食管癌术后联合放化疗对淋巴细胞亚群的影响

1、食管癌术后联合放化疗对淋巴细胞亚群的影响临床和实验区学杂志2011年3月第10畚第5期?353?食管癌术后联合放化疗对淋巴细胞亚群的影响朱静凌扬张长松朱长太(常州市肿瘤医院肿瘤实验室刘永萍董春雷孔颖泽江苏常州213001)【摘要】目的探讨食管癌术后放化疗对患者细胞免疫的影响.方法应用流式细胞仪定量检测73例食管癌患者外周血淋巴细胞亚群,共获取术后不同时间点的139份血样.结果术后不同治疗方法对淋巴细胞亚群的绝对和相对定量结果均有影响.CD4+,CD8+T细胞绝对数各组均有统计学差异,术后间期延长的患者呈现更低的CD4/CD8.放疗组对CD3+,CD4+和CD8+绝对数有影响.CIM+T细胞随术

2、后间期延长而降低,导致术后T细胞免疫功能失衡.结论术后联合治疗方式与CD4+T细胞相对定量相关,提示食管癌术后联合治疗可能选择性影响患者免疫功能.【关键词】食管癌联合化疗淋巴细胞亚群InfluenceofcombmpostoperativeradiOtherapyandchemotherapyonperipherallymphocytesubsetsinpatientswithesophagealsqua-mOllScellcarcinoma.ZHUng,LING,ZHANGChangsong,eta1.ClinicalOncologyLaboratory,ChangzhouTumorHosp

3、ital,Chang-zhouflanu213001,China.【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheinfluenceofpostoperativechemoand/orradiotherapyoncellularimmunityinpatientswithesophagealsquamouscellcarcinoma(ESCC).MethodsAtotalof139bloodsampleswereobtainedatdifferenttimepointsrelativetosurgeryfrom73patientswithESCC.PeripheralTl

4、ymphocytesubsetsinresponsetochemotherapy,radiotherapy,andcombinedchemotherapyandradiotherapywereanalyzedbyflowcytometry.ResultsChangesintheabsolutequantityandrelativeproportionsoflymphocytesubsetswereobservedamongdifferentadjuvanttherapygroups.ThereweresignificantdifferencesintheabsolutecountsofCD4+

5、andCD8+Tcellsamonggroups.andalowerCD4/CD8ratiowasfoundinpatientsreceivedadjuvanttherapylongaftersurgery.Compedwithothergroups,radiotherapyaloneshowedprofoundeffectontheabsolutecountofCD3+,CD4+,andCD8+Tcells.CD4+Tcelldecreasedwithtimeaftersurgeryandleadedtoapro-longedTcellimbalance.ConclusionThesefin

6、dingsconfirmaninteractionbetweenadjuvanttherapyandperipheralCD4+Tcells,andimplythatadjuvanttherapymayhaveselectiveinfluenceoncellularimmuneafterESCCsurgery.【Keywords】ESCC;Adjuvanttherapy;Lymphocytesubset人体免疫系统理论上具有保护机体免于肿瘤的功能,因为它可以早期监测并清除肿瘤细胞,或者保持肿瘤静息状态,同时肿瘤细胞也具有肿瘤免疫逃逸的功能,因此二者的平衡在肿瘤治疗中发挥重要作用¨J.

7、淋巴细胞亚群在肿瘤中扮演细胞免疫的重要功能,CD4+和CD8+T细胞介导机体细胞免疫功能_3J.食管癌是高度恶性肿瘤之一,手术,化疗,放疗是其主要治疗方式,能显着提高患者生存率l5J.食管癌术后放化疗可能导致T细胞免疫抑制,不同的治疗方式对于免疫功能的恢复有选择性影响_6J.为了解食管癌术后放化疗对患者免疫功能的作用机制,我们测定了不同治疗方式下患者外周血T淋巴细胞亚群的变化情况,其结果如下.1资料与方法1.1研究对象本研究食管癌患者共73例,均为20072009年常州肿瘤医院收治的术后住院患者,均经病理学检查证实.食管癌患者按术后治疗方式分为放疗组(RT)13例,化疗组(CT)43例和放化疗

8、联合治疗组(RT+CT)17例,其中男性51例,女性22例.组织学分类:分化良好15例(20.6%),中等分化45例(61.6%),分化差13例(17.8%).38例为II期,20例III期,15例IV期.资助:本研究受国家自然基金项目(81071799),常州市科技计划(CS2008214,C$20102021,CS20102022),常州市”831”人才工程和常州市卫生局”136”工程支持.1.2方法患者住院后采集外周血样,检测白细胞,分类计数和流式细胞仪分析.采取术后辅助治疗时必须满足白细胞>500/ixl和血小板>20000/txl.为减少分析误差,所有血样

9、标本均在上午8至9点采集.73例患者共收集不同时间点样本139个.白细胞总数检测使用Beckman公司的CoulterACTDiV分析仪.外周血T淋巴细胞亚群检测采用FACSCalibur流式细胞仪,使用双色免疫荧光流式SimuhestIMKLymphocyte试剂盒检测CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+和NK(CD3CD16+和/或CD56+)T淋巴细胞的相对及绝对计数.检测方法严格按照说明书操作.1.3统计学分析全部数据采用SPSS17.0统计软件进行分析.每个指标均采用中位数计算.两组间比较采用MannWhitneyU检验,多组间比较采用KruskalWallis检验.P&am

10、p;lt;0.05作为统计学差异检测水平.2结果2.1食管癌患者术后外周血T淋巴细胞亚群相对定量结果分析结果显示,T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,NK)相对定量均与术后治疗方式有相关性(P=0.001,P=0.O1,P=0.006和P=0037).放疗组中CD3+和CD8+百分比相对低于化疗及联合组.放疗组中NK百分比和CD4/CD8比率相对高于化疗及联合组.但是化疗组CD4十百分比相对高于放疗和联合组.化疗组和RT组比较,发现CD3+,CD4+,CD8+?354?JournalofClinicalandExperimentalMedicineVo1.10,No.5Mar.201

11、1和NK细胞百分比差异有统计学意义.CT组和联合组比较,发现CIN+细胞百分比和CD4/CD8比率差异有统计学意义.放疗组和联合组比较,发现CD3+,CD8+和CIM/CD8比率差异有统计学意义(表1).表l食管癌患者术后外周血T淋巴细胞亚群相对定量结果分析表注:.化疗组vs.放疗组;化疗组VS.联合组;放疗组VS.联合组,P<0.05.2.2食管癌患者术后外周血T淋巴细胞亚群绝对定量及白细胞总数结果分析结果显示,各治疗组问NK细胞和淋巴细胞总数差异没有统计学意义(P=0.291,P=0.130),但CD3+,CD4+,CD8+绝对数和WBC总数差异有统计学意义(P=0.001,

12、P=0.012,P:0.003和P=0.006).我们发现,RT组WBC总数高于CT组和联合组,但CD3+,CD4+及CD8+偏低的,提示放疗可能对T淋巴细胞亚群有抑制作用(表2).表2食管癌患者术后外周血T淋巴细胞亚群绝对定量及白细胞总数结果分析注:化疗组VS.放疗组;化疗组VS.联合组;放疗组VS.联合组,P<O.05.2.3食管癌患者T淋巴细胞亚群及白细胞总数与术后治疗时间相关性分析我们按照术后采血时间将病例分为5组:1组3个月,2组46个月,3组7l2个月,4组1324个月和5组>24个月.结果显示各组间CD3+,CD4+和CD8+百分比差异有统计学意义(P

13、=0.013,P=0.042和P=0.040),NK细胞在各组间差异有统计学意义(P=0.492,P=0.360),CD4/CD8比值呈现下降趋势(P=0.010).各组间CD4+,CD8+绝对数和WBC差异有统计学意义(P=0.015,P=0.030和P=0.005).除了WBC,>24个月组中所有T淋巴细胞亚群和红细胞(LBC)绝对数都低于其他组.结果提示,T淋巴细胞亚群随术后时间的延长而有下降趋势(表3,4).表3术后T淋巴细胞亚群相对定量随时间变化分析CI)4+(cells/)CD84-(eelL)NK(cells/)WBC(×lo9/i)LBC(X109/L)

14、430.4(286.5-509.3)261.2(172.4465.9)225.2(106.4391.3)5.4((1.01.7)351.7(281.3644.31336.3(27O.0N443.71214.8(114.8-301.5)4.2(3.260)1.3(0.91.8)406.3(194.2721.0)376.1(316.7524.9)228.8(82.1462.7)5.5(4.28.2)1.5(0.91.9)347.3(23O.5633.8)493.8(297.8757.9)323.3(198.8515.9)6.3((1.0-2.1)246.3(1

15、60.2335.1)d,g,O.015254.3(137.1426.5),O.Q30197.8(111.8317.4)0.3607.3(5.610.7d,g,O.0050.9(0.81.5)d,gO.070注:1组VS.2组;1组VS.3组;1组vs.4组;1组VS.5组;2组VS.4组;2组VS.5组;g3组vs.5组;4组VS.5组,P<O.O5.3讨论T细胞免疫在肿瘤预防和治疗中发挥重要作用,食管癌新辅助化疗引起T,NK和B细胞降低,导致机体免(下转第357页)临床和实验医学杂志2011年3月第10卷第5期?357?(上接第354页)疫功能紊乱J.虽然免疫在控制肿瘤生长和复

16、发方面仍存有争议,但有证据表明T细胞对于患者预后有益.本研究结果表明,T淋巴细胞亚群相对和绝对定量在食管癌患者术后治疗中变化显着,放疗组对CD3十,CIM+和CD8+绝对数影响最大,且CD3+,CD4+和CD8+相对数与术后时间关系紧密,各细胞亚群的恢复时间不一致.CD4/CD8比率降低与肿瘤负荷和差的预后相关.大多数肿瘤免疫集中于CD8+T细胞,最近证据表明CD4+T细胞在免疫反应中扮演重要角色,可能参与CD8+CTL细胞的作用,因此肿瘤免疫需要激活特异性CIM+T细胞9J.本研究发现术后患者免疫功能的失衡,特别是CD4+T细胞随着术后时间的延长而降低,可能导致患者术后长期的免疫功能紊乱.因

17、此CD4+T细胞可以作用作为食管癌患者术后免疫监测的指标之一.我们也发现NK细胞在不同治疗方式组和不同间期中差异没有显着性,暗示NK细胞在食管癌患者呈现静止状态,稳定地参与肿瘤免疫的作用.总之,分析食管癌患者术后的细胞免疫功能,对于术后放化疗方式的选择及监测是非常重要的.术后辅助治疗可能导致T细胞的失衡,降低CD4+细胞的功能,以致T细胞免疫功能低下的时间延长,不利于患者免疫功能的恢复.本研究结果提示,术后不同的辅助治疗方式对于肿瘤患者的免疫作用不相同,因此在临床治疗中因针对不同的患者,不同间期的治疗采取相应的免疫治疗,以此增强患者的免疫功能,延长术后食管癌患者的生存期.参考文献1Koebel

18、CM,VermiW,SwannJB,eta1.AdaptiveimmunitymaintainsoccultcancerinanequilibriumstateJ.Nature,2007,450(7171):903907.2KimR,EmiM,TanabeK.CancerimmunoeditingfromimmunesuroveillancetoimmuneescapeJ.Immunology,2007,121(1):114.3KnutsonKL,DisisML.TumorantigenspecificThelperceilsincanc-erimmunityandimmunotherapyJ

19、.CancerImmunolImmunother,2005,54(8):721728.4IJinDC,DuXL,WangMR.ProteinalterationsinESCCandclinicalimplications:areviewJ.DisEsophagus,2009,22(1):920.5KleinbergL,ForastiereAA.Chemoradiationinthemanagementofe-sophagealcancerJ.JClinOncol,2007,25(26):41104117.6KangDH,WeaverMT,ParkNJ,eta1.SignificantimpairmentinimmunerecoveryaftercancertreatmentJ.