微生物基础技术第七章 菌种保藏

1、第七章 菌种保藏十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材技术节点1 菌种保藏技术一、菌种的衰退和复壮衰退：是指由于自发突变的结果，而使某物种一系列生物学性状发生量变或质变的现象。衰退的现象：(1)原有的形态性状变得不典型2)生长速度变慢，产生的孢子减少3)代谢产物生产能力下降4)致病菌对宿主侵染国的下降5)对外界不良条件抵抗能力的下降十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术防止衰退有这么几个注意的方面：1、控制传代次数：即：尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，这样可以减少自发突变的几率。Pl.、作酸奶，可买试管培养物，用前先

2、活化。传代2-3次。取出一部分用于生产。剩下的在半固体培养基上培养，可保存一个月再传代。2、创造良好的培养条件和生理环境 在实践中，有人发现如创造一个适合原种的生长条件（如温度、培养基、营养物质）就可在一定程度上防止菌种衰退。十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术3）最好采用休眠体（芽孢、霉菌的或为分生孢子）进行传代，避免繁殖体进行传代。4）采用有效的菌种保藏方法十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术微生物的变异是绝对的，如果变异是朝着不利于生产的方向发展，则表现为菌种的衰退。生产中菌种的衰退是经常发生的，菌种的衰退在细胞

3、群体中是一个由量变到质变的过程。一个优良的菌种在一代代的传代中，发生质变的个体比例逐渐增大并占有一定优势。从而使整个群体表现出严重的衰退。但其中也有少数尚未衰退的个体存在，所以衰退的菌种是可以复壮的。十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术对菌种进行复壮的方法主要有：1、纯种分离 通过纯种分离，可把退化菌种的细胞群体中一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出来，经过扩大培养，就可恢复原菌株的典型性状。如：平板划线、涂布或显微操纵器。十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术2、通过宿主体内生长进行复壮 对于寄生性微生物的退化菌株可

4、通过接种至相应的昆虫或动、植物体内来提高它们的致病性。例如：经长期人工培养的Bacillus thuringiensis，会发生毒力减退和杀虫率低等现象，这时，可将已衰退的菌株去感染菜青虫等幼虫（相当于一种活的选择性培养基），然后可从病死的虫体内分离出典型的产毒菌株，反复进行多次，可提高菌株杀虫效率。3、淘汰已衰退的个体。为了防止菌种衰退，菌种的保藏就显得尤为重要。十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术二、菌种保藏的目的、原理菌种保藏的具体方法很多，原理却大同小异。菌种保藏原理：选用典型菌种的优良纯种或休眠体（如分生孢子、芽孢等），创造有利于休眠的环境条件，

5、如低温、干燥、缺氧、避光、缺乏营养以及保护剂或酸度中和剂等。菌种保藏目的：达到不死、不衰、不乱，便于研究、交换和使用等目的。十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术三、菌种保藏的方法、注意事项1、低温保藏： 常用，冰箱4-5微生物的代谢活动很低，可短时间保存。也可在-85进行快速冷冻，有时需加甘油或保护液，如脱脂乳（脱脂奶粉10g+90ml等）如果冷冻速度慢，会形成大的冰晶对细胞有损伤。另：-196，液氮保存，必须加保护剂，除脱脂乳外，另加二甲亚矾+谷氨酸钠。但：-85的冰箱比较贵，一般企业不合算，液氮需经常换。十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规

6、划教材第一节 菌种保藏技术2、隔绝空气保藏：一般用灭菌石蜡油或在试管口用橡皮塞密封。3、干燥法保藏： 主要断绝微生物的水分和营养，把微生物接种到一个载体上。这个载体可以是土壤或细砂、纸片，然后经过干燥、密封后保藏，最常用的砂土保藏法。这种方法既简单又有效，最适于产孢子的微生物。十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术4、真空冷冻干燥保藏法：需要加保护剂，最多用的是脱脂乳。具体方法： 培养13代离心收集菌体，洗涤13次 混匀 分装到小安瓶中 放在-198液氮速冻 真空干燥机上干燥，一般在50十二五十二五“职业教育国家规划教材职业教育国家规划教材第一节 菌种保藏技术 方方 法法 主要措施主要措施适宜菌种适宜菌种保藏期保藏期评价评价冰箱保藏法（斜面）低温4各大类约16月简便冰箱保藏法（半固体)低温4 ，避氧细菌、酵母约612月简便石蜡油封藏法低温4 ，阻氧各大类约12年简便甘油悬液法低温70，保护剂