实验五 荧光显微镜的使用和细胞的荧光染色_第1页
实验五 荧光显微镜的使用和细胞的荧光染色_第2页
实验五 荧光显微镜的使用和细胞的荧光染色_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、实验五 荧光显微镜的使用和细胞的荧光染色【实验目的】掌握荧光显微镜的原理和使用；掌握生物材料荧光染色的原理和应用。【实验原理】吖啶橙（acridine orange，AO）是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。其激发峰为492nm，荧光发射峰为530nm（DNA）、640（RNA），它与双链DNA的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。在蓝光（502nm）激发下，细胞核发亮绿色荧光（约530nm），核仁和胞质RNA发橘红色荧光（>580nm）。吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞

2、固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA、RNA两种核酸。【实验用品】1、 器材荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。2、 试剂（1）0.1mol/l pH7.0 PBS液A液：NaH2PO4·H2O 2.76g，加蒸馏水至100ml；B液：Na2HPO4·7H2O 5.36g，加蒸馏水至100ml；取A液16.5mlB液33.5mlNaCl 8.5g，用蒸馏水稀释至100ml。（2）1%吖啶橙原液取0.1g吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml（临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS溶液稀释10倍）。3、 材料口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。【方法与步骤】（1）取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。（2）95%乙醇溶液固定5min。（3）滴加0.01%吖啶橙染液5min。（4）盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。【结果与观察】荧光显微镜下（选用蓝色激发滤片），可见含DNA的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA的细胞质及核仁显示橘红色荧光体外培养的肝癌细胞吖啶橙荧光染色【注意事项】（1）制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。（2）每种荧光染料，均有自己的最适pH，此时荧光最强。当pH

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课设设计

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论