免疫增殖病检测方法

1、免疫增殖病检测方法第一节 免疫增殖病的分类一、定义一、定义 免疫增殖病免疫增殖病（immunoproliferative disease）是）是指免疫器官、免疫组织或免疫细胞指免疫器官、免疫组织或免疫细胞（包括淋巴细胞和单核（包括淋巴细胞和单核巨噬细胞）巨噬细胞）异常增生（包括良性或恶性）所致异常增生（包括良性或恶性）所致的一组疾病。的一组疾病。 这类疾病的表现有免疫功能异这类疾病的表现有免疫功能异常及免疫球蛋白质和量的变化常及免疫球蛋白质和量的变化。二、免疫增殖病的分类二、免疫增殖病的分类增殖细胞增殖细胞疾疾 病病T细胞细胞ALL、淋巴母细胞瘤、部分、淋巴母细胞瘤、部分非霍奇金淋巴瘤等。非霍

2、奇金淋巴瘤等。B细胞细胞CLL、MM、传单、原发性、传单、原发性巨球蛋白血症、淋巴瘤等巨球蛋白血症、淋巴瘤等组织组织-单核单核细胞细胞急单、急性组织细胞增多症急单、急性组织细胞增多症等等其其它它毛细胞白血病、其他霍奇金毛细胞白血病、其他霍奇金病等病等第二节第二节 免疫增殖病的免疫免疫增殖病的免疫损伤机制损伤机制 一、浆细胞异常增生一、浆细胞异常增生 浆细胞异常增生是指单浆细胞异常增生是指单克隆浆细胞异常增生并伴克隆浆细胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或其有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚单位合成异常。多肽链亚单位合成异常。 对多发性骨髓瘤细胞的起对多发性骨髓瘤细胞的起源观察表明，骨髓瘤细胞起源源观

3、察表明，骨髓瘤细胞起源于骨髓中的前于骨髓中的前B细胞进入淋巴细胞进入淋巴细胞阶段，当受到抗原刺激后，细胞阶段，当受到抗原刺激后，其增殖产生记忆的其增殖产生记忆的B细胞，细胞，B细胞在淋巴结中完成免疫球蛋细胞在淋巴结中完成免疫球蛋白类别转换，可变成为浆细胞白类别转换，可变成为浆细胞的瘤细胞并移至骨髓定居并增的瘤细胞并移至骨髓定居并增殖。殖。在通常情况下在通常情况下IL-6是支持浆是支持浆细胞增殖分化的关键因子，细胞增殖分化的关键因子，所以浆细胞的瘤细胞的持续所以浆细胞的瘤细胞的持续增殖当有增殖当有IL-6的持续高水平的持续高水平存在。而临床检测表明骨髓存在。而临床检测表明骨髓瘤患者血清瘤患者血清

4、IL-6确有异常升确有异常升高。因此，高水平的高。因此，高水平的IL-6是是浆细胞瘤的原因之一。浆细胞瘤的原因之一。二、正常体液免疫抑制二、正常体液免疫抑制正常的体液免疫是正常的体液免疫是B细胞的增殖分化产生细胞的增殖分化产生效应的过程，一系列细胞因子将有序地启效应的过程，一系列细胞因子将有序地启动上述过程，动上述过程，IL-4可启动休止期的可启动休止期的B细胞细胞进入进入DNA合成期；合成期；IL-5促进促进B细胞继续增细胞继续增殖；殖；IL-6促使促使B细胞分化细胞分化 为浆细胞，正常为浆细胞，正常条件下条件下IL-6可以反馈抑制可以反馈抑制IL-4控制控制B细胞的细胞的增殖分化过程，上述

5、过程构成了一个生物增殖分化过程，上述过程构成了一个生物信息调节回路，恰到好处地控制体液免疫信息调节回路，恰到好处地控制体液免疫应答过程的有序进行。应答过程的有序进行。 浆细胞瘤患者体内浆细胞瘤患者体内IL-6水平异常增高，水平异常增高，其直接的效应是抑制其直接的效应是抑制IL-4的产生，从的产生，从而抑制了整个体液免疫反应的过程。而抑制了整个体液免疫反应的过程。另外，浆细胞瘤可以分泌大量无抗体另外，浆细胞瘤可以分泌大量无抗体活性的免疫球蛋白，其活性的免疫球蛋白，其Fc段与正常段与正常B细细胞和原浆细胞以及其它有胞和原浆细胞以及其它有Fc 受体的细受体的细胞结合，这些细胞表面将被无活性的胞结合，

6、这些细胞表面将被无活性的免疫球蛋白封闭，影响对其他生物信免疫球蛋白封闭，影响对其他生物信息的接收，并可阻断息的接收，并可阻断B细胞的增殖、发细胞的增殖、发育和影响抗原提呈。育和影响抗原提呈。三、异常免疫球蛋白增生所造成三、异常免疫球蛋白增生所造成的病理损伤的病理损伤 浆细胞异常增生的后果是产生大量的单克浆细胞异常增生的后果是产生大量的单克隆型免疫球蛋白或其片段，这类免疫球蛋白或隆型免疫球蛋白或其片段，这类免疫球蛋白或片段无正常的免疫功能。多为一种类型或为重片段无正常的免疫功能。多为一种类型或为重链或轻链，其含量远远高于正常的免疫球蛋白。链或轻链，其含量远远高于正常的免疫球蛋白。这些恶性增殖的免

7、疫球蛋白可以沉积于组织，这些恶性增殖的免疫球蛋白可以沉积于组织，造成组织变性和淋巴细胞浸润，导致相应器官造成组织变性和淋巴细胞浸润，导致相应器官的功能障碍，因其血浆浓度过高而导致血液粘的功能障碍，因其血浆浓度过高而导致血液粘稠度增加，产生一系列直接或间接的病理损害。稠度增加，产生一系列直接或间接的病理损害。第三节第三节 常见免疫球蛋白增常见免疫球蛋白增殖病殖病 单克隆免疫球蛋白增殖单克隆免疫球蛋白增殖病是指患者体内存在异常增病是指患者体内存在异常增多的单克隆免疫球蛋白的一多的单克隆免疫球蛋白的一类疾病。类疾病。免疫球蛋白电泳位置在丙种球蛋免疫球蛋白电泳位置在丙种球蛋白区域，故又称丙种球蛋白增殖

8、白区域，故又称丙种球蛋白增殖病，由于单克隆细胞增生，所以病，由于单克隆细胞增生，所以其产生的免疫球蛋白理化性质高其产生的免疫球蛋白理化性质高度均一，但无抗体及其它免疫活度均一，但无抗体及其它免疫活性，所以这类免疫球蛋白亦叫副性，所以这类免疫球蛋白亦叫副蛋白或蛋白或M蛋白。蛋白。M蛋白可通过肾蛋白可通过肾小球从尿中排出，即本小球从尿中排出，即本-周蛋白。周蛋白。一、多发性骨髓瘤一、多发性骨髓瘤(一一)定义多发性骨髓瘤定义多发性骨髓瘤（multiple myeloma MM)是浆细胞增生的恶性肿瘤，是浆细胞增生的恶性肿瘤，其免疫学特征其免疫学特征:血清中和尿中血清中和尿中出现出现M蛋白、血清中正常

9、蛋白、血清中正常Ig水平明显降低、骨髓中不成水平明显降低、骨髓中不成熟的浆细胞比例显著升高。熟的浆细胞比例显著升高。(二二)、临床表现和病理变化、临床表现和病理变化1、早期：无特殊症状，仅表现为早期：无特殊症状，仅表现为ESR增快，血中检出增快，血中检出M蛋白、蛋蛋白、蛋白尿、浆细胞增多。白尿、浆细胞增多。2、典型病人症状及病理变化：、典型病人症状及病理变化：(1)骨髓瘤细胞增生，浸润和破坏骨骨髓瘤细胞增生，浸润和破坏骨组织，造成骨质疏松和溶骨性病组织，造成骨质疏松和溶骨性病变，导致骨痛和不同部位的骨折；变，导致骨痛和不同部位的骨折；(2)、恶性增殖的骨髓瘤细胞代替了骨、恶性增殖的骨髓瘤细胞代

10、替了骨髓中的正常成分，引起贫血、粒细胞、髓中的正常成分，引起贫血、粒细胞、血小板减少，由于血小板减少，由于M蛋白增高，引起蛋白增高，引起血粘增加，或沉积于肾小管中，造成血粘增加，或沉积于肾小管中，造成肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾病综合征，严重时可导致肾衰。血粘病综合征，严重时可导致肾衰。血粘增高可引起神经功能障碍。增高可引起神经功能障碍。(3)、骨髓瘤细胞浸润其它组织时，可、骨髓瘤细胞浸润其它组织时，可引起其相关组织或器官的病变。引起其相关组织或器官的病变。(三)、分类根据M蛋白的类别不同可分为：IgG型：约占5060%IgA型：约占2025%IgD型约：占

11、12%IgE型约：罕见根据浆细胞合成功能不全分类可分为：轻链病和重链病二、原发性巨球蛋白血症二、原发性巨球蛋白血症 是一种伴有血清是一种伴有血清IgM增加的增加的B细胞增殖病。病因不明。临细胞增殖病。病因不明。临床症状：主要表现为床症状：主要表现为IgM过多过多所致的血液高粘性综合征，另所致的血液高粘性综合征，另外贫血、肝脾、淋巴结肿大、外贫血、肝脾、淋巴结肿大、反复感染也常见。反复感染也常见。三、重链病三、重链病 由于浆细胞发生突变并异常由于浆细胞发生突变并异常增殖，合成功能障碍，只产生免增殖，合成功能障碍，只产生免疫球蛋白的重链或有缺陷的重链，疫球蛋白的重链或有缺陷的重链，不能与轻链组成完

12、整的免疫球不能与轻链组成完整的免疫球 蛋白分子，致使血清中和尿中出蛋白分子，致使血清中和尿中出现大量游离的无免疫功能的重链，现大量游离的无免疫功能的重链，称为重链病。称为重链病。四、良性单克隆丙种球蛋白病四、良性单克隆丙种球蛋白病 是指血清中出现是指血清中出现M蛋白，蛋白，而不伴有浆细胞恶而不伴有浆细胞恶 性增殖的性增殖的疾病。本病一般无症状，往疾病。本病一般无症状，往往因其它疾病就诊时发现血往因其它疾病就诊时发现血中有中有M蛋白。如果尿中出现蛋白。如果尿中出现本本-周氏蛋白则是危险信号。周氏蛋白则是危险信号。第四节第四节 免疫检测方法免疫检测方法 免疫球蛋白异常增免疫球蛋白异常增生病的实验室

13、诊断主生病的实验室诊断主要依靠血液学和免疫要依靠血液学和免疫学手段，其中免疫学学手段，其中免疫学检测尤为重要。常用检测尤为重要。常用以下方法进行检测：以下方法进行检测：一、血清蛋白区带电泳一、血清蛋白区带电泳 蛋白质区带电泳是血清蛋蛋白质区带电泳是血清蛋白的经典分析方法，血清白的经典分析方法，血清(或尿或尿液液)标本中不同性质的蛋白质可标本中不同性质的蛋白质可明显分开形成不同的区带，通明显分开形成不同的区带，通过正常的电泳图谱进行比较分过正常的电泳图谱进行比较分析，可发现患析，可发现患 者电泳图谱有一者电泳图谱有一狭窄而浓缩的集中带，即狭窄而浓缩的集中带，即M区区带。如下图带。如下图二、免疫球

14、蛋白定量测定二、免疫球蛋白定量测定 常用单向扩散法和免疫常用单向扩散法和免疫浊度法。恶浊度法。恶 性单克隆丙种球性单克隆丙种球蛋白病呈现某一类丙种球蛋蛋白病呈现某一类丙种球蛋白的显著增高白的显著增高(30mg/ml)。良性单克隆丙种球蛋白病增良性单克隆丙种球蛋白病增高不显著，一般在高不显著，一般在20mg/ml以下。以下。三、免疫球蛋白的分类鉴定三、免疫球蛋白的分类鉴定(一一)、免疫电泳、免疫电泳 免疫电泳是将区带电泳和免疫扩免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。血散结合起来的一种免疫学分析法。血清标本先经区带电泳将各种蛋白成分清标本先经区带电泳将各种蛋白成分分开，继而用各

15、种特异性抗血清进行分开，继而用各种特异性抗血清进行免疫扩散，根据免疫扩散，根据M蛋白在免疫电泳中蛋白在免疫电泳中所形成的特殊沉淀弧，观察其电泳迁所形成的特殊沉淀弧，观察其电泳迁移位置与抗原特异性，可将移位置与抗原特异性，可将M 蛋白蛋白的免疫球蛋白类型和其轻链型加以鉴的免疫球蛋白类型和其轻链型加以鉴定。定。图26-31、如果待测标本与某型球蛋、如果待测标本与某型球蛋白重链及轻链抗血清产生相白重链及轻链抗血清产生相同迁移度的特殊沉淀弧，提同迁移度的特殊沉淀弧，提示存在单克隆丙种球蛋白示存在单克隆丙种球蛋白(M蛋白蛋白)，此现象多见于，此现象多见于IgG 、IgA、 IgM型多发性骨髓瘤或型多发性

16、骨髓瘤或原发性巨蛋白血症。原发性巨蛋白血症。2、在同一抗轻链血清的反、在同一抗轻链血清的反应中，同时出现两条相邻应中，同时出现两条相邻的特殊沉淀弧，则可能是的特殊沉淀弧，则可能是除除M蛋白外还存在游离轻，蛋白外还存在游离轻，偶尔也可见两种偶尔也可见两种M蛋白，蛋白，此时应进一歩测定尿中的此时应进一歩测定尿中的本本-周蛋白。周蛋白。3、 患者血清仅与其中一患者血清仅与其中一种抗轻链抗血清产生一种种抗轻链抗血清产生一种特殊的沉淀弧，而其它五特殊的沉淀弧，而其它五种抗血清均不产生沉淀弧，种抗血清均不产生沉淀弧，这种情况可能是：这种情况可能是：(1)伴有肾功能不全的轻链病，伴有肾功能不全的轻链病，游离

17、轻链较少从尿中排出而滞游离轻链较少从尿中排出而滞留于血液中；留于血液中；(2)存在轻链的四分子多聚体，存在轻链的四分子多聚体，分子量大，不易从尿中排出而分子量大，不易从尿中排出而存于血液中；存于血液中；(3)尚未发现的新重链的免疫球尚未发现的新重链的免疫球蛋白。蛋白。4、若患者血清只与、若患者血清只与IgG 、IgA或或 IgM中的一种抗重血中的一种抗重血清产生特殊沉淀弧，但在两清产生特殊沉淀弧，但在两抗轻链抗血清中无沉淀弧，抗轻链抗血清中无沉淀弧，提示可能存在重链病。提示可能存在重链病。5、非分泌型骨髓瘤血清标、非分泌型骨髓瘤血清标本在免疫电泳中均不出现特本在免疫电泳中均不出现特殊沉淀弧。殊

18、沉淀弧。(二二)免疫选择电泳免疫选择电泳将含抗将含抗k或或r 血清的琼脂制成薄层血清的琼脂制成薄层琼脂板，打孔后加入待测血清进琼脂板，打孔后加入待测血清进行火箭电泳，与标本相应的免疫行火箭电泳，与标本相应的免疫球蛋白形成火箭样沉淀峰。然后球蛋白形成火箭样沉淀峰。然后于孔的两侧各挖一槽，加入某型于孔的两侧各挖一槽，加入某型免疫球蛋白的抗血清或另一型轻免疫球蛋白的抗血清或另一型轻抗血，温育扩散后，按沉淀弧形抗血，温育扩散后，按沉淀弧形成的情况，进行鉴定成的情况，进行鉴定 。(三三)免疫固定电泳免疫固定电泳将待测血清或其它标本在琼脂平板上将待测血清或其它标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗k或或r轻链或各类重链的抗血清滤纸，轻链或各类重链的抗血清滤纸，当抗体与某区带中的单克隆免疫球蛋当抗体与某区带中的单克隆免疫