海南省汉、黎族人群缺失型α-地中海贫血的研究

1、海南省汉、黎族人群缺失型-地中海贫血的研究    关键词：地中海贫血;聚合酶链反应（PCR）;少数民族;海南省  摘要:目的 研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失（- SEA ）、右侧缺失（- 3.7 ）和左侧缺失（- 4.2 ）三种-地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。 方法 应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失（- SEA ）、右侧缺失（- 3.7 ）和左侧

2、缺失（- 4.2 ）三种-地中海贫血缺失突变。 结果 在197例海南汉族人中检出25例-地中海贫血携带者，携带率为12.69%;三种-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.0635，其中- SEA 、- 3.7 和- 4.2 的基因频率分别为0.0127、0.0305、0.0203，共发现- SEA /、- 3.7 /和- 4.2 /三种基因型，其中- SEA /5例，- 3.7 /12例，-

3、0;4.2 /8例。在201例海南黎族人中检出114例-地中海贫血携带者，携带率为56.72%，三种-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.3607，其中- SEA 、- 3.7 和- 4.2 的基因频率分别为0.3607、0.0075、0.1891，共发现- SEA /、- 3.7 /、- 3.7 /- 3.7 、- 3.7 /- 4.2 、- 4.2 /、和- 4.2 

4、;/- 4.2 六种基因型，其中- SEA /3例，- 3.7 /39例，- 3.7 /- 3.7 6例，- 3.7 /- 4.2 18例，- 4.2 /38例，- 4.2 /- 4.2 10例。 结论 海南省汉、黎族人群是-地中海贫血的高发群体。      关键词:地中海贫血;聚合酶链反应（PCR）;少数民族;海南省  

5、60;   Investigation into the deletion types of-thalassemia in Han and LI Nationalities in Hainan Province. Abstract:Objective To investigate the incidences、the allelic frequencies and t

6、he genotypes frequencies of three-tha-lassemia deletion types（- SEA 、- 3.7 、- 4.2 ）and their distributions in Han and Li nationalities in Hainan Province. Methods Three-thalassemia

7、 deletion types，i.e Southeast Asia deletion（- SEA ），right deletion（- 3.7 ）and left deletion（- 4.2 ），were screened based on polymerase chain reaction（PCR）in Han and Li nationalities

8、 in Hainan. Results 25carriers were detected in197Han individuals，and the incidence of carriers was12.69%.The gene frequency of these three deletion types was0.0127，0.0305and0.0203respectively，to

9、tally0.0635in Han nationality in Hainan.Three genotypes of5（- SEA /）cases，12（- 3.7 /）cases and8（- 4.2 /）cases were detected.On the contrary，114carriers were detected from201individuals in Li

10、 nationality，and the incidence of carriers was56.72%.The gene frequency of these three deletion types was0.0075，01716and0.1891respec-tively，totally0.3607in Li nationality.Six genotypes were detected i

11、ncluding3（- SEA /）cases，39（- 3.7 /）cases，6（- 3.7 /- 3.7 ）cases，18（- 3.7 /- 4.2 ）cases，38（- 4.2 /）cases and10（- 4.2 /- 4.2 ）cases. Conclusion There is a high incidence of-

12、thalassemia in Han and Li nationalities in Hainan province.      Key words:Thalassemia;Polymerase chain reaction（PCR）;Minority nationality;Hainan Province         -地中海贫血（-地贫）是一种严重危

13、害人类健康的遗传病，其主要特征是-珠蛋白链合成减少（ + 地贫）或缺如（ 0 地贫）。-地贫分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失突变两大类 1 ，-珠蛋白基因缺失是导致-地贫的主要原因。目前全世界已发现了35种-珠蛋白基因缺失突变，在中国人中已发现7种，其中东南亚型缺失突变（- SEA ）、右侧缺失型突变（- 3.7 ）和左侧缺失型突变（- 4.2 ）三种突变类型是我国南方最常见的缺失类型 24 。为了研究海南省汉、黎族人群中-地中海贫血的发病率及其基因型的

14、分布特点，我们应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查197例海南汉族人和201例海南黎族人中的东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失这三种最常见的缺失型-地贫突变类型，现将结果报告如下。      1 材料与方法       1.1 DNA样品 用EDTA抗凝，采取海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县正常体检、兵检和中小学生黎族人末梢血;采取海南省文昌市正常体检、兵检的海南籍汉族人群末梢血，按Lahiri等方法 5 提取DNA，阳性对照标本由南方医科大学医学遗

15、传学教研室徐湘民教授惠赠。      1.2 PCR扩增 东南亚型缺失突变分析按文献 6 进行;右侧缺失型突变和左侧缺失型突变分析参照Amold S.-C.Tan 7 等报道合成引物。扩增- SEA 、- 3.7 和- 4.2 的多重PCR体系均采用TaKaRa LA Taq  TMJ 及缓冲液（宝生物工程有限公司产品），PCR反应体积为25l，在PCR缓冲液（1×G

16、C Buffer，2.5mmol/L MgCl 2 ）中含模板DNA0.2g，引物0.20.5mol/L，dNTP为200mol/L，1U Taq DNA聚合酶，循环参数为99变性5min，85加酶，56退火1min，72延伸2min，然后951min，561min，722min，30个循环后72延伸7min。扩增产物在1%琼脂糖凝胶中电泳，经EB染色在紫外光灯下观察结果并照相。 2 结果      2.1 - SEA 、- 3.7 和

17、- 4.2 缺失型突变的多重PCR扩增 在PCR反应体系中同时扩增了2基因的一个1800bp的片段，用以判断样品DNA的2基因是否缺失，从而判断-地中海贫血突变患者是杂合子还是纯合子。无- SEA 、- 3.7 和- 4.2 缺失型突变的正常人DNA样品经PCR扩增后只出现一条1800bp的2基因扩增片段;东南亚缺失型杂合子（- SEA /）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因扩增片段外，还出现一条740bp的特异扩增片段;右侧缺失型杂合子（- 3.7&#

18、160;/）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因扩增片段外，还出现一条2022bp的特异扩增片段;右侧缺失型纯合子（- 3.7 /- 3.7 ）的DNA样品经PCR扩增后只出现一条2022bp的特异扩增片段;左侧缺失型杂合子（- 4.2 /）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因扩增片段外，还出现一条1628bp的特异扩增片段;左侧缺失型纯合子（- 4.2 /- 4.2 ）的DNA样品经PCR扩增后只出现一条1628bp的特异扩增片段;右侧缺失型并左侧缺失型双重杂合子（- 3.7 /- 4.2 ）的DNA样品经PCR扩增后同时出现2022bp和1628bp两条特异扩增片段。见图1。 图1 - SEA 、- 3.7 和- 4.2 缺失型突变的多重PCR检测结果（略） Fig1 The PCR-amplified result of- SEA 、- 3.7