高效液相色谱法测定复方黄酮胶囊中熊果酸的含量

1、    高效液相色谱法测定复方黄酮胶囊中熊果酸的含量【摘要】 目的建立复方黄酮胶囊中熊果酸的含量测定 方法 。方法高效液相色谱法，C18柱，以甲醇水磷酸（90100.03）为流动相，流速为0.5 ml/min，检测波长为220 nm。结果熊果酸在0.9829.82 g /ml范围内与峰面积线性关系良好，相关系数为0.999 8，平均回收率为98.32%，RSD为0.56%（n=6）。结论该方法简便，准确，重现性好，适用于复方黄酮胶囊的质量控制。 【关键词】 复方黄酮胶囊 熊果酸 高效液相色谱法 含量测定Determination of Ursolic A

2、cid in Compound Flavone Capsule by HPLCAbstract：ObjectiveTo establish the method for determining the content of ursolic acid in Compound Flavone Capsules .Methods The  C18 column with methanol- water- phosphorous acid (90100.03) as the mobile phase was used. The flow rate was 0.5 ml/min an

3、d the detective wavelength was 220 nm . ResultsThe linear range of calibration curve was 0.9829.82 g/ml (r = 0.999 8). The average recovery was 98.32% and the RSD was 0.56% (n= 6).ConclusionThe method is simple and accurate with a good reproducibility. It can be used for the quality control of Compo

4、und Flavone Capsules.Key words：Compound Flavone Capsules; Ursolic acid ； HPLC； Determination复方黄酮胶囊为银杏叶提取物和山楂叶提取物的复方制剂，可用于 治疗 心脑血管疾病，效果良好。此黄酮类制剂多以总黄酮作为质量控制指标，已报道的测定方法主要有络合比色法，此法易受杂质干扰，定量误差较大。熊果酸为山楂叶提取物的主要成分，本实验采用高效液相色谱法测定复方黄酮胶囊中熊果酸的含量，以进一步完善该制剂的质量标准。结果表明此方法操作简单、准确、重现性好。1 仪器与试药 Waters600E型高效液相色谱仪，Wate

5、rs996型PDA二极管阵列检测器，WatersM32色谱工作站(美国)。METTLER AE-240型 电子 天平（瑞士）；熊果酸对照品由 中国 药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其余为 分析 纯。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：NovaPak C18柱（4.0 mm×250 mm，4 m）；流动相：甲醇水磷酸（90100.03）；检测波长220 nm；柱温35；流速为0.5 ml/min。在此条件下熊果酸峰与杂质峰能得到较好分离。见图12。检测波长的选择：在三维图谱上查看熊果酸对照品的紫外吸收，并综合考虑检测波长的稳定性，选择其测定波长为220 nm。2.2

6、 溶液的制备2.2.1 对照品溶液制备精密称取熊果酸对照品约1 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。2.2.2 供试品溶液制备取样品胶囊20粒，倾出 内容 物，研细，精密称取平均粒重约0.25 g，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理(150 W，50 kHz)30 min，取出，放冷。用甲醇补足减失的重量，摇匀。离心(1 200 r/min)10 min，取上清液作为供试品溶液。2.3 线性关系考察精密吸取熊果酸对照品储备液（0.982 mg/ml）1，2，4，6，8，10 ml分别置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密吸取上述溶液各10 l，注入液

7、相色谱仪，测定峰面积Y。以进样量（g）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并以最小二乘法 计算 ，得回归方程Y3 665 512X122 141，r0.999 8。结果表明熊果酸在0.9829.82 g/ml范围内与峰面积有良好的线性关系。2.4 精密度实验取供试品溶液，按以上色谱条件重复进样6次，测定峰面积，结果RSD为 0.36%(n6)。2.5 稳定性实验取供试品溶液，按以上色谱条件每隔一定时间进样 1 次，测定峰面积，结果RSD为0.68%，显示供试品溶液至少在 48 h内稳定。2.6 重现性实验精密称取同一批号（20060109）样品6 份，按2.2.2项下 方法 操作，测定峰面

8、积并 计算 熊果酸含量，结果熊果酸的平均含量为2.35 mg/粒，RSD=2.1%(n6)。2.7 空白实验取不含主药的各种辅料，按制备工艺制得不含主药的空白试样。取相当于平均粒重的空白试样，按2.2.2项所述方法操作，对空白样品进行测定，结果表明，在对照品相应位置无干扰。2.8 回收率实验精密称取已知含量样品（20060109）6 份，精密加入熊果酸对照品适量，按“2.2.2”项下方法操作 ，测得峰面积并计算含量。结果显示，平均回收率为98.32%，RSD=0.56%（n6)。2.9 样品测定取本品3批，按“2.2.2”项下方法操作，并按上述色谱条件，吸取对照品溶液与供试品溶液各10 l，注

9、入液相色谱仪，测定含量，结果每粒胶囊含熊果酸分别为2. 35，2.32，2.38 mg。3 讨论复方黄酮胶囊为银杏叶提取物和山楂叶提取物的复方制剂，熊果酸为山楂提取物的主要成分。熊果酸的含量测定采用HPLC法24，专属性强，因此，文中建立了HPLC法测定复方黄酮胶囊中熊果酸含量的方法，以进一步完善该制剂的质量标准。在三维图谱上查看熊果酸对照品的光谱扫描图，208 nm处有最大吸收，但考虑到波长(208 nm)接近末端吸收，而且溶剂甲醇截止吸收波长为205 nm，从检测波长的稳定性方面考虑，为了减小溶剂的短波吸收干扰，选择220 nm为检测波长。在此检测波长下对照品和样品都能得到较好的光谱图。分

10、离条件的选择曾先后试验甲醇水(855)、甲醇水冰醋酸(85150. 04)等流动相系统，结果分离效果不好。水的比例调高时熊果酸色谱峰已严重变形成为馒头峰。采用本文中的流动相，熊果酸色谱峰峰形良好，并且柱效高，阴性对照无干扰，经用二极管阵列检测器 分析 ，得到熊果酸对照品及供试品中熊果酸的色谱图及光谱图，其光谱吸收相同，峰纯度良好。对3批样品测定：每粒胶囊的熊果酸含量均在2 mg以上，故本品的含量测定限度拟定为2 mg/粒以上。【 参考  文献 】1张 妍，李厚伟，张永春，等.山楂中总黄酮几种提取分离方法的考察及含量测定J.哈尔滨医科大学学报，2001，35（3）：183.2姬生国，王 东，付 蕾，等. 健胃口服液中熊果酸