第三章核酸化学forgraduatescandidates

1、一、核酸的种类和组成单位一、核酸的种类和组成单位二、核酸的分子结构二、核酸的分子结构DNA的结构的结构(一级、二级、三级结构一级、二级、三级结构)RNA的结构（的结构（tRNA、mRNA、rRNA）三、核酸的理化性质三、核酸的理化性质核酸的一般性质核酸的一般性质紫外吸收特征紫外吸收特征变性及复性变性及复性四、核酸的分离纯化四、核酸的分离纯化p 1982年，年，Cech发现四膜虫的发现四膜虫的rRNA具有自我剪具有自我剪接的功能。接的功能。1983-1984，Altman也发现也发现RNA具具有催化功能（核酶）。有催化功能（核酶）。1.1.核酸的种类核酸的种类脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，D

2、eoxyribonucleic Acid） 多为双链线状，也有单链、环状多为双链线状，也有单链、环状核糖核酸核糖核酸（RNA，Ribonucleic Acid） 多为单链，分子量比多为单链，分子量比DNA小，包括小，包括 tRNA（10-15%）、mRNA（5%）、rRNA（80%） 参与蛋白质的生物合成参与蛋白质的生物合成 核酸的种类和组成单位核酸的种类和组成单位mRNArRNAtRNA2.核酸的组成核酸的组成DNA和和RNA是是线性多聚核苷酸线性多聚核苷酸基本结构单元是基本结构单元是核苷酸核苷酸戊糖：戊糖：DNA为为脱氧脱氧核糖，核糖，RNA为核糖为核糖碱基：碱基：DNA（A、T、C、G）

3、 RNA（A、U、C、G）核酸核酸核苷酸核苷酸磷酸磷酸核苷核苷戊糖戊糖碱基碱基水水解解碱基碱基嘌呤碱嘌呤碱：腺嘌呤：腺嘌呤A、鸟嘌呤、鸟嘌呤G嘧啶碱嘧啶碱：胸腺嘧啶：胸腺嘧啶T、胞嘧啶、胞嘧啶C、尿嘧啶、尿嘧啶U稀有碱基稀有碱基 嘌呤环嘌呤环 嘧啶环嘧啶环l碱基具有芳香环的结构特征碱基具有芳香环的结构特征l嘌呤环和嘧啶环呈嘌呤环和嘧啶环呈( (接近接近) )平面的结构平面的结构l碱基的芳香环与环外基团可以发生：碱基的芳香环与环外基团可以发生： 酮式酮式烯醇式烯醇式 胺式胺式亚胺式亚胺式互变异构互变异构NNNNONH2H鸟嘌呤鸟嘌呤NNNNOH次黄嘌呤次黄嘌呤CH31-甲基次黄嘌呤甲基次黄嘌呤核

4、苷：核糖核苷：核糖+ +碱基碱基l糖与碱基之间的糖与碱基之间的C-N键：键：C-N糖苷键糖苷键。胞嘧啶核苷尿嘧啶核苷鸟嘌呤核苷腺嘌呤核苷NNOHHONNNH2HONNOHH2NNNNNNNNH2OHHOHHOHHHOCH2HOCH2OHHOHHOHHOHHOHHOHHHOCH2OHHOHHOHHHOCH2 稀有核苷：稀有核苷：2-0-甲基甲基-核糖核糖-核苷核苷稀有碱基稀有碱基 DHU连接方式连接方式 （假尿嘧啶核苷）（假尿嘧啶核苷）NNNNNHHNHNHOOOOHOHOHOHCH2POHOOOHOCH2核苷酸核苷酸碱基连接（核苷键）碱基连接（核苷键）酯酯 键键（对（对DNA为为H）p 4.

5、DNA和和RNA共有的成分是（共有的成分是（ ）。）。D 核糖核糖 B. D 2-脱氧核糖脱氧核糖 C. 鸟嘌呤鸟嘌呤 D. 尿嘧啶尿嘧啶 E. 胸腺嘧啶胸腺嘧啶p 组成核酸的基本单位是组成核酸的基本单位是嘌呤碱与嘧啶碱嘌呤碱与嘧啶碱 B. 核糖与脱氧核糖核糖与脱氧核糖 C. 核苷核苷 D. 核苷核苷 酸酸 E. 寡核苷寡核苷 酸酸 p下列哪种碱基只存在于下列哪种碱基只存在于RNA而不存在于而不存在于DNA（ ）。）。A. 尿嘧啶尿嘧啶 B. 腺嘌呤腺嘌呤 C. 胞嘧啶胞嘧啶 D. 胸腺嘧啶胸腺嘧啶 ATP (腺嘌呤核糖核苷三磷酸腺嘌呤核糖核苷三磷酸O-POO-NNNNNH2OHHOHHOHH

6、OCH2O-POO-O-POO-三磷酸腺苷 (ATP)能量转换中间体能量转换中间体ATP含两个高能磷酸键含两个高能磷酸键 水解时水解时 释放大量自由能释放大量自由能ATP是磷酰化剂是磷酰化剂GTP (鸟嘌呤核糖核苷三磷酸鸟嘌呤核糖核苷三磷酸)主要作为主要作为蛋白质蛋白质合成磷酰基供体合成磷酰基供体cAMP 3,5环腺嘌呤核苷一磷酸（细胞间信使）环腺嘌呤核苷一磷酸（细胞间信使） 环状磷酯键是高能键环状磷酯键是高能键简述简述ATP在生物体内的主要作用在生物体内的主要作用生物系统的能量交换中心（能量货币）生物系统的能量交换中心（能量货币）参与代谢调节参与代谢调节水解放能推动热力学上的不利反应水解放能

7、推动热力学上的不利反应调节代谢路径方向（促进糖酵解、抑制糖异生调节代谢路径方向（促进糖酵解、抑制糖异生）细胞内磷酸集团转移的中间载体（细胞内磷酸集团转移的中间载体（NTP、dNTP）合成合成RNA的原料的原料二、核酸的分子结构二、核酸的分子结构（一）（一）DNA（二）（二）RNA1、DNA的一级结构的一级结构 核苷酸的排列顺序核苷酸的排列顺序核苷酸间以核苷酸间以3-5磷酸二酯键磷酸二酯键相连相连5-磷酸端（磷酸端（5-P）和）和3-羟基端（羟基端（3-OH）多聚核苷酸链具有多聚核苷酸链具有方向性：方向性： 表示时需注明方向：表示时需注明方向：53或或35特点特点3，5-磷酸二酯键磷酸二酯键35

8、pDNA单链中连接脱氧核苷酸的化学键是单链中连接脱氧核苷酸的化学键是( )。 A.氢键氢键 B. 3-5磷酸二酯键磷酸二酯键 C. 离子键离子键 D. 2-5磷酸二酯键磷酸二酯键p自然界游离核苷酸中，磷酸最常见是位于自然界游离核苷酸中，磷酸最常见是位于( )。A戊糖的戊糖的C-5上上 B戊糖的戊糖的C-2上上C戊糖的戊糖的C-3上上 D戊糖的戊糖的C-2和和C-5上上53首端首端末端末端PPPPPP pApGpCpTpG -pA-G -C-T-G核苷酸顺序又称核苷酸顺序又称碱基顺序碱基顺序碱基互补配对方式：碱基互补配对方式：A-T、G-C一一 股核苷酸序列与另一股序列互补股核苷酸序列与另一股序

9、列互补腺嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶胸腺嘧啶鸟嘌呤鸟嘌呤胞嘧啶胞嘧啶小沟小沟大沟大沟反向平行、右手螺旋反向平行、右手螺旋碱基位于内侧碱基位于内侧（碱基平面互相平行、垂直于螺旋轴）（碱基平面互相平行、垂直于螺旋轴）两条链依靠碱基间氢键而结合两条链依靠碱基间氢键而结合（碱基互补配对）（碱基互补配对）螺旋每周含螺旋每周含10个碱基对个碱基对螺距螺距3.4nmB型双螺旋特点型双螺旋特点p根据根据Watson-Crick模型，求每一微米模型，求每一微米DNA双螺旋含双螺旋含核苷酸对的平均数为核苷酸对的平均数为( )。A25400B2540 C29411 D2941 E3505p关于关于Watson and Cri

10、ck DNA双螺旋模型（）是错的。双螺旋模型（）是错的。A. 组成双螺旋的两条组成双螺旋的两条DNA 链反向平行链反向平行B. 碱基对位于双螺旋的内侧碱基对位于双螺旋的内侧C. 维系双螺旋结构的作用力主要是碱基堆积力维系双螺旋结构的作用力主要是碱基堆积力 D. DNA 双链是左手螺旋双链是左手螺旋 双螺旋的补充双螺旋的补充B-form helix（DNA）：获得的条件获得的条件在较高湿度下（在较高湿度下（92%）制得）制得基本特性基本特性反向平行、右手螺旋、反向平行、右手螺旋、存在情况存在情况细胞中细胞中DNA主要的二级结构主要的二级结构A-form helix（DNA）：）： 获得的条件获得

11、的条件 相对湿度相对湿度75%以下获得的以下获得的DNA纤维纤维 基本特性基本特性 右手螺旋右手螺旋 较较B型的型的DNA宽而短宽而短 存在情况存在情况 RNA分子的双螺旋区分子的双螺旋区 RNA-DNA杂交双链具有类似结构杂交双链具有类似结构 Z-DNA获得的条件获得的条件人工合成的寡核苷酸人工合成的寡核苷酸基本特性基本特性反向平行、左手螺旋反向平行、左手螺旋磷酸和糖的骨架呈现磷酸和糖的骨架呈现Z字形（字形（zigzag）走向）走向存在情况存在情况 嘌呤与嘧啶相间排列的核酸链易出现嘌呤与嘧啶相间排列的核酸链易出现p下列下列DNA模型中，属于左手的螺旋的是模型中，属于左手的螺旋的是 （ ）。）

12、。A. Z-DNA B. C-DNA C. B-DNA D. A-DNAp生物体内天然状态的生物体内天然状态的DNA主要是以主要是以存在存在 A. A型型 B. B型型 C. C型型 D. Z型型 p稳定稳定DNA双螺旋结构的主要因素是双螺旋结构的主要因素是 ( )。 A.氢键和离子键氢键和离子键 B. 疏水键和范德华力疏水键和范德华力 C.碱基堆积力和氢键碱基堆积力和氢键 D.离子键和范德华力离子键和范德华力 三股螺旋三股螺旋DNA （H-DNA，铰链，铰链hinged DNA ）寡嘧啶寡嘧啶/ /寡嘌呤核苷酸链寡嘌呤核苷酸链第三股碱基与第三股碱基与Watson-Crick碱基对中的碱基对中

13、的嘌呤碱嘌呤碱形成形成Hoogsteen配对（配对（中间是嘌呤）中间是嘌呤） DNA碱基组成碱基组成的的Chargaff规则规则具有生物具有生物种的特异性种的特异性 与组织与组织/器官来源无关器官来源无关 不受生长发育、营养状况及环境条件影响不受生长发育、营养状况及环境条件影响 Chargaff规则规则碱基摩尔数：碱基摩尔数：A=T、G=CA+C=G+T（含（含氨基氨基碱基总数碱基总数=含含酮基酮基碱基总数）碱基总数）A+G=C+T （嘌呤嘌呤总数总数=嘧啶嘧啶总数总数） p有二个有二个DNA样品，分别来自两种未确认的细菌。样品，分别来自两种未确认的细菌。两种两种DNA样品中的腺嘌呤碱基含量分

14、别占它们样品中的腺嘌呤碱基含量分别占它们DNA总碱基的总碱基的32和和17。这两个。这两个DNA样品的腺嘌呤，样品的腺嘌呤，鸟嘌呤，胞嘧啶和胸腺嘧啶的相对比例是多少？其中鸟嘌呤，胞嘧啶和胸腺嘧啶的相对比例是多少？其中哪一种哪一种DNA是取自温泉（是取自温泉（64）环境下的细菌，哪）环境下的细菌，哪一种一种DNA是取自嗜热菌？答案的依据是什么？是取自嗜热菌？答案的依据是什么？A:32%T:32%A:17%T:17%36%66%C:18%C:33%p一段双链一段双链DNA包含包含1000个对，其组成中个对，其组成中G+C58%，那么该双链那么该双链DNA中中T的含量是的含量是: A.58% B.

15、42% C. 29% D. 21%p假尿嘧啶核苷分子中，核糖与嘧啶的连接方式是假尿嘧啶核苷分子中，核糖与嘧啶的连接方式是: A.C1-N1 B.C1-N9 C.C1-C2 D.C1-C5p 下列关于双链下列关于双链DNA碱基含量关系中（碱基含量关系中（ ）是错误的。）是错误的。 A. A+GC+T B. AT C. A+TG+C D. CGp DNA分子的碱基组成特点是（分子的碱基组成特点是（ ）。）。 A. A/T1 B. G+C/A+T1 C. G/C1 D. A+G/C+T13. DNA的三级结构的三级结构（超螺旋）（超螺旋）在二级结构基础上经扭曲和折叠形成的在二级结构基础上经扭曲和折叠

16、形成的 构象（双螺旋的螺旋）构象（双螺旋的螺旋）（H H2A2A、H H2B2B、H H3 3、H H4 4）2 2 压缩分子压缩分子RNA和蛋白质核心和蛋白质核心细菌拟核的突环结构细菌拟核的突环结构p真核生物真核生物DNA的高级结构包括有（的高级结构包括有（ ）。）。A核小体核小体 B环状环状DNA C染色质纤维染色质纤维 D-螺旋螺旋核糖核糖核苷酸通过核苷酸通过磷酸二酯键磷酸二酯键形成的无分支线形长链。形成的无分支线形长链。（1）RNA一级结构特点一级结构特点 t RNA m RNA r RNA tRNA分子特点分子特点分子较小（分子较小（7090个核苷酸个核苷酸）含有较多含有较多修饰成分

17、修饰成分3端都具有端都具有CpCpA-OH结构结构5端磷酸化，端磷酸化，pG（pC）5末端有甲基化的鸟苷酸：末端有甲基化的鸟苷酸：帽结构帽结构真核细胞真核细胞mRNA一级结构特点一级结构特点3末端有末端有 聚腺苷酸聚腺苷酸(polyA)：尾结构尾结构转录后经转录后经polyA聚合酶作用添加聚合酶作用添加转移转移半衰期半衰期识别识别稳定性稳定性5 ，5 三磷酸桥三磷酸桥核糖甲基化核糖甲基化核糖甲基化核糖甲基化p5-末端末端有帽子结构的有帽子结构的RNA分子是（分子是（ ） A.原核生物原核生物mRNA B.原核生物原核生物rRNA C.真核生物真核生物mRNA D.真核生物真核生物rRNAp真核

18、生物真核生物mRNA中中5 末端的末端的mG与第二核苷酸间的与第二核苷酸间的 连接方式是连接方式是 （ ）。）。A. 52 B. 53 C. 35 D. 55 p大部分真核细胞大部分真核细胞mRNA的的3-末端都具有：末端都具有：A多聚多聚A B多聚多聚U C多聚多聚T D多聚多聚C E多聚多聚Gp寡聚寡聚dT-纤维素柱层析用于（纤维素柱层析用于（ ）。）。A. 从总从总DNA中分离纯化质粒中分离纯化质粒DNAB. 从总核蛋白中分离出从总核蛋白中分离出DNPC.从总从总RNA中纯化中纯化mRNA D. 除去杂蛋白除去杂蛋白ptRNA分子二级结构的特征是分子二级结构的特征是( )。A. 3端有多

19、聚端有多聚A B5端有端有C-C-A C.有反密码子环有反密码子环 D.有氨基酸残基有氨基酸残基 E. 尿嘧啶环尿嘧啶环p关于关于RNA分子中分子中“尾尾”的正确叙述是的正确叙述是 ( )。A.是是tRNA的加工过程的加工过程 B.存在于存在于tRNA的的3末端末端C.是由多聚腺苷酸是由多聚腺苷酸(polyA)组成组成 D. 存在于真核细胞的存在于真核细胞的mRNA上上pmRNA的特点有：的特点有：A分子大小不均一分子大小不均一 B有有3-多聚腺苷酸尾多聚腺苷酸尾C有编码区有编码区 D有有5C-C-A结构结构70S80Sp真核细胞核糖体的沉降系数是真核细胞核糖体的沉降系数是 A50S B60S

20、 C70S D80S p各类核糖核酸中各类核糖核酸中,稀有核苷酸含量百分比最高的是稀有核苷酸含量百分比最高的是A. tRNA B. 5srRNA C. mRNA D、rRNAp有关有关RNA的描写哪项是错误的（的描写哪项是错误的（ ）。）。AmRNA分子中含有遗传密码分子中含有遗传密码BtRNA是分子量最小的一种是分子量最小的一种RNAC胞浆中只有胞浆中只有mRNAD组成核糖体的主要是组成核糖体的主要是rRNA借助次级键进而折叠借助次级键进而折叠（三级结构）（三级结构） 2. RNA的高级结构的高级结构RNA通常是通常是单链线形单链线形分子分子 自身回折形成局部双螺旋自身回折形成局部双螺旋（二

21、级结构）（二级结构） 除除tRNA多数成核蛋白复合物多数成核蛋白复合物（四级结构）（四级结构） 如核糖体、拼接体、编辑体（如核糖体、拼接体、编辑体（RNP） A-U G-CtRNA的二级和三级结构的二级和三级结构 tRNA的三叶草结构（二级结构）的三叶草结构（二级结构）氨基酸臂氨基酸臂DHU环环反密码环反密码环额外环额外环T C环环末端末端CCA-OH接受活化接受活化AA识别密码子识别密码子分类的重要指标分类的重要指标 tRNA的倒的倒L型结构（三级结构）型结构（三级结构）DHU环环p决定决定tRNA携带氨基酸特异性的关键部位是：携带氨基酸特异性的关键部位是： A.3末端末端 B.TC环环 C

22、.DHU环环 D.额外环额外环 E.反密码子环反密码子环p tRNA的二级结构为（的二级结构为（ ）。）。双螺旋双螺旋 B. 超螺旋超螺旋 C. 线形线形 D. 三叶草形三叶草形 E. 倒倒“L”形形p有关有关RNA结构的叙述哪项是正确的？结构的叙述哪项是正确的？A.通常以双链分子存在通常以双链分子存在 B.通常以环状单链分子存在通常以环状单链分子存在C.通常以单股链存在，可有局部双链结构通常以单股链存在，可有局部双链结构D.RNA的空间构象为超螺旋结构的空间构象为超螺旋结构p核酸的组成和在细胞内的分布如何核酸的组成和在细胞内的分布如何?核酸由核酸由DNA和和RNA组成组成在真核细胞中，在真核

23、细胞中，DNA主要分布于细胞核内主要分布于细胞核内另外叶绿体、线粒体和质粒中也有另外叶绿体、线粒体和质粒中也有DNARNA主要分布在细胞核和细胞质中主要分布在细胞核和细胞质中另外叶绿体和线粒体中也有另外叶绿体和线粒体中也有RNA三、核酸的理化性质三、核酸的理化性质（一）核酸的一般性质（一）核酸的一般性质1.核酸的水解核酸的水解2.核酸的酸碱性质核酸的酸碱性质酸、碱、酶酸、碱、酶 DNA/RNA对酸碱对酸碱耐受程度耐受程度不同不同酸水解（完全水解）酸水解（完全水解）糖苷键糖苷键比比磷酸酯键磷酸酯键更敏感更敏感嘌呤碱嘌呤碱比比嘧啶嘧啶碱的糖苷键更不稳定碱的糖苷键更不稳定对酸最不稳定的对酸最不稳定的

24、 嘌呤嘌呤与脱氧核糖间糖苷键与脱氧核糖间糖苷键1.1.核酸的水解核酸的水解DNA在在pH2.8、100加热加热1h，可除去嘌，可除去嘌呤形成无嘌呤酸（呤形成无嘌呤酸（apurinic acid，APA）2/3环磷酸酯环磷酸酯2核苷酸核苷酸3 核苷酸核苷酸碱水解碱水解 RNA磷酸酯键磷酸酯键比比DNA的更敏感（的更敏感（0.3M -1M）根据底物：根据底物： DNase、RNase根据作用方式：根据作用方式：核酸外切酶、核酸内切酶核酸外切酶、核酸内切酶底物二级结构：底物二级结构：双链酶、单链酶双链酶、单链酶作用的化学键：作用的化学键：磷酸二酯酶、磷酸二酯酶、磷酸单酯酶磷酸单酯酶非特异性非特异性/

25、 /碱基特异的碱基特异的N糖苷酶糖苷酶 水解糖苷键水解糖苷键5 -T-A-G-C-T-A-T-A-G-C-T-A-33 -A-T-C-G-A-T- A-T-C-G-A-T- 5 5 -T-A-G-C-T-A- -T-A-G-C-T-A-33 -A-T-C-G-A-T- - A-T-C-G-A-T- 5 5 -T-A-G-C- T-A-T-A-G-C-T-A-33-A-T-C-G-A-T-A-T -C-G-A-T- 5 限制性内切酶限制性内切酶( (细菌细菌) )具严格的具严格的碱基序列碱基序列专一性专一性平末端平末端粘末端粘末端l核苷酸是两性电解质核苷酸是两性电解质2. 核酸的酸碱性质核酸的酸

26、碱性质DNA等电点为等电点为44.5RNA等电点为等电点为22.5 碱基含有共轭双键碱基含有共轭双键紫外吸收光谱：紫外吸收光谱：260nm核酸及其组份定量的依据核酸及其组份定量的依据（二）核酸的紫外吸收特征（二）核酸的紫外吸收特征通常通常A260为为1相当于：相当于： 50g/mL双螺旋双螺旋DNA40g/mL单链单链DNA（或（或RNA）20g/mL寡核苷酸寡核苷酸 p 核酸具有紫外吸收能力的原因是（核酸具有紫外吸收能力的原因是（ ）。）。A. 嘌呤和嘧啶环中有共轭双键嘌呤和嘧啶环中有共轭双键B. 嘌呤和嘧啶中有酮基嘌呤和嘧啶中有酮基C. 嘌呤和嘧啶中有氨基嘌呤和嘧啶中有氨基 D. 嘌呤和嘧

27、啶连接了核糖嘌呤和嘧啶连接了核糖 E. 嘌呤和嘧啶连接了磷酸基团嘌呤和嘧啶连接了磷酸基团1 1、核酸的、核酸的变性变性 实质：实质： 某些理化因素使碱基对的氢键断裂，某些理化因素使碱基对的氢键断裂， 核酸分子高级结构改变、理化性质及核酸分子高级结构改变、理化性质及 生物活性发生改变。生物活性发生改变。 不涉及磷酸二酯键断裂，一级结构不变不涉及磷酸二酯键断裂，一级结构不变（三）核酸的变性与复性（三）核酸的变性与复性降解降解：核苷酸骨架上：核苷酸骨架上3，5 -磷酸二酯键的断裂磷酸二酯键的断裂变性因素变性因素 高温（一般高温（一般75） 热变性热变性 强酸、碱强酸、碱 酸碱变性酸碱变性 甲醛甲醛（

28、Agarose中中RNA ） 尿素尿素（PAGE中中DNA ）机理：双链间氢键断开，消除二级结构机理：双链间氢键断开，消除二级结构增色效应增色效应 核酸降解或完全变性后紫外吸收值增加：核酸降解或完全变性后紫外吸收值增加：天然天然DNA 25-40%、RNA 约约1.1%l实质：碱基暴露实质：碱基暴露RNA变性引起的性质变化没有变性引起的性质变化没有DNA明显明显变性过程是变性过程是“跃变跃变”而非渐变而非渐变加热变性使加热变性使DNA双螺旋结构失去一半所双螺旋结构失去一半所需的温度称为融点需的温度称为融点/熔解温度（熔解温度（Tm）指增色效应达指增色效应达50%时的温度时的温度l一般一般DNA

29、 Tm 值在值在85 - 90 C之间之间 Tm值大小与下列因素有关：值大小与下列因素有关：DNA的均一性：的均一性：越均一越均一Tm的的范围愈小范围愈小GC含量：含量：越高越高Tm越高越高 介质的离子强度：介质的离子强度：愈高愈高Tm愈高愈高 不易用稀电解质保存不易用稀电解质保存DNAp DNA在纯水室温下放置时，为什么线状双链在纯水室温下放置时，为什么线状双链DNA 会分离成它的组成链？会分离成它的组成链？失去阳离子的稳定作用、失去阳离子的稳定作用、DNA的解链温度的解链温度Tm降低降低p下列哪些物质能降低双链下列哪些物质能降低双链DNA的的Tm值？值？SSB、核组蛋白、氯化钠、甲酰胺、碱

30、、核组蛋白、氯化钠、甲酰胺、碱SSB：单链结合蛋白：单链结合蛋白甲酰胺：强烈的氢键竞争者甲酰胺：强烈的氢键竞争者碱：增加碱基电荷碱：增加碱基电荷p影响影响Tm值的因素有（值的因素有（ ）。）。A. 一定条件下核酸分子越长，一定条件下核酸分子越长，Tm值越大值越大B. DNA中中G，C对含量高，则对含量高，则Tm值高值高C. 溶液离子强度高，则溶液离子强度高，则Tm值高值高D. DNA中中A，T含量高，则含量高，则Tm值高值高变性变性DNA在适当条件下，两条彼此分开的在适当条件下，两条彼此分开的单链重新缔合成双链单链重新缔合成双链p热变性热变性DNA骤然冷却（淬火）不能复性骤然冷却（淬火）不能复

31、性p将变性将变性DNA缓慢冷却（退火）可以复性缓慢冷却（退火）可以复性减色效应减色效应（低色效应）（低色效应）复性时紫外吸收减少复性时紫外吸收减少l分子量：越大，复性越难分子量：越大，复性越难l浓度：越大，复性越容易浓度：越大，复性越容易l本身组成和结构：具多重复序列本身组成和结构：具多重复序列DNA复性快复性快 影响复性程度与速率的因素影响复性程度与速率的因素pDNA变性时变性时( )断裂，变性后紫外吸收会断裂，变性后紫外吸收会( )。 A.离子键，降低离子键，降低 B.离子键，增强离子键，增强 C.分子键，降低分子键，降低 D.氢键，增强氢键，增强 pDNA变性是指（变性是指（ ）。）。A

32、分子中磷酸二酯键断裂分子中磷酸二酯键断裂B多核苷酸链解聚多核苷酸链解聚CDNA分子由超螺旋分子由超螺旋双链双螺旋双链双螺旋D互补碱基之间氢键断裂互补碱基之间氢键断裂EDNA分子中碱基丢失分子中碱基丢失pDNA Tm值较高是由于哪组核苷酸含量较高所致？值较高是由于哪组核苷酸含量较高所致？AG+A BC+G CA+T DC+T EA+CpDNA变性后，下列那一项变化是正确的变性后，下列那一项变化是正确的? A.对对260nm紫外吸收减少紫外吸收减少 B.溶液粘度下降溶液粘度下降 C.磷酸二酯键断裂磷酸二酯键断裂 D.核苷键断裂核苷键断裂 E.嘌吟环破裂嘌吟环破裂pDNA复性的重要标志是复性的重要标

33、志是( )。 A.溶解度降低溶解度降低 B.溶液粘度降低溶液粘度降低 C.紫外吸收增大紫外吸收增大 D.紫外吸收降低紫外吸收降低p下列各下列各DNA分子中，碱基组成比例各不相同，其中分子中，碱基组成比例各不相同，其中那种那种DNA的的Tm最低（最低（ ）。）。A. A-T占占15% B. G-C占占25% C. G-C占占40% D. A-T占占80% E. G-C占占35% p由结核分枝杆菌提纯出含有由结核分枝杆菌提纯出含有15.1（按摩尔计算）（按摩尔计算）的腺嘌呤的的腺嘌呤的DNA样品，计算其它碱基的百分含量。样品，计算其它碱基的百分含量。A=T=15.1% ； G=C=34.9% 下列

34、三种下列三种DNA中，哪个的中，哪个的Tm值最高？哪个的值最高？哪个的Tm值值最低？为什么？最低？为什么？A. AAGTTCTCTGAATTA TTCAAGAGACTTAATB. AGTCGTCAATGCATT TCAGCAGTTACGTAAC. GGATCTCCAAGTCAT CCTAGAGGTTCAGTAp将下列将下列DNA分子加热变性，再在各自的最适温度下复分子加热变性，再在各自的最适温度下复性，哪种性，哪种DNA复性形成原来结构的可能性更大？为什么？复性形成原来结构的可能性更大？为什么？A.ATATATATAT B. TAGACGATGC TATATATATA ATCTGCTACGl不

35、同来源的不同来源的DNA经热变性后缓慢冷却经热变性后缓慢冷却l异源异源DNA间如存在间如存在互补序列互补序列l复性时会交错配对形成复性时会交错配对形成杂交杂交DNA分子分子3. 核酸的杂交核酸的杂交 Southern杂交（杂交（DNA） Northern杂交（杂交（RNA） Western杂交杂交 ( Pr )1.核酸的超速离心核酸的超速离心利用核酸利用核酸MW、密度和构象的差异进行分离、密度和构象的差异进行分离蔗糖蔗糖/ /甘油甘油/ /浮力密度梯度离心浮力密度梯度离心2. .核酸的凝胶电泳核酸的凝胶电泳琼脂糖、琼脂糖、PAGE （聚丙烯酰胺凝胶电泳）（聚丙烯酰胺凝胶电泳）不同构象的不同构象

36、的DNA分子迁移率不同分子迁移率不同 超螺旋线状分子开环状分子超螺旋线状分子开环状分子溴化乙锭、硝酸银溴化乙锭、硝酸银3. .核酸的柱层析核酸的柱层析羟基磷灰石柱层析层析羟基磷灰石柱层析层析用于分子杂交种用于分子杂交种单链单链和和双链双链的分离的分离吸附能力强吸附能力强Oligo (dT )寡聚脱氧胸苷酸亲和层寡聚脱氧胸苷酸亲和层析析分离分离mRNA4. DNA的提取与纯化的提取与纯化苯酚：蛋白质的变性剂苯酚：蛋白质的变性剂乙醇：沉淀乙醇：沉淀DNA蛋白酶蛋白酶K：降解细胞蛋白：降解细胞蛋白SDS：裂解细胞：裂解细胞水：溶解水：溶解DNA（不溶于不溶于0.14M NaCl）DNA与碱性蛋白质形

37、成核蛋白与碱性蛋白质形成核蛋白DNPDNP溶于溶于水和浓盐溶液（水和浓盐溶液（1M NaCl）破碎破碎5. RNA的提取与纯化的提取与纯化DEPC(焦碳酸二乙酯焦碳酸二乙酯)：破坏：破坏RNase酸性胍盐酸性胍盐+苯酚苯酚+氯仿抽提氯仿抽提 异硫氰酸胍使蛋白质变性异硫氰酸胍使蛋白质变性胍盐胍盐/氯化铯将细胞抽提物密度梯度离心氯化铯将细胞抽提物密度梯度离心上层蛋白、中间上层蛋白、中间DNA、底部、底部RNAp 防止降解和变性防止降解和变性p 条件温和、防止过酸条件温和、防止过酸/ /碱、碱、p 避免剧烈搅拌避免剧烈搅拌p 防止防止核酸酶核酸酶作用作用p一单链一单链DNA与一单链与一单链RNA分子

38、量相同，如何区分？分子量相同，如何区分？ 专一性的专一性的DNA酶与酶与RNA酶酶 碱水解：碱水解：RNA易被水解易被水解 颜色反应：兰色颜色反应：兰色 绿色绿色 利用单核苷酸分析：利用单核苷酸分析：U、T6. 核酸及其组分含量的测定核酸及其组分含量的测定（1）紫外吸收法）紫外吸收法（260nm）（2）定糖法）定糖法RNA：核糖：核糖 糠醛糠醛 绿色物质绿色物质（670-680nm）DNA：脱氧核糖：脱氧核糖+二苯胺二苯胺兰色物质兰色物质（595-620nm） 苔黑酚地衣酚浓HCl浓硫酸（4）琼脂糖凝胶电泳）琼脂糖凝胶电泳溴乙锭溴乙锭能插入能插入DNA分子碱基间形成复合物分子碱基间形成复合物紫

39、外线照射下荧光强度与紫外线照射下荧光强度与DNA含量成正比含量成正比（3）定磷法）定磷法 核酸含磷量为核酸含磷量为9.5% （1g磷相当于磷相当于10.5g核酸）核酸）橘红色橘红色核酸核酸纯度纯度的测定的测定通常用通常用A260/A280 =1.8-2.0作为纯度标准作为纯度标准纯纯DNA比值比值1.8， 1.8 Pr污染污染纯纯RNA比值比值2.0， 2.0 RNA污染污染OD260的应用的应用 DNA或或RNA的定量的定量OD260=1.0相当于：相当于：l50g/ml双链双链DNAl40g/ml单链单链DNA（或（或RNA）l20g/ml寡核苷酸寡核苷酸判断核酸样品的纯度判断核酸样品的纯

40、度（ OD260/OD280 ）DNA纯品纯品: 1.8；RNA纯品纯品: 2.0判断判断DNA是否变性是否变性 变性（增色效应）；复性（减色效应）变性（增色效应）；复性（减色效应）p 从动植物细胞匀浆中提取基因组从动植物细胞匀浆中提取基因组DNA时，常用时，常用EDTA、氯仿、氯仿-异戊醇混合液和异戊醇混合液和95%乙醇试剂。请根乙醇试剂。请根据蛋白质和核酸理化性质回答：据蛋白质和核酸理化性质回答：（1）该实验中这些试剂各起什么作用？）该实验中这些试剂各起什么作用？（2）举出一种可以鉴定所提取基因组的）举出一种可以鉴定所提取基因组的DNA中是否残中是否残 留有留有RNA的方法。的方法。EDT

41、A：络合金属离子（核酸酶的作用：络合金属离子（核酸酶的作用）氯仿氯仿-异戊醇：去蛋白、去苯酚异戊醇：去蛋白、去苯酚95%乙醇：沉淀乙醇：沉淀DNA鉴定核糖、用专一性的核酸酶鉴定核糖、用专一性的核酸酶u在分离和鉴定动物肝在分离和鉴定动物肝DNA 和和RNA 的实验中，下列的实验中，下列 化合物的作用是什么？化合物的作用是什么？A . 0.1M NaCl B. 5M NaClC. 0.1M Na2-EDTA 溶液溶液D .15SDS 溶液溶液 E .氯仿氯仿-异戊醇（异戊醇（24:1 溶液）溶液）不同浓度的不同浓度的 NaCl溶液中溶液中DNA 和和RNA 溶解度不同溶解度不同在在0.1MNaCl

42、 溶液中溶液中RNA 溶解溶解而而DNA 溶解度低，溶解度低，在在5MNaCl中中DNA 的溶解度大的溶解度大于于RNASDS（十二烷基硫酸钠）、（十二烷基硫酸钠）、EDTA为核酸酶抑制剂为核酸酶抑制剂EDTA：将核酸酶的激活剂：将核酸酶的激活剂Mg2+络合络合SDS: 可使核蛋白体解离，使蛋白质变性可使核蛋白体解离，使蛋白质变性氯仿氯仿-异戊醇使蛋白质变性异戊醇使蛋白质变性p可用于测量生物样品中核酸含量的元素是可用于测量生物样品中核酸含量的元素是( )。 A碳碳 B氢氢 C氧氧 D磷磷 E氮氮p核酸对紫外线的最大吸收峰在哪一波长附近？核酸对紫外线的最大吸收峰在哪一波长附近？A280nm B2

43、60nm C200nm D340nmp在核酸结构中含量较稳定的元素是在核酸结构中含量较稳定的元素是A. C B. H C. O D. N E. Pp关于核酸的叙述，正确的有（关于核酸的叙述，正确的有（ ）。）。A.是生物大分子是生物大分子 B.是生物信息分子是生物信息分子C.是生物必需营养是生物必需营养 D.是生物遗传是生物遗传的物质基础的物质基础p下列含有下列含有DNA的细胞器是（的细胞器是（ ）。）。A. 线粒体线粒体 B. 内质网内质网 C. 高尔基体高尔基体 D. 核糖体核糖体p碱基与戊糖间为碱基与戊糖间为C-C连接的是连接的是 （ ）。）。A.腺嘌呤核苷腺嘌呤核苷 B.胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷 C.鸟嘌呤核苷鸟嘌呤核苷 D.假尿