肠道病原菌的分离与鉴定一ppt课件

1、肠道病原菌的分别与鉴定一肠道病原菌的分别与鉴定一l培育基的制备及常用培育基培育基的制备及常用培育基l细菌的培育法细菌的培育法l EMB培育基的制备培育基的制备l 肠道病原菌的分别与鉴定一肠道病原菌的分别与鉴定一l血清学检测血清学检测-肥达氏反响肥达氏反响培育基的制备培育基的制备(一一)肉汤培育基肉汤培育基资料：鲜牛肉、蛋白胨、氯化钠、资料：鲜牛肉、蛋白胨、氯化钠、pH试纸、试纸、10碳酸氢钠、试管、碳酸氢钠、试管、三角烧瓶、蒸馏水等。三角烧瓶、蒸馏水等。方法方法 1将新颖牛肉将新颖牛肉500g切碎或搅碎，加水切碎或搅碎，加水1000ml，放，放4冰箱或冷冰箱或冷处浸泡过夜，然后煮沸处浸泡过夜，

2、然后煮沸30min，放凉，使剩余的脂肪凝固，再，放凉，使剩余的脂肪凝固，再用绒布或滤纸过滤，将滤液补足为原量。用绒布或滤纸过滤，将滤液补足为原量。 21000ml肉水中肉水中参与蛋白胨参与蛋白胨10g、氯化钠、氯化钠5g，加热溶解。，加热溶解。 3用精细用精细pH试纸测酸碱度，用试纸测酸碱度，用10碳酸氢钠校正碳酸氢钠校正pH为为7.2左左右。过碱时，可用右。过碱时，可用10醋酸校正之。醋酸校正之。 4分装于试管中或三角烧瓶中，分装于试管中或三角烧瓶中，15磅磅(121)高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌2030min。 高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器(二二)普通琼脂培育基普通琼脂培育基资料：肉水、蛋白胨

3、、氯化钠、琼脂、无菌平皿、灭菌试管、资料：肉水、蛋白胨、氯化钠、琼脂、无菌平皿、灭菌试管、三角烧瓶等。三角烧瓶等。方法方法 1按上记数量把肉水、蛋白胨、氯化钠和琼脂放到三角烧按上记数量把肉水、蛋白胨、氯化钠和琼脂放到三角烧瓶中，加热溶化。瓶中，加热溶化。 2用用pH试纸测酸碱度，用试纸测酸碱度，用10碳酸氢钠校正碳酸氢钠校正pH为为7.2左右。左右。 315磅高压蒸气灭菌磅高压蒸气灭菌2030min。 4趁热将溶化的培育基倒入灭菌平皿内，每个平皿倒入约趁热将溶化的培育基倒入灭菌平皿内，每个平皿倒入约15ml，凝固后即成普通琼脂平板培育基；如趁热将培育基倒，凝固后即成普通琼脂平板培育基；如趁热将

4、培育基倒入灭菌试管内，再将试管斜放实验台上，凝固后即成普通琼入灭菌试管内，再将试管斜放实验台上，凝固后即成普通琼脂斜面培育基。脂斜面培育基。(三三)血液琼脂培育基血液琼脂培育基 有些细菌其营养要求较高，在普通琼脂有些细菌其营养要求较高，在普通琼脂培育基上生长不良，可用血液琼脂培育基进培育基上生长不良，可用血液琼脂培育基进展培育。展培育。资料资料 普通琼脂培育基普通琼脂培育基 血液血液(脱纤维羊血或兔血脱纤维羊血或兔血) 方法方法 1加热溶化普通琼脂培育基。加热溶化普通琼脂培育基。 2待冷至待冷至50左右时，参与无菌的脱纤维左右时，参与无菌的脱纤维血液，混匀血液，混匀(留意勿使产生泡沫留意勿使产

5、生泡沫)。 3分注于灭菌试管或平皿中制成血斜面和分注于灭菌试管或平皿中制成血斜面和血平板培育基。血平板培育基。E.M.B琼脂培育基的制备琼脂培育基的制备l成分成分l 蛋白胨蛋白胨 10gl 磷酸氢二钾磷酸氢二钾 2gl 琼脂琼脂 20gl 乳糖溶液乳糖溶液(20) 50mll 伊红溶液伊红溶液(2) 20mll 美蓝溶液美蓝溶液(0.5) 20mll 蒸馏水蒸馏水 1000mll制法制法l 将蛋白胨和磷酸氢二钾加温溶化于蒸馏水中将蛋白胨和磷酸氢二钾加温溶化于蒸馏水中l 校正校正pH值为值为7.6参与琼脂参与琼脂l 煮沸溶化过滤后分装三角瓶中，每瓶定量分装煮沸溶化过滤后分装三角瓶中，每瓶定量分装

6、l 15磅磅30min高压灭菌高压灭菌l 以无菌操作法按量参与经以无菌操作法按量参与经10磅磅20min高压灭菌的乳糖、伊红美高压灭菌的乳糖、伊红美兰液，混匀后倾注平皿备用。兰液，混匀后倾注平皿备用。E.M.B培育基培育基l原理原理l 大肠杆菌能分解乳糖产酸，使培育基大肠杆菌能分解乳糖产酸，使培育基pH值下降，值下降，伊红与美蓝相结合成一种复合物，酸性环境中，菌伊红与美蓝相结合成一种复合物，酸性环境中，菌体带正电，易与伊红结合，故菌落呈紫黑色或紫红体带正电，易与伊红结合，故菌落呈紫黑色或紫红色，并有金属光泽。碱性环境中伊红与美蓝不结合，色，并有金属光泽。碱性环境中伊红与美蓝不结合，病原菌不分解

7、乳糖，不产酸故菌落为无色半透明。病原菌不分解乳糖，不产酸故菌落为无色半透明。其次，伊红、美蓝有抑制革兰氏阳性菌生长的作用。其次，伊红、美蓝有抑制革兰氏阳性菌生长的作用。l用途用途l 用于分别肠道致病菌，是一种鉴别培育基。并用于分别肠道致病菌，是一种鉴别培育基。并有弱的选择作用。有弱的选择作用。肥达氏反响l肥达氏反响通常用知的伤寒杆菌肥达氏反响通常用知的伤寒杆菌“O、“H菌液和甲、菌液和甲、乙型副伤寒杆菌乙型副伤寒杆菌“H菌液与病人血清作定量凝集实验菌液与病人血清作定量凝集实验(试试管法管法)，以检测病人血清中有无相应抗体存在，根据抗体，以检测病人血清中有无相应抗体存在，根据抗体含量多少及增长情

8、况用于伤寒、副伤寒病的辅助诊断。含量多少及增长情况用于伤寒、副伤寒病的辅助诊断。l资料资料l 待检可疑伤寒病人血清待检可疑伤寒病人血清(1:10稀释稀释)l 诊断菌液：伤寒杆菌诊断菌液：伤寒杆菌“O (O)l 伤寒杆菌伤寒杆菌“H (OH)l 甲型副伤寒杆菌甲型副伤寒杆菌“H (PA)l 乙型副伤寒杆菌乙型副伤寒杆菌“H (PB)l 生理盐水生理盐水 l 吸管，小试管等。吸管，小试管等。 方法方法l本实验四人一组，每人取本实验四人一组，每人取6只小试管，排成一列，计四列只小试管，排成一列，计四列为一完好实验。分别标明每列管号和诊断菌液如为一完好实验。分别标明每列管号和诊断菌液如“O、“OH、“PA、“PB。按下表先向每管加生理盐水。按下表先向每管加生理盐水0.5ml，再加，再加10倍稀释病人血清倍稀释病人血清0.5ml于第于第l管，做顺序的管，做顺序的等倍稀释，最后参与等量的诊断菌液，充分混匀，置等倍稀释，最后参与等量的诊断菌液，充分混匀，置37 24h，再放室温，