慢病毒相关技术介绍ppt课件

1、2/14/2022 宝日医生物技术（北京）有宝日医生物技术（北京）有限公司限公司Clontech慢病毒相关技术介绍2/14/20222背景简介背景简介 病毒载体病毒载体基因传递基因传递 慢病毒载体慢病毒载体容易容易转染转染物理方法物理方法非病毒载体非病毒载体Clontech 慢病毒相关产品可以转染非分裂细胞胞实现持久有效表达 逆转录病毒载体逆转录病毒载体 腺病毒载体腺病毒载体 2/14/20223内容介绍内容介绍1 提高慢病毒滴度的策略提高慢病毒滴度的策略2提高转导效率的方法提高转导效率的方法3 Lenti-X慢病毒包装系统慢病毒包装系统 12/14/20224Lenti-X慢病毒包装系统慢病

2、毒包装系统2/14/20225背景简介背景简介l 病毒包装流程示意图病毒包装流程示意图2/14/20226第四代包装系统第四代包装系统Lenti-X HTXLenti-X HTX 将将Gag-Pro和和RT-IN分离，降低产生具有复制分离，降低产生具有复制 能力病毒的几率，大大提高生物安全性。能力病毒的几率，大大提高生物安全性。创新点创新点I2/14/20227第四代包装系统第四代包装系统Lenti-X HTXLenti-X HTX 引入引入Tet-Off诱导表达系统，诱导表达系统，大大提高病毒滴度！大大提高病毒滴度！ 创新点创新点II2/14/20228Lenti-X包装系统包装系统通过流式

3、细胞仪测定：通过流式细胞仪测定： Lenti-X包装系统获得的病毒滴度高包装系统获得的病毒滴度高 于于108 IFU/ml； 只需只需10 l 病毒上清即可转导大部病毒上清即可转导大部 分分HeLa细胞。细胞。Lenti-XLenti-X2/14/20229Clontech慢病毒系统的优点慢病毒系统的优点2/14/202210慢病毒载体的种类慢病毒载体的种类cDNA载体载体pLVX-PuroRNAi载体载体pLVX-shRNA1pLVX-shRNA2ProteoTuner载体载体pLVX-PTunerpLVX-Ptuner Green诱导表达载体诱导表达载体pLVX-Tet-On Advanc

4、edpLVX-Tet-Off AdvancedpLVX-Tight-Puro2/14/202211慢病毒载体的种类慢病毒载体的种类pLVX-EF1-IRES-PuropLVX-EF1-IRES-ZsGreen1/mCherrypLVX-EF1-AcGFP1-N1 & C1EF1启动子载体启动子载体荧光标签载体荧光标签载体pLVX-DsRed-Monomer-C1 & N1pLVX-AcGFP1-N1 & C1双表达载体双表达载体pLVX-DsRed-Monomer-C1 & N1pLVX-IRES-ZsGreen12/14/202212慢病毒相关系统慢病毒相关系

5、统1、慢病毒包装系统慢病毒包装系统l 高效，可获得的病毒滴度高达高效，可获得的病毒滴度高达5 X 108 IFU / mll 具有两种假型病毒：泛嗜性（具有两种假型病毒：泛嗜性（VSV-G）和单嗜性（）和单嗜性（ECO）Lenti-X HTX Packaging System (631247/49)Lenti-X HTX Ecotropic Packaging System (631251)2、慢病毒慢病毒cDNA表达系统表达系统l 高效基因传递系统，可用于几乎所有哺乳动物细胞高效基因传递系统，可用于几乎所有哺乳动物细胞Lenti-X Expression System (632164)Len

6、ti-X Bicistronic Expression System (Neo/Hyg/Puro, 632181/2/3)3、慢病毒慢病毒RNAi表达系统表达系统l 可以获得高效率的可以获得高效率的RNAi，可用于几乎所有哺乳动物细胞，可用于几乎所有哺乳动物细胞Lenti-X shRNA Expression System (632177)2/14/2022134、慢病毒诱导表达系统、慢病毒诱导表达系统l 可以在几乎所有哺乳动物细胞中精确地诱导基因表达可以在几乎所有哺乳动物细胞中精确地诱导基因表达Lenti-X Tet-On Advanced Inducible Expression Syst

7、em (632162)Lenti-X Tet-Off Advanced Inducible Expression System (632163)5、慢病毒报告系统慢病毒报告系统l 利用荧光或化学发光检测法研究启动子活性利用荧光或化学发光检测法研究启动子活性l 可用于多种类型细胞可用于多种类型细胞Lenti-X DD Cyan/Green/Red Reporter System (631748/51/53)Lenti-X Ready-To-Glow Secreted Luciferase Reporter System (631746)慢病毒相关系统慢病毒相关系统2/14/202214提高慢病毒

8、滴度的策略提高慢病毒滴度的策略2/14/202215影响慢病毒滴度的因素影响慢病毒滴度的因素转染效率转染效率l 转染试剂的类型转染试剂的类型l 转染的转染的DNA量量l 转染的转染的DNA质量质量p 细胞种类细胞种类p 细胞密度细胞密度p 细胞状态细胞状态包装细胞包装细胞 u 测定滴度时细胞测定滴度时细胞 的选择的选择u 测定方法的选择测定方法的选择测定滴度测定滴度2/14/202216Clontech提高慢病毒滴度的策略提高慢病毒滴度的策略策略策略p 使用的病毒载体中包含改善载体性能和使用的病毒载体中包含改善载体性能和 提高病毒滴度的提高病毒滴度的WPRE、RRE和和 cPPT/CTS序列序

9、列提供多种病毒载体提供多种病毒载体p 包装组分中含有经过比例优化的包装组分中含有经过比例优化的5种非病种非病 毒载体毒载体引入引入Tet-Off诱导表达系统诱导表达系统p 配以配以Tet 系统专用的胎牛血清（系统专用的胎牛血清（FBS）p 使用高品质的使用高品质的293T包装细胞系包装细胞系 Lenti-X 293T Cell Linep 使用创新型的转染试剂使用创新型的转染试剂Xfect 2/14/202217高品质包装细胞系高品质包装细胞系Lenti-X 293TTime of transfectionHarvest Time2/14/202218Lenti-X 293T VS 293FT

10、Clontech的的 293T包装细胞获得的病毒滴度是包装细胞获得的病毒滴度是293FT的的2.6倍倍 ！2/14/202219创新型转染试剂创新型转染试剂Xfect (631317/8)哺乳动物细胞用创新型转染试剂哺乳动物细胞用创新型转染试剂Xfectl应用的细胞类型广泛、转染效率高！应用的细胞类型广泛、转染效率高！l由可生物降解的、低细胞毒性的纳米颗粒制备而成。由可生物降解的、低细胞毒性的纳米颗粒制备而成。l操作流程简便、兼容血清。操作流程简便、兼容血清。2/14/202220创新型转染试剂创新型转染试剂Xfect (631317/8)高效高效的的Xfect低毒性低毒性的的Xfect实验验

11、证：实验验证：Xfect转染转染293T包装细胞的效率高达包装细胞的效率高达97%！2/14/202221提高转导效率的方法提高转导效率的方法2/14/202222慢病毒浓缩试剂盒慢病毒浓缩试剂盒Lenti-X Concentrator (Cat No.631231&631232) 操作简便，无需超速离心操作简便，无需超速离心 可以纯化大体积病毒样品可以纯化大体积病毒样品 病毒滴度提高病毒滴度提高100倍，回收率高达倍，回收率高达90%2/14/202223快速滴度测定快速滴度测定Lenti-X qRT-PCR Titration Kit (Cat No.631235) 基于基于HIV

12、-1的的qRT-PCR法的滴度测定试剂盒法的滴度测定试剂盒 1 1天内即可完成收获病毒、测定滴度和感染靶细胞天内即可完成收获病毒、测定滴度和感染靶细胞 可以获得精确的病毒滴度，为获得稳定的感染效果奠定基可以获得精确的病毒滴度，为获得稳定的感染效果奠定基础础2/14/202224快速滴度测定快速滴度测定LentiTM-X GoStixTM (Cat No.631243,631244&631241)阳性结果：病毒滴度阳性结果：病毒滴度5 x 105 IFU/ml 30秒内即可定性地判断病毒滴度秒内即可定性地判断病毒滴度 可以确定收获病毒的最佳时机可以确定收获病毒的最佳时机 操作简便操作简便2/14/202225快速高效转导相关产品快速高效转导相关产品Lenti-X Accelerator(Cat No.631256,63