。3.2“柱温箱”参数：若使用柱温箱，则选中“启用柱温箱”复选框，在“柱温箱温度”设定柱温，“最高温度”设定最高保护温度（通常默认85）。3.3“检测器A”参数：“灯”项选“D2”表示将灯打开，选“关”则氘灯关闭；“波长通道1（1）”处设置检测波长；其余保持默认值。3.4 “数据采集”参数：选中“采集时间（检测器A）” 复选框，设置数据采集的“开始时间”和“结束时间”。3.5 “LC时间程序”参数：如采用梯度洗脱方式，则须编辑泵梯度洗脱程序，也可以通过时间程序控制柱温箱温度，检测波长等参数。3.6 *参数设定完毕，点击主菜单中“文件”下的下拉菜单“另存方法文件为

4、”保存方法文件。点击“下载”传送参数。4数据采集方法编辑点击“数据采集”进入采集数据编辑方法界面；点击主菜单“方法”下的“数据分析参数（检测器A）”编辑数据分析参数，设置“半峰宽”、“斜率”、“最小峰面积”等数据积分参数。保存方法：点击主菜单中“文件”下的下拉菜单“另存方法文件 ”保存数据分析参数。 5平衡系统点击“仪器开/关”（此时“泵开/关”同时开启），使仪器处于开启状态。系统开始运行，检查各单元参数应与方法设定一致，等待系统平衡。一般情况下，由于流动相不同，交换平衡时间不同。可以观察检测器输出信号变化，如果输出信号稳定不变，即认为接近平衡，可以调零等待，待基线平稳，压力稳定，系统平衡后，

5、准备进样分析。6进样分析6.1 单针进样分析：点击“单次运行”图标编辑样品参数：如“样品名”、“样品ID”等样品信息；在“方法文件”项调用本次分析的方法文件名，在“数据文件”项选择数据存储路径；填写本次分析的“样品瓶#”、“样品架#”、“进样体积”，点击“确定”后，开始进样操作。6.2 批处理分析：点击“批处理”，出现批处理表的对话框。使用“向导”创建批处理表。单击“向导”，弹出“批处理表向导”对话框，选择“新建”批处理表，在“方法文件”项选择方法文件，选择“开始样品瓶#”、“样品架#”，输入“进样体积”，点击“下一步”；“样品组数”选择1，样品类型选择“仅未知”，点击“下一步”；输入“样品名

6、”、“样品ID”，在“数据文件”项下选择数据存储路径，在“每组中的未知样品瓶数”项输入批处理个数，点击“下一步”；批处理向导-汇总报告不做设置，点击“下一步”；选择“关机方法文件”及“冷却时间”；点击完成，初步建立一个批处理表。在建立好的批处理表中，可以根据需要，手动更改样品信息及分析方法。单击“批处理开始”，批处理表开始运行。7报告编辑7.1在“LC再解析”中，点击“LC数据分析”。进入数据后处理界面。打开一个数据文件，可以在“色谱图视图”中观察LC色谱图，在色谱图上单击右键，可以更改积分参数，调整色谱图显示方式。7.2点击“数据报告”进入报告界面，调入报告格式文件，用鼠标将报告格式文件拖曳

7、到右侧报告栏内。报告格式，也可以通过内容选择图标，在报告中确定位置后，添加即可。右键功能很强大，可以根据需要对报告进行修改。8系统清洗数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗20min后，（如流动相含缓冲盐，换为不含缓冲盐的同比例流动相再冲洗20min），可采用以下方式冲洗系统： 换用纯水（至少含5%的有机相）冲洗系统及色谱柱至少60min，最后用甲醇或乙腈冲洗至少30min； 在“LC时间程序”中设置梯度程序清洗系统及色谱柱。 冲洗完成后，将整个流路都置于有机溶剂中。注：由于仪器单向阀结构及材质原因，建议流路最终保存在甲醇中，若长期使用乙睛流动相或用乙睛冲洗流路，易造成单向阀堵塞。9

8、关机清洗完成后，点击“仪器开/关”，观察“泵A压力”降至0.0MPa后，拆下色谱柱，连接二通阀；点击“关机”关闭系统，关闭仪器各单元电源按钮。 10、填写记录认真填写仪器使用记录，收拾实验台面。岛津LC-20A型高效液相色谱仪操作注意事项流动相： 1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质。样品：1、 采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、 用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量

9、用流动相制备样品液；3、手动进样时，进样量一般为定量环的1/2以下，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的35倍。色谱柱：1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等； 2、 使用符合要求的流动相；3、 根据需要决定是否使用保护柱；4、 如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5甲醇水溶液），再用甲醇冲洗；5、 色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、 不要高压冲洗柱子；7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；8、使用过程中注意轻拿轻放。操作过程：1、 开机操作：（1）注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设

10、定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（2）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件；2、正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命； 3、 建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果； 4、 使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡； 5、 溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，可用异丙醇超声洗涤；6、 使用者须认真履行仪器使用登记

11、制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器；7、 操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击“仪器开/关”即可；8、 连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，最好不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头；9、 操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用

12、小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法（新柱不提倡），若还是无法通畅，则需换柱；10、 运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完； 11、 样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可采用调低进样针进样高度的办法，注意设置时不要使进样针碰到瓶底，微量样品分析应使用微量样品瓶；12、 自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对准时，需重新定位；13、 泵压不稳或流量不准，可能为柱塞杆密封圈问题或seal wash垫圈问题，需更换；14、 基线产生不规则噪声，可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡（使其平衡，若用离子对试剂，在首次使用使需要足够的时间和溶剂体积，色谱柱才能达

13、到足够的平衡），流动相被污染（更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统），色谱柱被污染（为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱），检测器不稳定；15、 短期有规则的噪声，可能原因为泵压不稳或泵脉冲，调节溶剂不适当（如两种溶剂的互溶性问题），泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损，检测器不稳定；16、 长期有规则噪声，可能原因为室温不稳（未使用柱温箱）或使用柱温箱不当；17、 基线漂移，可能原因为系统不稳或没有达到化学平衡，室温不稳（未使用柱温箱），流动相污染或分解，柱污染，检测池泄漏，系统泄漏，固定相流失（另选流动相，另选色谱柱），测定的波长选择错误（对

14、溶剂有吸收），样品组分保留太长（用强度合适的溶剂清洗色谱柱），检测器不稳定；18、 每次进样时的保留时间不重复，可能原因为系统不稳或未达到化学平衡，由于气泡、各部件磨损等原因引起的泵压或泵脉冲输液不稳定，进样体积太大或样品浓度太高平衡被破坏，溶剂配比不合适，柱被污染；19、 无峰，可能原因为检测器选择错误，使用错误的流动相，样品降解； 20、 色谱峰比预计的小，可能原因为进样体积错误，检测器灯故障，进样问题（瓶号错、进样体积不合适、进样错误、针头堵塞）；21、 峰变宽，可能原因为进样体积太大或样品浓度太高，过滤器、保护柱入口、柱入口或连接管路有部分堵塞，检测器时间常数设置错误，进样器问题（如阀漏、针头堵塞或损坏），柱或保护柱被污染，对流动相来说样品溶剂太强，使用错误的色谱柱，温度变化；22、 出现双峰/肩峰，可能原因为保护柱或柱入口部分阻塞，柱或保护柱被污染，柱性能下降，保护柱失效，进样体积太大或样品浓度太高（样品过载），平衡破坏；23、