三化汤对脑缺血-再灌注老龄大鼠胃肠组织Na K ATP酶

1、三化汤对脑缺血-再灌注老龄大鼠胃肠组织Na+K+ATP酶活性及Ca2+ATP酶活性的影响(一)    作者：樊凯芳，唐迎雪，曹淑霞【摘要】 目的观察三化汤对脑缺血-再灌注老龄大鼠胃肠组织Na+K+ATP酶活性、Ca2+ATP酶活性的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组（空白组）、模型组、三化汤组、西药对照组（尼莫地平）、中成药对照组（血栓心脉宁）。采用双侧颈总动脉结扎方法制备脑缺血模型，脑缺血1 h后，再灌注30 min。取出各组大鼠胃组织和小肠组织各520 mg制成匀浆，测定ATP酶（Na+K+ATP酶、Ca2+ATP酶）活性。结果与空白组比，模型组胃肠

2、组织Na+K+ATP酶活性、Ca2+ATP酶活性明显降低（P0.01）；与模型组比，用药各组胃肠组织Na+K+ATP酶活性、Ca2+-ATP酶活性均明显升高（P0.05）；其中三化汤组胃肠组织Na+K+ATP酶活性明显高于尼莫地平组（P0.05），Ca2+ATP酶活性明显高于血栓心脉宁组（P0.05）。结论三化汤能明显升高脑缺血再灌注老龄大鼠胃肠组织Na+K+ATP酶活性、Ca2+ATP酶活性，对脑缺血再灌注老龄大鼠胃肠损伤有一定保护作用。 【关键词】 三化汤 脑缺血-再灌注老龄大鼠 胃肠组织Na+ K+ ATP酶活性 Ca2+ ATP酶活性中风急性期除有不同程度的神志改变等脑损伤外，常并发多

3、个器官功能损伤，其中胃肠功能损伤发生率较高13，而胃肠功能的衰竭又可加重原有脑部病灶的损伤，并可使机体各器官受累，甚至导致死亡2。因此，积极防治中风急性期并发的胃肠损伤对于提高中风病的整体治疗水平具有实际意义。本实验以老龄大鼠为对象，选具有调气作用的三化汤，从ATP酶活性（Na+K+-ATP酶、Ca2+ATP酶）方面研究其对老龄大鼠脑缺血-再灌注胃肠组织损伤的影响，为中医药防治中风继发胃肠损伤的应用及其作用机制提供依据。1 材料与仪器1.1 动物55只2528周龄清洁级Wistar大鼠，体重400500g，雌雄各半。由上海斯来克实验动物有限责任公司提供，符合普通实验动物质量标准合格证号：SCX

4、K(沪)2003-0003。1.2 药物1.2.1 中药材大黄、枳实、厚朴、羌活均购于山东中医药大学门诊部。经山东中医药大学中药鉴定教研室鉴定，分别为蓼科多年生草本植物掌叶大黄Rheum palmatum L.的根茎，芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果，木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的干燥根皮，伞形科植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang的干燥根茎。1.2.2 制剂制备三化汤流浸膏：枳实、厚朴、羌活各120 g，加2.5倍体积的水，浸泡1 h，提取挥发油10 h

5、后，加入等份的大黄120 g煎煮20 min滤出。同法煎煮3遍，混合滤出液，浓缩至每毫升制剂相当于1g生药，加入挥发油，灭菌，4冰箱保存备用。1.2.3 中西对照药尼莫地平：山东新华制药股份有限公司生产，国药准字H10910080；血栓心脉宁：吉林省辉南长龙生化药业股份有限公司生产，国药准字Z22024485。中成药和西药购于济南宏济堂药店。1.3 仪器TN型托盘式扭力天平(上海第二天平仪器厂)；漩涡混匀器(江苏省宝应县水泗实验设备厂)；电子恒温水浴锅(黄骅市卸甲综合电器厂)；冰箱(ARCTIC)；低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂)；721分光光度计(山东高密分析仪器厂)。1.4 试剂0.

6、3戊巴比妥钠（上海化学试剂厂，分析纯，批号：051028）；冰乙酸（上海化学试剂采购供应站经销，优级纯）；甲醛（济南鲁康化学工业有限公司，分析纯，批号：059611182）；0.9生理盐水（济南永宁制药股份有限公司，批号：0021100）；ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶）测试盒，购于南京建成生物工程研究所。2 方法2.1 分组将实验动物随机分为：正常对照组（空白组），模型组，三化汤方组，尼莫地平组，血栓心脉宁组。2.2 给药方法常规饲养一周后开始给药，药物剂量根据人鼠体表面积折算等效比率计量表4，按成人(体重70 kg)临床用量的10倍换算，正常对照组、模型组以生理盐水4

7、 ml/kg灌胃；三化汤组每只大鼠以中药4 ml/kg灌胃；西药对照组以尼莫地平片剂6 mg/kg灌胃；中成药对照组以血栓心脉宁0.72 g/kg灌胃。以上各组均为1次/d，灌胃10 d。2.3 模型建立与取材2.3.1 建立模型参照改良的Pulsinelli法5，采用双侧颈总动脉结扎法，分离双侧颈总动脉，用无损伤性动脉夹夹闭1 h，造成前脑(颈总动脉的供血区)缺血模型；再灌30 min造成脑缺血-再灌注脑损伤模型。2.3.2 取材取每组大鼠胃组织和小肠组织各520 mg置匀浆器中，加无水乙醇与生理盐水按19比例制成10的匀浆，1 0001 500 r/min离心10 min，取上清0.2ml

8、加0.8ml生理盐水稀释成2的匀浆，测定ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶）活性。以上测定严格按试剂盒要求操作。2.4 实验统计方法实验数据采用统计软件SPSS13.0进行统计分析处理，以±s表示，采用方差分析。3 结果3.1 对脑缺血-再灌注老龄大鼠胃组织ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶）活性的影响结果见表1。表1 脑缺血-再灌注老龄大鼠胃组织ATP酶活性的变化（略）由表1可见，Na+-K+-ATP酶：与空白组比，模型组Na+-K+-ATP酶活性明显降低（P0.01）；与模型组比，用药各组Na+-K+-ATP酶活性均明显升高（P0.05，P0.

9、01），其中三化汤组、血栓心脉宁组Na+-K+-ATP酶活性明显高于尼莫地平组（P0.05）；三化汤组、血栓心脉宁组间无显著性差异（P0.05）。Ca2+-ATP酶：与空白组比，模型组Ca2+-ATP酶活性明显降低（P0.01）；与模型组比，用药各组Ca2+-ATP酶活性均显著升高（P0.05，P0.01）；三化汤组、尼莫地平组Ca2+-ATP酶活性明显高于血栓心脉宁组（P0.05）；三化汤组、尼莫地平组间无显著性差异（P0.05）。3.1 对脑缺血-再灌注老龄大鼠肠组织ATP酶（Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP）酶活性的影响结果见表2。表2 脑缺血-再灌注老龄大鼠肠组织ATP酶活性的

10、变化（略）由表2可见，Na+-K+-ATP酶：与空白组比，模型组Na+-K+-ATP酶活性明显降低（P0.01）；与模型组比，用药各组Na+-K+-ATP酶活性均明显升高（P0.05，P0.01）；三化汤组Na+-K+-ATP酶活性明显高于血栓心脉宁组、尼莫地平组（P0.05）。Ca2+-ATP酶：与空白组比，模型组Ca2+-ATP酶活性明显降低（P0.01）；与模型组比，用药各组Ca2+-ATP酶活性均明显升高（P0.05，P0.01）；三化汤组、尼莫地平组Ca2+-ATP酶活性明显高于血栓心脉宁组（P0.05）；三化汤组、尼莫地平组间无显著性差异（P0.05）。4 讨论ATP酶是存在于组织

11、细胞及细胞器生物膜上的一种蛋白酶，其在物质运送、能量转换、信息传递以及维持细胞膜的完整、组织代谢等方面具有重要的意义，可作为代谢紊乱及损伤组织恢复能力的可靠指标。ATP酶是逆离子梯度进行细胞膜内外转运的离子泵，其中重要的为Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶。Na+-K+-ATP酶是位于细胞膜上的一种糖蛋白，是重要的生物酶。其在细胞膜上的意义是：由钠泵活动造成的细胞内高K+，是许多代谢反应进行的必要条件；如果细胞允许大量Na+进入膜内，由于渗透压的关系，必然会导致过多水分进入膜内，引起细胞的肿胀，进而破坏细胞的结构；能建立一种势能贮备，为细胞的主动转运提供条件。Ca2+-ATP酶也是一类

12、广泛存在于细胞膜上的重要膜结合酶，它可以水解ATP，使细胞内Ca2+泵到细胞外，以维持细胞内相对较低的Ca2+浓度，这是维持细胞稳态的重要机制之一，也是细胞功能得以正常发挥的基础，Ca2+-ATP酶活性的降低可引起细胞的离子跨膜转运障碍及胞浆内Ca2+的积聚，导致细胞的形态、结构和功能的异常。对胃肠组织作用而言，局部的Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶是胃肠细胞组织主动转运的关键，是组织抗损伤的重要屏障。脑缺血-再灌注后引起胃肠组织能量代谢紊乱和离子平衡失调，ATP短缺，膜离子泵功能障碍，K+、Na+、Ca2+分布异常，最终造成胃肠粘膜细胞肿胀、坏死等损伤。本实验研究结果表明，模型组比空白组胃肠组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均降低；用药各组比模型组胃肠组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均明显升高，其中三化汤组胃肠组织Na+-K+-ATP酶活性明显高于尼莫地平组，Ca2+-ATP酶活性明显高于血栓心脉宁组，说明三化汤在增强脑缺血-再灌注老龄大鼠胃肠组织Na+-K+-ATP酶活性方较尼莫地平明显、在增强Ca2+-ATP酶活性方面较血栓心脉宁明显，提示三化汤对中风急性期并发的胃肠损伤具有较好的保护作用。【参考文献】1陈德昌，景炳文神经源性急性应激性胃肠黏膜病变J中国实用内科杂志，1997，17(