第16章抗生素类药物的分析-LLQ

1、第十六章第十六章基本要求基本要求一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。之间的关系。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原理、测定方法与计算。理、测定方法与计算。四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。第一节第一节 概述概述一、抗生素的定义一、抗生素的定义 抗生素是指：在低微浓度下抗生素是指：在低微浓度下即可对某些生

2、物的生命活动有特即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。异抑制作用的化学物质的总称。抗生素的来源抗生素的来源1. 1. 生物合成（微生物发酵）生物合成（微生物发酵）2. 2. 化学合成或半合成化学合成或半合成抗生素药物的特点：抗生素药物的特点：化学纯度较低化学纯度较低活性组分易发生变异活性组分易发生变异稳定性差稳定性差二、分类二、分类（按结构与性质）：（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类林可霉素类、其他抗生素类三、抗生素类药物

3、的细菌耐药性三、抗生素类药物的细菌耐药性 细菌耐药性：是指细菌产生的对抗菌药不敏感的现象，是细菌自身生存过程的一种特殊表现形式。（一）鉴别试验（一）鉴别试验 1.官能团的显色反应官能团的显色反应： 内酰胺环的羟内酰胺环的羟肟酸铁反应；链霉素的麦芽酚反应、坂肟酸铁反应；链霉素的麦芽酚反应、坂口反应。口反应。 2.光谱法光谱法 3.色谱法色谱法 4.生物学法生物学法四、抗生素药物的质量分析四、抗生素药物的质量分析抗生素质量的复杂性：抗生素质量的复杂性： 产品稳定性差产品稳定性差分子结构大多不稳定，分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效降解后疗效下降、失效或增加毒副作用或增加毒副作用发酵过程不易控

4、制发酵过程不易控制易受污染易受污染生产工艺复杂生产工艺复杂（二）检查（二）检查发酵液中杂质发酵液中杂质 无机盐、脂肪、各种蛋白质、无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、各种降解产物、色素、热原、毒性物质毒性物质 增加增加 异常毒性、细菌内毒素、异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌热原、降压物质、无菌 检查检查微生物学法与理化法的比较微生物学法与理化法的比较微生物检定法微生物检定法理化法理化法以抗生素对微生物的以抗生素对微生物的杀伤或抑制程杀伤或抑制程度度为指标衡量抗生素的生物效价为指标衡量抗生素的生物效价 根据抗生素结构特点，利用其根据抗生素结构特点，利用其特有的理化性质测

5、定其含量特有的理化性质测定其含量已知或新发现的抗生素、精制品或已知或新发现的抗生素、精制品或粗制品均能测定粗制品均能测定 测定化学结构已知、已提纯的测定化学结构已知、已提纯的抗生素抗生素灵敏度高、样品需用量小、反映抗灵敏度高、样品需用量小、反映抗生素的生素的医疗价值医疗价值，但操作步骤多、，但操作步骤多、费时、费时、误差大误差大 迅速、准确、专属性高、样品迅速、准确、专属性高、样品需用量小、操作简单、省时需用量小、操作简单、省时（三）含量或效价测定（三）含量或效价测定微生物检定法微生物检定法测定抗生素抑菌或杀菌的能力测定抗生素抑菌或杀菌的能力管碟法管碟法浊度法浊度法1.微生物检定法微生物检定法

6、优点优点1、与临床效果一致、与临床效果一致2、灵敏度高、灵敏度高3、干扰物质少、干扰物质少缺点缺点1、操作繁琐、操作繁琐2、培养时间长、培养时间长2、测定误差大、测定误差大2. 化学及物理化学方法化学及物理化学方法以理化方法测定主药含量以理化方法测定主药含量优点优点 1. 准确度高准确度高2. 简单、快速简单、快速1. 不一定代表生物效价不一定代表生物效价缺点缺点2. 易受杂质干扰易受杂质干扰3.3.抗生素的活性以抗生素的活性以效价单位效价单位来表示：来表示： 每每mlml或每或每mgmg中含有某种抗生素的有效成中含有某种抗生素的有效成分的多少，用分的多少，用单位（单位（u u）或）或g g

7、表示。表示。 1 1mgmg青霉素青霉素G G钠盐定为钠盐定为16701670单位单位同一种抗生素的各种盐类的效价可根据其分子量同一种抗生素的各种盐类的效价可根据其分子量进行换算，如：进行换算，如： 1 1mgmg青霉素青霉素G G钾盐的单位（钾盐的单位（u u） =1670=1670356.4/372.5=1595u/mg356.4/372.5=1595u/mg分类分类（按结构与性质）：（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类林可霉素类、其他抗

8、生素类第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素族青霉素族NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）ABA：内酰胺环内酰胺环B：氢化噻唑环：氢化噻唑环*1234头孢菌素族头孢菌素族7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）RCOA：内酰胺环内酰胺环B：氢化噻嗪环：氢化噻嗪环AB*23456178头孢菌素类头孢菌素类7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）RCOABCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素（青霉素（青霉素G、苄青霉素）、苄青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2

9、氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢拉啶头孢拉啶CH2NH2CONONHSCH3COOH头孢氨苄头孢氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2头孢羟氨苄头孢羟氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO头孢噻吩钠头孢噻吩钠SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性结构与性质结构与性质一、一、Na与碱金属与碱金属(Na+、

10、K+)成盐成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 白色沉淀白色沉淀与有机碱与有机碱( (普鲁卡因普鲁卡因) )成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）（二）手性手性C C 87654321NOS头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共轭体系（三）共轭体系 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UVUV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UVUV（四）（四）内

11、酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定不稳定性因素性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 青霉素类青霉素类 某些氧化剂某些氧化剂酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶（某些金属离子）（某些金属离子） （温度）（温度）降解降解失效失效例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类 -内酰胺酶内酰胺酶降解降解失效失效（

12、一）呈色反应（一）呈色反应1. 1. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+鉴别试验鉴别试验 二、二、NaOH2 2HClNOHH- - 内酰胺类内酰胺类NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 （红、棕、褐）（红、棕、褐）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 茚三酮反应茚三酮反应 - -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 蓝紫色蓝紫色3. 双缩脲反应双缩脲反应- - - CONH （开环分解）（开环分解） - 内酰胺类内酰胺类碱性碱性硫酸铜硫酸铜紫紫2OHCONH2CuCOHNCCH3

13、COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH蓝紫色蓝紫色4. 与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应橙黄色橙黄色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- -5 56 6OHHC（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮5. 与变色酸与变色酸- -硫酸反应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林HCHOCHSOH- - - 2 22 2”羰羰基基侧侧链链含含“（分解分解）变色酸变色酸显色显色1. K+、Na+的火焰反应的火焰反应（二）各种盐的反应（二）各种盐的反应 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色

14、+ 0.1%四苯硼钠四苯硼钠 + Ac白白 K+2. 沉淀反应（青霉素盐）沉淀反应（青霉素盐）遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素钠青霉素钠青霉素钾青霉素钾緘緘+ +H3. 重氮化重氮化 - - 偶合反应偶合反应 青霉素青霉素普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素+ + + +H重氮化重氮化-偶合反应偶合反应红红 芳伯氨基芳伯氨基C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2+ +红色红色

15、1、IR法法3180cm-1 N-H内酰胺内酰胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O以阿莫西林为例以阿莫西林为例（三）光谱（三）光谱2、 UV法法样品、分解产物样品、分解产物nm339HA + +苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素Cu2+A,Emin,max,%1cm1 光光谱谱图图头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHpH3.8分子重排分子重排色谱法色谱法（

16、四）（四）1、 TLC法法对照品对照法对照品对照法和和斑斑点点颜颜色色比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件fR2、 HPLC法法Rt比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查 药物药物 检查项目检查项目 检查方法检查方法 头孢他啶头孢他啶 聚合物聚合物 头孢曲松钠头孢曲松钠 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 头孢噻肟钠头孢噻肟钠 头孢呋辛酯头孢呋辛酯 有关物质和异构体有关物质和异构体 HPLC法法 青霉素钾（钠）青霉素钾（钠） 吸收度吸收度 UV 1.1.头孢呋辛酯中头孢呋辛酯中有关物质和异构体有关物质和异构体的检查的检查 固定相：固定相：ODSODS

17、 流动相：流动相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氢铵磷酸二氢铵- -甲醇（甲醇（62:3862:38） 1 1）头孢呋辛酯）头孢呋辛酯3 3- -异构体的制备：头孢呋辛酯对异构体的制备：头孢呋辛酯对 照品照品+ +流动相流动相 头孢呋辛酯头孢呋辛酯3 3- -异构体。异构体。2 2）系统适用性试验：各异构体之间的）系统适用性试验：各异构体之间的R1.5R1.5，以，以 头孢呋辛酯头孢呋辛酯A A异构体计算异构体计算n1500n1500。 3 3）异构体：）异构体： Fe3+/3H+红色红色NaOHHClNOHH2- - 内酰胺类内酰胺类羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物四、含量测定四、含量测定1

18、、可见、可见-紫外分光光度法紫外分光光度法-羟肟酸比色法羟肟酸比色法USP JPHPLCHPLC法法ChPChP 内标法校正因子内标法校正因子外标法外标法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）一法多用（鉴别、检查、含测）第三节 氨基糖苷类抗生素苷苷苷苷元元糖糖缩缩合合 + +氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元氨基糖氨基糖缩合缩合 + +链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素碱性环己多元醇碱性环己多元醇链霉素链霉素链霉胍链霉胍 + 链霉糖链霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺

19、葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺巴龙霉素巴龙霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+ +脱氧链霉胺脱氧链霉胺+D-+D-核糖核糖+ +巴龙霉糖巴龙霉糖巴龙糖胺巴龙糖胺苷元苷元巴龙二糖胺巴龙二糖胺 糖糖 D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺脱氧链霉胺脱氧链霉胺D-D-核糖核糖巴龙霉糖巴龙霉糖OOOOH

20、OCH2OHHONH2HOOOHNH2NH2OHOOHR2NH2CH2OH*R1庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 + 脱氧链霉胺脱氧链霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺庆大霉素庆大霉素C复合物复合物

21、庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 庆大霉素庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3一、一、结构与性质结构与性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3个个庆大霉素庆大霉素 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）链霉素链霉素 pH 57.5庆大霉素庆大霉素 pH 212 稳定稳定稳定性稳定性（四四）UV（三三）链霉素链霉素 230nmNH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OH

22、CHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反应坂口反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应二二、 鉴别鉴别 茚三酮反应茚三酮反应（一一）蓝蓝紫紫色色庆庆大大霉霉素素链链霉霉素素茚茚三三酮酮氨基糖苷结构氨基糖苷结构Molisch试验试验 （二）（二）显色羟甲基糠醛糠醛氨基糖苷类抗生素萘酚或蒽酮脱水水解-五碳糖或六碳糖结构五碳糖或六碳糖结构-萘酚萘酚蒽酮蒽酮OHOH2CCHOOHOH2CCHOHOHOH红紫色红紫色N-N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（三三）甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素水解水解- -N乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲

23、氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色（Elson-Morgan反应反应）庆大霉素庆大霉素NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNCH3COCH3HHOCH2CHOH3(缩合缩合)323COCHCOCHCH- -OHHHH3CH3CCHNNCOCH3CH3COCH3CH3N红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+NCH3COCH3HHOCH2CHOH3 麦芽酚反应麦芽酚反应（四四） 链霉素特征反应链霉素特征反应链链霉霉糖糖链链霉霉素素- -OH麦麦芽芽酚酚紫紫红红色色 + +3FeH+分子重排分子重排NH C NH2HOOHOH

24、NHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫红紫红麦芽酚麦芽酚链霉胍特有反应链霉胍特有反应橙橙红红羟羟基基喹喹啉啉链链霉霉胍胍链链霉霉素素次次溴溴酸酸钠钠- - -8OH（或或-萘酚萘酚）NOH8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反应坂口反应（五五）-萘酚萘酚OHONBrRNHCO NH（六六）- -24SO反应反应白白 - -2 2 + +2 2BaSOSOBaH+UV法法（七七）庆大霉素无庆大霉素无UVUV吸收吸收nmmax230230= = 链霉素链霉素（八）色谱法（八）色谱法（1 1）TLCTLC法

25、：硫酸庆大霉素的鉴别法：硫酸庆大霉素的鉴别 点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色 对照液对照液 判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位 置应一致。置应一致。 点样：供试液点样：供试液 对照液对照液：硫酸链霉素标准品：硫酸链霉素标准品 对照液对照液：硫酸链霉素标准品：硫酸链霉素标准品 + + 硫酸硫酸 新霉素标准品新霉素标准品+ + 硫酸卡那霉素标准品硫酸卡那霉素标准品判定法：供试液中主斑点的位置、颜色、大小判定法：供试液中主斑点的位置、颜色、大小 应与对照液应与对照液 相同，相同， 对照液对照液应显示分离清晰的应显示

26、分离清晰的3 3个斑点个斑点 否则试验无效。否则试验无效。（2 2）HPLCHPLC法：硫酸庆大霉素的鉴别法：硫酸庆大霉素的鉴别 比较供试液与对照液各组分的保留比较供试液与对照液各组分的保留时间。时间。三三、 特殊杂质检查特殊杂质检查链霉素杂质链霉素杂质（一）（一）链霉素链霉素B B（甘露糖链霉素）（甘露糖链霉素） 方法方法 TLCTLC中的对照品法（中的对照品法（BPBP）1. 来源来源 反应中间体反应中间体对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分

27、含量规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素C C组分的测定组分的测定（二二）+ + + 1010.pH吲哚衍生物吲哚衍生物巯基醋酸巯基醋酸邻苯二醛邻苯二醛氨基氨基max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基烷基-2-烷基硫代烷基硫代异吲哚衍生物异吲哚衍生物RNH2+HSCH2COOHOH-CHOCHONRSCH2COOH离子对色谱法离子对色谱法方法方法 2.规定规定 C1 2550% C1a 1540% C2a +C2 2050%计算计算 3.%AAAAA%ACCCCiiaa1 10 00 0 + + + += =2 22 21 11 1峰面积归一化法

28、峰面积归一化法4. 蒸发光散射检测器（蒸发光散射检测器（ChP2010）5. 电化学检测器（电化学检测器（BP） 四四、 含量测定含量测定微生物检定法微生物检定法 各国药典主要采用各国药典主要采用HPLC法法 常用于体内药分常用于体内药分 微生物检定法微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养基本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。以测定供试品效价的一种方法。2CH3NRR3HOHCONH2OOHOH

29、OOHR2R1第四节 四环素类抗生素ABCD2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R11234567891011122CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R12CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO四环素四环素（TC）tetracycline7652CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOCl金霉素金霉素 (CTC) chlortetracycline氯四环素氯四环素7652CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOOH土霉素土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四环素氧四环素7652CH3NHOHCONH2OOHOHOO

30、HCH3OH多西环素多西环素 (DOTC) doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素765美他环素美他环素（METC） metacyclineHOHCONH2OOHOHOOHN CH3 2OHCH2765一、一、 结构与性质结构与性质两性两性（一）（一）1. 与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV UV和荧光性质和荧光性质（三三）与金属离子络合与金属离子络合（四四）pH3 7.5

31、 荧光荧光 （二）（二）旋光性旋光性HOHOCaOOOOHOHOO不稳定性不稳定性（五）（五）1. 差向异构化差向异构化差向金霉素差向金霉素差向四环素差向四环素金霉素金霉素四环素四环素- - - - 6 62 2pH淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光OHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHO差向四环素差向四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHR2R1HO（土霉素、多西环素不易差向异构化土霉素、多西环素不易差向异构化）2. 降解反应降解反应（1）酸性下降解酸性下降解max = 445nmmax = 435nm橙黄色橙黄色脱水金霉素

32、脱水金霉素脱水四环素脱水四环素金霉素金霉素四环素四环素 2 2pH2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HON CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OH脱水四环素脱水四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOpH26pH26TCOHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHOETCN CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OHATCN2CH3OHCONH2OOHOHOHOCH3HEATCpH2pH2（2）碱性下降解碱性下降解异异四四环环素素四四环环素素 - -OH（荧光）（荧光）HOHCONH2OOHOHOOHCH3ON CH3 2二二、 鉴别试验鉴

33、别试验 浓浓H H2 2SOSO4 4反应反应（一一）黄色黄色朱红色朱红色绿绿蓝蓝深紫色深紫色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素 2 2SOH盐酸美他环素盐酸美他环素橙红色橙红色FeCl3反应反应（二二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色红棕色红棕色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素3 3FeClCl-反应反应（三）（三）白白 + +3 3+ +- -AgClAgClHNO33. 031. 0,345max=Anm1mol/L盐酸盐酸-甲醇（甲醇（1100）0.01mg/mlUV法（盐酸美他环素）

34、法（盐酸美他环素）（四）（四）TLCTLC法法（五五）盐酸土霉素的鉴别盐酸土霉素的鉴别 HPLC HPLC法法（六六）EDTAEDTA 克服痕量金属造成的克服痕量金属造成的 拖尾现象拖尾现象比较保留时间比较保留时间三三、 特殊杂质检查特殊杂质检查 4-4-差向四环素（差向四环素（ETCETC） 脱水四环素脱水四环素（ATCATC） 差向脱水四环素差向脱水四环素（EATCEATC） 盐酸金霉素盐酸金霉素（CTCCTC） 有关物质有关物质（一一）HPLCHPLC法（法（20102010版）版）盐酸四环素盐酸四环素吸收度吸收度（二）（二）nmmax355355268268 、盐酸四环素盐酸四环素杂质

35、吸收度杂质吸收度 取供试品配成每毫升取供试品配成每毫升10mg/ml10mg/ml的溶液的溶液至至4cm4cm的吸收池中，在的吸收池中，在530nm530nm处测定，自处测定，自加加0.80.8NaOHNaOH起起5min5min时，其吸收度不得超时，其吸收度不得超过过0.120.12。应严格控制温度和时间应严格控制温度和时间四四、 含量测定含量测定HPLCHPLC法法 盐酸四环素的测定盐酸四环素的测定 系统适用性试验：盐酸四环素、有关系统适用性试验：盐酸四环素、有关 物质及物质及ATCATC峰间的峰间的 分离度分离度均应符合要均应符合要 求。求。 定量方法：外标法以峰面积计定量方法：外标法以

36、峰面积计。第五节 抗生素类药物中高分子 杂质的检查1.1.高分子杂质高分子杂质 分子量大于药物本身的杂质总称。分子量大于药物本身的杂质总称。 蛋白、多肽、多糖或抗生素蛋白、多肽、多糖或抗生素与蛋白、多肽、多糖的结合物。主要来自与蛋白、多肽、多糖的结合物。主要来自于发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青于发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。霉噻唑多肽。 药物的自身聚合物，来自于药物的自身聚合物，来自于生产、贮存过程。可引发过敏。生产、贮存过程。可引发过敏。外源性杂质外源性杂质内源性杂质内源性杂质 3. 3.高分子杂质的质控方法高分子杂质的质控方法（1 1）凝胶色谱法测定高分子杂质原理：使高

37、分子）凝胶色谱法测定高分子杂质原理：使高分子杂质杂质 与药物分离。与药物分离。（2 2）高分子杂质的控制方法）高分子杂质的控制方法-自身对照外标法自身对照外标法 原理原理：测定在：测定在K Kavav=0=0处处 药物缔合物的峰响应药物缔合物的峰响应 指标指标 样品中高分子杂质的响应指标样品中高分子杂质的响应指标 按外标法计算，得样品中高分子杂质按外标法计算，得样品中高分子杂质 相当于药物本身的相对含量。相当于药物本身的相对含量。（3 3）高分子杂质的分析方法）高分子杂质的分析方法简单测定系统：葡聚糖凝胶简单测定系统：葡聚糖凝胶G-10G-10（4040 120m120m）柱）柱. .HPLC

38、HPLC系统系统: :葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10G-10柱柱. .练习与思考A型题型题 1、下列哪个药物会发生羟肟酸铁反应、下列哪个药物会发生羟肟酸铁反应 A. 青霉素青霉素 B. 庆大霉素庆大霉素 C. 土霉素土霉素 D. 链霉素链霉素 E. 维生素维生素C 练习与思考A型题型题 2、中国药典、中国药典(2010年版年版)测定头孢菌素类药物测定头孢菌素类药物的含量时，多数采用的方法是的含量时，多数采用的方法是 A. 微生物法微生物法 B. 碘量法碘量法 C. 汞量法汞量法 D. 正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法 E. 反相高效液相色谱法反相高效液相色谱法练习与思考A型题型题 3、能发生

39、重氮化、能发生重氮化-偶合反应的抗生素类药物是偶合反应的抗生素类药物是 A. 青霉素青霉素 B. 庆大霉素庆大霉素 C. 苄星青霉素苄星青霉素 D. 盐酸四环素盐酸四环素 E. 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素练习与思考A型题型题 4、四环素在酸性条件下的降解产物是、四环素在酸性条件下的降解产物是 A. 差向四环素差向四环素 B. 脱水四环素脱水四环素 C. 异四环素异四环素 D. 去甲四环素去甲四环素 E. 去甲氧四环素去甲氧四环素练习与思考A型题型题 5、庆大霉素和链霉素可以发生、庆大霉素和链霉素可以发生Molisch反应，反应，因为它们分子结构中含有因为它们分子结构中含有 A. 羰基羰基 B

40、. 五碳糖或六碳糖五碳糖或六碳糖 C. 羧基羧基 D. 羟基羟基 E. 氨基氨基练习与思考A型题型题 6、麦芽酚与硫酸铁铵作用显示的颜色是、麦芽酚与硫酸铁铵作用显示的颜色是 A. 紫红色紫红色 B. 黄色黄色 C. 橙红色橙红色 D. 绿色绿色 E. 蓝紫色蓝紫色练习与思考A型题型题 7、盐酸四环素中有关物质的检查在中国药、盐酸四环素中有关物质的检查在中国药典典2010版中采用的方法是版中采用的方法是 A. GC-MS B. IR C. HPLC D. UV E. TLC练习与思考A型题型题 8、能区别链霉素和庆大霉素，为链霉素特有、能区别链霉素和庆大霉素，为链霉素特有的鉴别反应是的鉴别反应是 A. 茚三酮反应茚三酮反应 B. 三氯化锑反应三氯化锑反应 C. 坂口反应坂口反应 D. 硫色素反应硫色素反应 E. N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应练习与思考A型题型题 9、青霉素在碱性或青霉素酶作用下发生降解、青霉素在碱性或青霉素酶作用下发生降解反应的产物是反应的产物是 A. 青霉烯酸青霉烯酸 B.