血小板激活因子对急性重型胰腺炎肺损伤作用的实验研究

1、    血小板激活因子对急性重型胰腺炎 肺损伤作用的实验研究        【摘要】目的探讨血小板激活因子（Platelet Activating Factor，PAF)在急性胰腺炎肺损伤发生发展中的作用。方法17只纯种Beagle狗分成三组：(1)胰腺炎组(P组)，用牛磺胆酸钠加胰蛋白酶主胰管逆行注射，复制急性胰腺炎模型；(2)治疗组(T组)，模型复制后5分钟，3小时分别静脉注射苦杏内酯B(BN52021)；(3)对照组(C组)。分别测定平均肺动脉压值，肺湿重系数

2、，支气管肺泡灌洗液(Bronchial Alveolar Lavage Fluid, BALF)内细胞总数和蛋白含量，肺血管外水量/无血干肺重(Extra Vascular Lung Water / Blood Free Dry Lung, EVLW/BFDL)，肺组织内PAF含量。结果平均肺动脉压值P组明显升高， 在4小时与C组、T组差异均有显著意义(P<0.05)。P组肺系数(1.12±0.06），<".imagesessays212110923228611 (80 bytes)" src="/med/cano/201003/201003

3、11192322168" 12 22>±s，以下同)，EVLW/BFDL(5.59±0.53)及BALF中细胞总数(2.03±0.02）×109/L和蛋白含量(44.7±6.6）mg%均显著高于C组分别为（0.94±0.04，3.85±0.20，0.90±0.09）×109/L和（23.7±1.2）mg%及T组分别为（0.93±0.02，4.15±0.18，1.48±0.28）×109/L和（25.0±2.2）mg%。肺组织内PA

4、F含量：P组(3.76±0.39）ng/g较C组(0.78±0.10）ng/g和T组(1.41±0.12）ng/g有非常显著的增加(P<0.01)。结论PAF拮抗剂BN52021对胰腺炎所致的急性肺损伤有明显缓解作用。【关键词】血小板活化因子胰腺炎多器官功能衰竭动物实验替代试验 The effect of platelet activating factor on lung injury in experimental acute pancreatitis of the dogsJI ZhenhuaWANG BenmaoLI Shaohuaet al.Dep

5、artment of Hepatopancreatobiliary Surgery,Navy General Naval Hospital,Beijing 100037【Abstract】 Objective To study the effect of platelet activating factor (PAF) on the onset and progressing of lung injury in canine experimental acute pancreatitis. Methods17 Beagle's dogs were divided randomly in

6、to 3 groups:(1) Pancreatitis group (PG,n=6).The acute pancreatitis model was established by injecting 2% sodium taurocholate and 1 250 IU/ml trypsin (1 ml/kg) into the main pancreatic duct. (2) Pan+BN52021 group (TG,n=6). Dogs in TG received injection of PAF receptor antagonist BN52021 (5 ml/kg) int

7、ravenously 5 minutes and 3 hours after induction of acute pancreatitis. (3) Control group (CG,n=5).Mean pulmonary arterial pressure (MPAP) was monitored by RM6000 physical recorder. Pulmonary vascular permeability was studied by analyzing lung index (LI), protein content and cell count in bronchial

8、alveolar lavage (BAL), and the ratio of extravascular lung water and blood free dry lung (EVLW/BFDL). PAF content in lung were also determined. ResultsMPAP in PG group gradually elevated and was significantly different with CG and TG (P<0.05). LI(1.12±0.06,<".imagesessays212110923228

9、611 (80 bytes)" src="/med/cano/201003/20100311192322168" 12 22>±s), EVLW/BFDL (5.59±0.53), protein content (44.7±6.6 mg%) and cell count (2.03±0.20×109/L) in BALF of PG were significantly higher than that of CG (0.94±0.04,3.85±0.20,23.7±1.2mg

10、%,and 0.90±0.09×109/L,respectively), and TG (0.93±0.02,4.15±0.18,25.0±2.2mg%,and 1.48±0.28×109/L, respectively). PAF content in lung of PG (3.76±0.39 ng/g) was significantly higher than that of CG (0.78±0.10 ng/g) and TG (1.41±0.12 ng/g). Conclusions

11、PAF receptor antagonist BN52021 could effectively alleviate the pulmonary injury induced by acute severe pancreatitis.【Key words】Platelet activating factorPancreatitisMultiple organ failureAnimal testing alternatives急性重型胰腺炎早期致死的主要原因是多器官功能衰竭，有95%的早期死亡病例存在肺水肿和肺淤血的表现，防治肺损伤成为降低急性重型胰腺炎早期死亡的重要措施。实验证明PAF在急

12、性重型胰腺炎的发病过程中起重要作用1，且与多种疾病所致的肺损伤密切相关。因此我们推测PAF在急性重型胰腺炎肺损伤的发生发展中起着重要作用。材料与方法一、材料本组材料为：(1)结晶牛磺胆酸钠(包头生物制品研究所)；(2)结晶牛胰蛋白酶(Sigma公司)；(3)苦杏内酯B（BN52021，法国Henri Beaufour研究所Braquet教授惠赠)；(4)PAF标准品(美国Sigma公司)；(5)RM 6000多导生理记录仪(日本光电公司)。二、方法1.动物分组及处理：17只比格(Beagle)狗，(8±2) kg，(11.5±1.8)个月，不分雌雄，随机分为三组：对照组(简

13、称CG，5只)；胰腺炎组(简称PG，6只)；治疗组(简称TG，6只)。禁食、水12小时。3%戊巴比妥钠(30mg/kg体重)静脉麻醉。以每小时5ml/kg的速度静脉点滴注射乳酸林格氏液。左股动脉插入2mm内径的动脉导管至左心室，连接RM6000多导生理记录仪。开腹，在十二指肠降部系膜对侧纵行切开肠壁约2cm，将内径为1.5mm的硅胶管置入主胰管约5mm。PG及TG动物以1ml/kg体重的量注入37水浴后的2%牛磺胆酸钠与牛胰蛋白酶(1250U/ml)混合液；CG动物则以相同速度注入等量的生理盐水。TG动物在模型复制后5分钟,3小时分别静脉注射PAF拮抗剂BN52021(5mg/kg)，其它两组

14、以等量生理盐水代替。在胰腺炎发生8小时后以过量戊巴比妥钠静脉注射处死动物。2.指标测定及统计学处理：(1)从RM6000多道生理记录仪上读取平均肺动脉压值(PAP)；(2)肺湿重系数(肺湿重体重)×100%；(3)支气管肺泡灌洗液(BAL)的分析：处死动物后取右肺下叶，将一内径5mm的塑料管插入支气管结扎固定，吸净空气后，将30ml生理盐水经塑料管注入支气管，充满整个肺叶，轻揉肺叶后将支气管肺泡灌洗液抽回注射器内，反复进行三次，最后的BALF回收率为50%以上。然后取20lBALF，加0.18ml生理盐水做细胞计数，其余的BALF经纱布过滤后离心2000rpm，5分钟，取6ml上清液

15、，用Bradford氏方法测定BAL蛋白含量；(4)肺血管外水量无血干肺重(EVLW/BGDL)的测定(丁延楷法)2；(5)肺组织中PAF的测定：处死动物后，立即取左肺下叶组织约1g左右，加生理盐水4ml匀浆。之后按测定血清中PAF的方法测定1；(6)统计学处理：所有数据均用单因素方差分析法进行组间比较，结果用<".imagesessays212110923228611 (80 bytes)" src="/med/cano/201003/20100311192322168" 12 22>±s表示。结果一、平均肺动脉压(PAP)的变化

16、30分钟三组均略有降低，但差异无显著意义。1小时后PG明显升高，在2小时与TG差异有显著意义(P<0.05)，在4小时与CG、TG差异均有显著意义(P<0.05)，到6小时上升到最高值，为基础水平的(173.2±22.5)%(14.2±2.1)mmHg/(8.2±1.0)mmHg。二、肺湿重系数、EVLWBFDL、BALF细胞计数、BALF蛋白含量、肺组织内PAF含量变化均见表1。表1对照组、胰腺炎组和治疗组的肺湿重系数、EVLWBFDL、BALF细胞计数、BALF蛋白含量、肺组织内PAF含量对照表组别肺湿重系数(%)EVLW/BFDL(L/kg)BA

17、L细胞计数(×109/L)BAL蛋白含量(mg%)肺组织内PAF含量(ng/g)对照组(C)0.94±0.043.85±0.20*0.90±0.0923.7±1.2*0.78±0.10胰腺炎组(P)1.12±0.065.59±0.532.03±0.2044.7±6.63.76±0.39治疗组(T)0.93±0.02*4.15±0.18*1.48±0.2825.0±2.21.41±0.12注：与PG比较*P<0.05,P<0.

18、01 讨论急性胰腺炎在发病7天内死亡的病例有60%与急性呼吸衰竭有关2。这种呼吸衰竭在临床表现和病理上与败血症及烧伤等并发的呼吸衰竭难以区分。主要表现为肺湿重增加，肺泡毛细血管通透性增加，肺泡内皮细胞与肺间质损伤，中性粒细胞聚集等。本研究进一步证实在急性重型胰腺炎时肺泡膜通透性明显增加，表现在BAL中细胞及蛋白的渗出增加，肺血管外水量增加，肺湿重系数增加。同时平均肺动脉压呈渐进升高趋势。上述改变与临床上ARDS的病理特点相似。本研究中急性重型胰腺炎模型复制后5分钟,3小时分别静脉注射PAF拮抗剂BN52021，可以明显减轻急性重型胰腺炎引起的通透性肺水肿，阻止肺动脉压的升高。这表明PAF在急性

19、重型胰腺炎肺损伤中起重要作用。急性重型胰腺炎时肺组织内PAF含量的明显增加也提示急性重型胰腺炎肺损伤有PAF的参与。这与Zhou等3的结果是一致的。本实验还发现BAL中细胞数明显增加，以往的实验也证实急性重型胰腺炎肺组织内有大量炎性细胞的聚集，特别是活化的中性粒细胞，可以产生大量PAF4，5。本研究还揭示：PAF拮抗剂BN52021治疗后，不仅可以减少BAL中的细胞数量，而且还可以降低肺组织内PAF的含量，这就提示PAF参与急性重型胰腺炎肺损伤是一个恶性循环的过程。PAF并非急性重型胰腺炎肺损伤中唯一起作用的因素。既往的研究证实，许多炎性介质与细胞参与了急性重型胰腺炎肺损伤的过程，应用单一的介

20、质阻滞药物进行治疗并不能起到最满意的效果。但应用PAF拮抗剂不仅可以打断PAF释放所致的“PAF炎性细胞聚集PAF产生”的恶性循环链，而且还可以阻止PAF对肺组织的直接损伤作用。Votta等6证明肺细胞膜上有丰富的PAF受体，而且PAF可以直接导致肺毛细血管通透性的增加。在急性重型胰腺炎早期发生平均肺动脉压的升高，既往已有报道，但对其机理还没有满意的解释。本研究应用PAF拮抗剂BN52021治疗后可以明显阻止平均肺动脉压的上升，这说明PAF在其中起重要作用。另有实验表明，给动物持续静脉点滴注射小剂量PAF可复制出典型的肺动脉高压，并认为这与PAF引起的肺小血管收缩有关。此外，PAF对肺毛细血管

21、内皮细胞损伤造成的间质水肿及PAF促进血小板及白细胞聚集产生微血栓也与此有关7。因此，PAF在急性重型胰腺炎肺损伤的发生发展中起着重要的作用，PAF拮抗剂有可能减轻急性重型胰腺炎时肺损伤的程度，早期应用有可能防止急性重型胰腺炎时出现肺损伤。作者单位：100037北京，海军总医院肝胆外科(冀振华，马元桂)；第二军医大学长海医院普外科（王本茂，唐岩）；第二军医大学病理生理教研室（李少华）；海军医学研究所航海医学研究室（丁廷楷）参考文献1冀振华，王本茂，李少华，等.血小板激活因子在急性重症胰腺炎发病过程中作用的实验研究.中华外科杂志，1997，35：108-1102丁廷楷，唐亦奇.肺血管外水量的重量分析法及其应用.中国病理生理杂志，1987，3：254-2563Zhou WG, McCollum MO, Levine BA, et al. Role of platelet-activating factor in pancreatitis-associated acu