蝴蝶兰组培不定芽增殖条件的优化_图文

1、第26卷第6期2007年12月华中农业大学学报J6urnal of Huazhong Agricultural UniversityVoL26No.6Deo2007,856858。蝴蝶兰组培不定芽增殖条件的优化王冬云D汪建亚2冷+蔡桁约蒋祥娥趵(1华中农业大学园艺林学学院,武汉430070;2湖北省林木育种中心,武汉430079摘要以黄花蝴蝶兰的花梗腋芽诱导出的不定芽为外植体.利用正交设计法研究了培养基的无机营养、TIZ、有机添加物和蔗糖4种因素对不定芽增殖的影响。结果表明:蝴蝶兰不定芽增殖的最佳培养基配方为KC+TIZ o.20nlg/L+椰子水200mL/L+蔗糖14g/L+柠檬酸30In

2、g/L,其中有机添加物的种类和浓度对不定芽增殖的影响最大。关键词蝴蝶兰;不定芽增殖#正交设计;组织培养中图法分类号S682.310.36文献标识码A文章编号1000一2421(200706一085603蝴蝶兰(P口缸e加声s妇B1.spp.属热带气生兰,其花大,花期长,花色艳丽、色泽丰富,花形美丽别致,如蝴蝶翩翩起舞,因而得名。在热带兰中有“兰花皇后”之美称,是近年来最受欢迎的洋兰之一。蝴蝶兰是单茎性气生兰,植株很少发育侧芽,且种子极难萌发,对其进行常规性的繁殖,增殖速度很慢,故多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖。本研究在前人工作的基础上11,以黄花蝴蝶兰的花梗芽为材料;利用正交设计法进行组

3、织培养和快速繁殖,获得了试管苗,为满足市场需求提供了一条有效的途径。1.材料与方法1.1材料供试材料为湖北省林木育种中心引进的黄花蝴蝶兰品种,取其花梗(带腋芽为外植体。1.2试验方法接种当天剪取黄花蝴蝶兰花梗,于超净工作台上用75%酒精浸泡30s,0.1%升汞消毒12min(在消毒过程中要不断摇晃灭菌瓶让材料充分灭菌,最后用无菌水冲洗5次。将消毒后的材料先用无菌滤纸吸干其表面的水分,切成23cm的茎段(带腋芽,接种到诱导培养基上使其萌发,从萌发的花梗芽基部诱导出不定芽,再以不定芽进行增殖,最后将增殖芽接人生根培养基诱导生根,待其形成完整的植株后移栽。1.3培养条件培养基附加柠檬酸30mg/L,

4、琼脂6.5g/L,调节pH到5.4,121下高温灭菌20min。培养室温度为(25±2,每天光照12h,光照强度l500 1800lx。2结果与分析2.1外植体的获得将消毒后的花梗芽按极性插于培养基MS+ 6一BA10mg/L上,培养15d后花梗芽逐渐萌动膨大,1个月后长出带小叶的不定芽。2-2不定芽增殖利用正交设计法L。(44研究了培养基中的无机营养、TDZ、有机添加物和蔗糖4种因素对黄花蝴蝶兰不定芽增殖的影响。试验设计的因素、水平安排见表1。将不定芽分别接种在不同处理的培养基上,各接15瓶(每瓶3芽。观察到不定芽15d左右开始长出绿色的小芽点,20d左右长出小的原球茎,并逐渐生长

5、出不定芽(图1一A。在本试验中,新增殖的不定芽长度达到o.5cm以上才计数,2个月后统计不定芽增殖倍数(增殖倍数一增殖芽数/接种芽数,具体试验设计及结果见表2。采用极差分析法可以看出各因素的主次顺序,并找出参试因素的最佳水平组合(表2,由4因素收稿日期:2007一0110*湖北省重大科技攻关项目(2004从204802资助*通讯作者.Bmail:、阳ngjian”zooo王冬云,女,1982年生,硕士.现在工作单位:江苏省宿迁市泗洪县建设局,宿迁223900.E-mail:dongyunwangl982126.c咖第6期王冬云等:蝴蝶兰组培不定芽增殖条件的优化857表1L。s(44因素及水平表

6、1Tabk1.Ik钾t岫窖咖脚desi驴L16(44hct0幅a叫l州dsA B C/(嘴L一1D彰(gL-11A水平I胱IsI B无机营养Nutri甘lt soluti;C11弦n有机添加物a咖ic锄p0IIndsI E蔗糖Su瞰I下同111e s哪鼍鹳“la帽的志值大小可得出,在黄花蝴蝶兰不定芽增殖过程中,以KC为基本培养基较好;TDZ浓度需求量较高,适宜剂量为o.20mg/L;椰子水的效果优于苹果汁和土豆汁的混合物,椰子水适宜的剂量为200mL/L;蔗糖适宜的剂量为14g/L。从极差值大小可以看出,不同因素对蝴蝶兰不定芽增殖影响的主次关系为C>BD>A。这说明对于蝴蝶兰不定芽

7、增殖起主要作用的是有机添加物,其次是蔗糖和TIZ,培养基的无机营养对增殖的影响较小。表2正交试验设计及结果1ThMe2Tt把orth增OllaI d瞄i辨a硼tI瞬ex妇nt r俘mt处理T嗽nnd恤因素FhctorsA B C D111112221333144421242213234Z243131323241331434234l4342344321441210.88.816.81013。213。527。312。619.116.78.422.617.321.47.915.22.72.Z4.22.53.33.46.83.24.81.22.15.74.35.42.O3.82.13.24.83.2不

8、定芽增殖倍数11mte of ad坩ltitiousbuds proliferati1.O4.53.O2.34.55.O2.O1.7O.71.05.412.O2.63.06。35.4综上所述:黄花蝴蝶兰不定芽增殖培养基的最佳处理为氏134Qn,即KC+TIZ o.20nlg/I。+椰子水200mL/L+蔗糖14I,+柠檬酸30n培/I。,黄花蝴蝶兰不定芽在此配方上的增殖倍数达到12.o。2.3生根诱导培养将增殖芽接种到l/2MS+GA。o.1mg/L+NAA O.05mg/L+蔗糖20g/L的培养基上,30d左右可以长出具根、茎、叶的完整植株,而且植株健壮、长势好(图1一B。2-4试管苗移栽将

9、具有34片叶子的生根组培苗在温室下再培养1周,打开瓶盖炼苗34d,从瓶中取出试管苗,洗去根部的培养基,用水苔包住小苗基部栽植在穴盘中,白天温度控制在25,夜间18左右,相对湿度开始100%,然后慢慢降低。1个月后统计移栽成活率达到91.5%。组培苗移栽46周之后可适当施一些液体肥料,每周1次。图1蝴蝶兰不定芽的诱导及生根Fig.1The induCtion of adventitious shoot and rootA.诱导不定芽Adventitious sh00t induction;B.诱导生根R00t induction3结论与讨论蝴蝶兰不定芽增殖时,潘学峰等13在MS+BA12.5mg

10、/I。+NAA O.05mg/L上增殖倍数为3;林宗铿等嘲在花宝1号3g/L+6一BA】o mg/L+o o o oo,o o mu地n ¨髓憨硒如b b致R858华中农业大学学报第26卷NAA o.2mg/L+腺嘌岭10mg/L+肌醇100活性或增强了醌类化合物还原剂有关。本试验中发mg/L+椰子水100mL/L上增殖倍数为7.24。本现培养基pH为4.55.O时,培养物排出的褐变物试验在KC+TDZ o.20mg/L+椰子水200质较多,pH为5.45.5时排出的褐变物质较少。mL/L+蔗糖14g/L+柠檬酸30mg/L上取得了较垒。.。好的增殖效果,增殖倍数达到12.o。7一”

11、TDZ是一种高活性的细胞分裂素,其活性一般1潘学峰,王安石,李海珠.蝴蝶兰组培快繁技术的研究进展叫是6一BA的数十至数百倍,对蝴蝶兰不定芽的增殖热带林业.2005,33(1:4547起到很好的堡用。TDz可以引起细胞坌裂素的积23淼茹姜篡嚣言竺竺篓亍快速繁殖的影响累或合成,并可抑制内源生长素的降解4l a TDZ对3胡海英,王建宇.蝴蝶兰的离体培养与快繁技术研究J1宁夏各种外植体芽的再生诱导效果较6一BA好,但浓度大学学报:自然科学版,2002,23(4:367369.大时易玻璃化和畸形9|。4李成慧,蔡斌,单丽丽,等.应用正交设计法探讨蝴蝶兰叶片类椰子水、马铃薯、苹果等有机添加物是蝴蝶兰组原

12、球茎的诱导J扬州大学学报浓业与生命科学版,2004,25璺母妻.中堂用.!勺寰墼霉理乡.,亭们寞有置差警、篓粤5茹姜善,蠢运海,王大平.蝴蝶兰离体快繁优化体系研究J.西质、维生素和碳水化合物等成分,这些成分对细胞的r南农五大学学报:自募科学蓉,2淼,27(3;:41:;菇增殖和培养物的生长有明显的促进作用。试验表6林宗铿,黄德贵.蝴蝶兰花梗的组织培养及筷速繁殖n福建明,在上面几种不同种类和浓度的添加物中,椰子水热作科技2001,26(1:69.200mL/L对蝴蝶兰原球茎增殖效果最好。7张启香'方炎明,张晓平.蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖J植昙篓i竺竺专璺多薹翌拿吉苎型竺塑萼翌嘲篓茎雾需

13、鬟篓裟施一胍题还没有完全解决,但可以采取适当的措施加以控籍荡至主茹,1菇:2:(聂;1j12li“一一。制。前期预备试验表明在培养基中加入柠檬酸可明9徐晓峰,黄学彬TDz_一一种有效的植物生长调节剂J.植显减轻褐化,这可能与柠檬酸抑制了多酚氧化酶的物学通报,2003,2(2:227237.Optimization of Tissue Culture Condition on ProliferationAdVentitious Bllds of P庇口Z口PnopsZs B1.spp.WANG Dong-yunlWANG Jian-ya2CAI Hen92J IANG Xiang-e2(1CoZ

14、Zeg已o,Hor芒ic“Z芒“rP n”d j%,5,SfiP咒ces,H“口zo以g AgricMZ“,aZ L7hiuPrsiy,VI,hn竹430070,(流西2n;P,-0口i行f已,眠n咒430079,C撬i门口2FbrPs了、愆P B门PPdz咒g C已挖芒Pr D厂H甜6PiAbstract The peduncIe axiIIary bud of PaZ已咒opsis B1.spp.with yellow was induced adventitiousshoot as explants.The orthogonal design was used to study the

15、effects of inorganic nutrition,TDZ(NphenyINLl,2,3一thiadiazol一5ylurea,organic additive substances and sucrose contained in the culture medium on the adventitious shoots propagation of P九口Z口P咒opsis spp.The results indicate that the optimal medium for shoot propagation of P是口肠P姐。户5is B1.spp.is KC basal medium supplemented with0.20 mg/LTDZ,200mL/L coconut water,