组合生物合成技术在聚酮类天然产物研究中的应用

1、28MOTOLAS,MOGAVEROA,AGESIMGR,etal1OrallyAdministrableIbuprofenCompositionsP1Can1Pat1Appl1CA1336819,1995208229129GRUBERP1Easytoswalloworalmedicamentcomposition:USPatent6,709,678P12004203223130SHONGYM,PINGQN1Developingtramadolresinfast2releasesuspen2sionJ1ChinPharmUnivJ(中国药科大学学报),2000,31(1):21131AGARW

2、ALR,MITTALR,SINGHA1StudiesofionexchangeresincomplexofchloroquinephosphateJ1DrugDevIndPharm,2000,26(7):7732776132GAOR,SHAOZJ,FANACL,etal1TasteMaskingofOralQuinoloneLiquidPreparationsUsingIonExchangeResins:USPatent,6,514,492P12003202204133RYUS1GranulerDrugCompositionforAnimal:JP03,101,619P.19912042201

3、34ROCKAWAYNJ,FLEMINGTONNJ,NEWTONNJ,etal1Multipleactioncold/sinuspreparations:USPatent,5,681,577P11997210228135HOUSG,WANGPY1Thepreparationofinclusioncompoundofraniti2dine22cyclodextrinJ1ChinPharmJ(中国药学杂志),1996,31(8):480136HUSSAINMA,AUNGSTBJ,KOVALCA,etal1Improvedbuccalde2liveryofopioidanalgesicsandant

4、agonistswithbitterlessprodrugsJ1PharmRes,1988,5:6152618137LIUXY,LIUYQ1Studyofamaskingmethodtodispelthebitternessofmacrolide2antibioticsanditsapplicationtoprescriptionsJ1PekingUnivJ(HealthSciences)(北京医科大学学报),1997,29(3):136138KINOSHITAY,SHIBUYAM1PreparationCompositionforSuppressingBitterness:JP,62,265

5、,234P11987211211139KASTURAGIY,KURIHARAK1SpecificinvitrobittertasteJ1Na2ture,1993,365(6443):2132214140DUONGHT,GUHHY,KOCY,etal1AHPLCassayforcoatingin2tegrityoftopiramatesprinkleformulationJ1JPharmBiomedAnal,2002,29(122):69274141SALAZARDE,SAAVEDRAM,SAAVEDRAC1Applicationofasenso2rialresponsemodeltothede

6、signofanoralliquidpharmaceuticaldosageformJ1DrugDevIndPharm,2000,26(1):55260142NAKAMURAT,TANIGAKEA,MIYANAGAY,etal1Theeffectofvarioussubstancesonthesuppressionofthebitternessofquininehumangustatorysensation,binding,andtastesensorstudiesJ1ChemPharmBull(Tokyo),2002,50(12):1589215931(收稿日期:2005207225)赵文英

7、1,2,顾谦群13,朱伟明1(11,山东青岛266003;21青岛科技大学化工学院,山东青岛,266042)摘要:目的,展望该技术的广阔应用前景。方法检索近几年的文献资料进行分析归纳。组合生物合成技术对先导化合物结构改造和合成非天然的“天然产物”具有重要意义。关键词:组合生物合成;聚酮类;天然产物中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1001-2494(2006)19-1448-05抗生素耐药性及化疗药物毒副作用的存在,促使人们不断发现新的抗生素类药物。但从天然产物中寻找活性强、毒性低的抗生素变得越来越困难。因此,科学家求助组合生物合成技术合成新的“天然产物”用于新药的发现。组合生物合成

8、技术通过对抗生素或其他“天然产物”生物合成途径中的合成酶基因的操纵,实现对先导化合物结构改造和合成非天然的“天然产物”。在天然产物尤其是聚酮类化合物(polyketides,PKs)生物合成的研究中,组合生物合成技术大有生物化学和分子遗传学研究表明,聚酮生物合成途径中的聚酮合酶(polyketidesynthases,PKSs)与合成长链脂肪酸的脂肪酸聚合酶(FASs)在结构和作用机制上具有相似性5。它们都是多功能酶,催化酰基硫酯缩合,生成各种长度的碳链。不同在于脂肪酸的2C会发生完全的还原,而聚酮合成可以省略某些或全部缩合后反应。聚酮合酶由于所选择的起始单元和延伸单元的不同,缩和后对2C的修

9、饰程度不同以及手性碳的立体化学和环化的部位专一性不同使聚酮化合物具有结构多样性的特征。近年研究还发现,聚酮合酶基因组非常保守,不同聚酮合酶的DNA序列间有很大的相似性。因此,通过合理设计聚酮合酶有可能产生出新的聚酮化合物,这也是科学家对聚酮生物合成感兴趣的原因。2聚酮生物合成酶的特点作为122。聚酮化合物在次级代谢产物中是最大的一类,包括大环内酯、四环类、蒽醌类和聚醚类在内的许多化合物均属于这个大家庭。由于这些化合物在抗感染、抗肿瘤、抗真菌、免疫抑制等方面的巨大应用价值,因此,吸引了各国科学家对该类化合物生物合成途径进行深入的研究,以期获得利用基因工程方法改造和合成聚酮化合物的资料325。1聚

10、酮类化合物生物合成的特点随着生物技术的发展,大量聚酮合成酶的基因被克隆,研究结果显示,聚酮合成主要由两类酶催化,分为和型。2.1型聚酮合成酶的作用基金项目:国家自然科学基金资助项目(No130472136&30470196);国家863项目基金(No12003AA624020)作者简介:赵文英,女,博士研究生3通讯作者:顾谦群,女,教授,博士生导师Tel:(0532)82032065E2mail:guqiangqChinPharmJ,2006October,Vol141No1191448中国药学杂志2006年10月第41卷第19期型PKSs是大分子多功能蛋白(Mr>150000)

11、,主要催化合成复杂的聚酮化合物,包括大环内酯类、利福霉素类(含内酯、内酰胺结构)、多烯类、聚醚类等。它的结构类似一条装配流水线“,装配线”上的酶是按“组块”的形式组合在一起,每一组块催化聚酮链延长一个单位,因此型PKSs又称为组合式PKS。每一个组块又可再细分为单一“结构域”,每一结构域有一种功能,可催化缩合或还原反应。即功能性结构域组成了组块,组块连接在一起组成酶,酶作为一个模板用来负载和缩合单体,组块或结构域与产物结构之间存在着一一对应的关系,见图13,629。因此,了解组块和结构域的DNA序列,可以从已知天然产物的结构推测出“装配线”的组acids,teracenanycins等,这些化

12、合物在结构上虽然有很大的区别,但它们都是由型PKSs催化生成的。与型PKSs不同之处在于,型PKSs是1个多酶复合物,见图25,12214,每个PKS都含有一组重复使用的独立蛋白,也称作minimalPKS,它包括KS,AT,CLF,ACP3个亚基(其中KS,AT在同一亚基上),这是聚酮合成所必需的,用于构建1个未经修饰的聚酮链(高度活泼的线性聚酮2酮酰基硫酯)。另外每个PKS还有几个大的多功能蛋白,用于还原(酮基还原酶KR催化)和环化(环化酶CYCT和芳香酶ARO催化)新生成的聚酮链。因为每个型PKSs只含有1组mininalPKS及少量修饰酶,每个催化亚基是重复使用的。因此,从型PKSs的

13、DNA序列推测出芳香聚酮的结构非常困难,也不能直接设计芳香聚酮的分子结构。尽管存在着这样的困难,近几年在合理设计芳香聚酮化合物方面,还是取得了巨大的进步。通过重组芳香PKSs,把活性亚基与产物结构对应起来,提出以预测方10,15218式生产芳香聚酮化合物的“设计规则”。根据“设计规成,反之亦然。这种组块的组合方式也使人们尝试构建非天然合成酶,用于合成一些新的化合物10211。2.2型聚酮合成酶的作用型PKSs主要是催化合成芳香聚酮化物,因此又称芳香PKSs。目前已发现的多环芳香聚酮化合物有500多个,它们在结构上主要属于四环类,angucyclines,蒽环类,aureolic则”,可以设计出

14、所需要的聚酮化合物15,19222。图1型PKSs的结构62dEB聚合酶由DEBS1,2和3组成,每个DEBS由两个组块组成,每个组块包含有催化缩合的活性亚基;酰基转移酶(AT),2酮酰基载体蛋白合成酶(KS)和酰基载2酮基还原酶(KR),脱水酶(DH)和烯酰还原酶(ER)。反应完成后,硫酯酶(TE)负责聚酮链从酶上解离体蛋白(ACP),同时有还原性活性亚基Fig1ModularpolyketidesynthasesDEBSpolyketidesynthaseassemblyincludesthethreemultifunctionalproteinsDEBS1,2and3,eachofwhi

15、chcomprisestwomodules1Eachmodulecontainsafullcomplementofsitesrequiredforonecondensation,anacyltransferase(AT),2ketoacylcarrierproteinsynthase(KS)andanacylcarrierprotein(ACP),alongwithasubsetofreductiveactivesites2ketoreductases(KR),dehydratase(DH)andenoylreductase(ER)1Afterthefinalcondensationandre

16、duction,thethioesterase(AT)cleavesthepolyketidechainfromtheenzyme图2型PKSs的结构minimalPKS包括酮基合成酶(KS),酰基载体蛋白(ACP),链长因子(CLF),酰基转移酶(AT),酮基还原酶(KR),芳香化酶(ARO),环化酶(CYC)Fig2Aromaticpolyketidesynthases2ketoacylsynthase(KS),achainlengthfactor(CLF),anacylcarrierprotein(ACP)andanacyltransferase(AT);ketoreductases(K

17、R);aromatases(ARO);minimalPKSincludingacyclases(CYC)3应用组合生物合成方法生成新的聚酮化合物然产物。常用的方法主要包括以下两种。3.1定点突变由于PKSs结构和功能上特点,研究人员尝试把聚酮生物合成途径中的催化酶进行不同方式的组合,以获得新的天中国药学杂志2006年10月第41卷第19期定点突变即采用失活、取代等方法,对PKSs中的单一结ChinPharmJ,2006October,Vol141No1191449构域进行修饰。实验证明,组合式PKSs对非天然PKSs底物专一性松弛23,下游活性位点对不正常的聚酮中间体有一定的容忍性,人工设计的

18、组块能最大限度的保持其结构完整性。如对红霉素产生菌糖多孢红霉菌(Saccharopolysporaery2thraea)DEBS基因的组块5的酮基还原酶结构域的缺失诱变不同来源的组块合理设计,形成杂合PKSs,合成出新的大环聚酮类化合物,活性检测发现,这些新的化合物均有细胞生长抑制作用。Rowe等31在DEBS中插入了一个生产雷帕霉素的PKSs中的一个组块,最终生成了一个新的碳链延长的八聚酮类化合物。Laine等32将Streptomycesgalilaens菌株中生成多柔比星的基因与来自同一属的S1nogalater和S1pur2purascens的基因组合在一起,新生成的化合物中,S251

19、3,产生了可预见到的52氧262脱氧红霉内酯;用外源性酰基转移酶取代组块6中的酰基转移酶导致期望的22去甲基262脱氧红霉内酯的产生;另外,在一个或多个碳中心同时引入多点突变,也能产生新的大环内酯24。Mendes等25将抗真菌抗生素pimaricin生物合成途径中的PimD基因敲掉,使pimaricin4,5位的环氧变成双键,虽然其抗真菌活性有所降低,但对酸S2526,S25123个化合物在体外有细胞毒活性,其中S2512在体外对所有的细胞系都有显著的活性。S2513在体内对小鼠白血病和实体瘤有活性。Tang等33利用杂合的双组块PKSs合成新的芳香聚酮,同时通过干扰下游辅助酶或加入非天然氨

20、基酸的方法合成了一系列有生物活性的anthraquinone类似物。另外,生成的聚酮化合物还可以通过“post2PKS”酶,如糖苷化酶、甲基转移酶、酰基转移酶和氧化酶等修饰,进一步增加结构多样性。研究发现,大多数有活性的化合物都是在苷元上连有不同的糖,而聚酮类抗生素生物合成途径中的糖基转移酶对底物专一性松弛34236,还可以用基因工程的Streptomycesvenezulackdes基因组引strM基因,能生成一个连有L2鼠李糖的新的大环内酯化合物38。Wohlert等39将携带有elloramycin基因串的质粒转移入生成urdamycin、oleandomycin和mithramycin

21、的菌株中,生成新的糖苷衍生物:它们的苷元都是由elloramycin基因生成的,糖部分由母体菌株生成。Trefzer等40用lan2domycin生物合成途径中的糖基转移酶(lanGT1和lanGT4)在Streptomycesfradias突变株中生成几种新的urdamycin衍生物,碱稳定性升高,毒性下降。抗癌药物chramumycinA3是一种芳香聚酮,Menéndez等26通过干扰其生物合成途径中负责编码侧链还原反应的聚酮还原酶CmmWI基因,生成3个新的chramumycin衍生物,它们的抗肿瘤活性因侧链不同而有所差别。张部昌等27在糖多孢红霉菌染色体上敲掉了红霉素合成基因

22、中的KR6区域,构建了糖多孢红霉菌M,该菌株可合成自然界中从未发现的酮内酯类化合物:32脱氧232羰基2红霉内酯B。张晓琳28对阿维链霉菌中的产高毒性寡霉素的基因簇(olmA)进行了缺失处理,所得突变株不再产生寡霉素而仅产阿维菌素B组分,该突变株性状稳定,有应用价值。另外,物类似物。KinoshitaDEPKSs,类似物。这些结果表明,产物的类似物方面拥有巨大的潜力,同时也说明在组合式PKSs的还原部位实行“功能获得”突变的可行性。但在实际生产中,大多数情况下,蛋白质的突变会导致在体内“生产率”的降低,因此又提出另一种组合生物合成方法。3.2构建杂合PKSs他们是landomycin和urda

23、mycin杂和的寡糖抗生素。综上所述,这种组合生物合成的方法对有潜在药理活性的化合物具有重要的意义。首先,可以提高产率低的化合物的分子产量,增加组合生物合成方法的文库容量。其次,提供了1个生成结构类似的杂合聚酮的有效途径。如142和162元大环内酯抗生素(erythromycin,picromycin和tylosin),聚这种方法基于催化合成相似结构化合物的PKSs的基因序列相似,而且他们催化生成的中间体也相似,因此一种PKSs的组块很有可能识别和有效催化其他结构相关化合物的中间体,这样PKSs中的某一亚基可以用其他来源的PKSs亚基代替。把不同来源的组块或蛋白质亚基组合在一起,形成杂合PKS

24、s,可以保持天然蛋白亚基的保守序列,减少定点突变引起的结构缺陷,与前一种方法相比,可以获得高产率的“非天然”大环内酯类化合物。现在,利用基因工程可获得许多不同来源的PKSs的组块和亚基,而取代功能组块的试验已经证明,单独1个或一组组块也能作为操纵功能单元用以构建杂合聚酮化合物。如DEBS由3个多功能蛋白6个组块组成,如果把DEBS1与硫酯酶(thioesterase,TE,作用是催化聚酮链环化成内酯)结构域连在一起,会产生1个三酮内酯8,说明DEBS1+TE能识别一系列非天然的起始单元和相关的中间体并把它们转化为三酮化合物。同样,把组块6下游的ACP2TE双功能域结合到组块5上,会产生一个12

25、元的内酯酮7。Yoon等30将PikPKSs,TylPKSs,DEBSPKSs3种ChinPharmJ,2006October,Vol141No1191450酮类免疫抑制剂(FK506,FK520和rapamycin)等。4结论作为一个酶系,PKSs证明自然界可以通过搭建积木的方式生成有机分子,产生分子多样性。和催化复制、转录、翻译的多酶体系不同(它们的多样性缘于组块模板的多样性),PKSs体系的蛋白质催化剂本身就是以组块的形式存在,这种在酶水平所固有的组块化可以通过组合生物合成来开发。在最近五年,用PKSs组合生物合成生产新的化合物已从起步阶段成为有经验科学家的一项日常工作。现在已有200多

26、个新的聚酮化合物,这些化合物大部分很难或不可能通过目前常用的方法获得,这证明组合生物合成是一个很有前途的技术,它提供了一个发现新化合物和结构修饰的方法。而Yadav等41又引入计算机辅助预测功能域组成和组块的底物专一性,并建成了一个计算机数据库,可用来鉴定由非特中国药学杂志2006年10月第41卷第19期征性PKSs生物合成的聚酮产品,大大加快了用合理设计方法合成新的聚酮化合物的步伐。目前,随着对结构、作用机制和分子特征之间关系的进一步了解,国内外许多研究院、所正投入大量人力、物力致力于用组合生物合成的方法生产出自然界不常见的新的天然化合物。REFERENCES1FLOSSHG.Combina

27、torialbiosynthesispotentialandproblemsJ.JBiotechnol,2006,124:242225712GANESANA.NaturalproductsasahuntinggroundforcombinatorialchemistryJ.CurrOpinBiotechnol,2004,15:5842590.3RODRIGUEZE,MCDANIELR.Combinatorialbiosynthesisofantimi2crobialsandothernaturalproductsJ.CurrOpinMicrobiol,2001,4:5262534.4LALR,

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29、etidesJ.CurrOpinMicrobiol,1998,9(4):4032411.7KAOCM,LUOGL,KATZL,etal.ManipulationofmacrolideringsizebydirectedmutagenesisofamodularpolyketidesynthaseJ.JAmChemSoc,1995,117:910529106.8KAOCM,LUOGL,KATZL,etal.EngineeredbiosynthesisofatriketidelactonefromanincompletemodularpolyketidesynthaseJ.JAmChemSoc,1

30、994,116:11612211613.9KEAEINGTA,WALSHCT.,strategiesinJ.CurrOpinMicrobiol210WENZELSC,MR.Recentdevelopmentstowardstheheterolo2gousexpressionofcomplexbacterialnaturalproductbiosyntheticpath2waysJ.CurrOpinBiotechnol,2005,16:5942606.11WENZELSC,MLLERR.Formationofnovelsecondarymetabolitesbybacterialmultimod

31、ularassemblylines:deviationsfromtextbookbiosyntheticlogicJ.CurrOpinChemBiol,2005,9:4472458.12MCDANIELR,EBERT2KHOSLAS,HOPWOODDA,etal.RationaldesignofaromaticpolyketidenaturalproductsbyrecombinantassemblyofenzymaticsubunitsJ.Nature,375(15):5492554.13YUTW,SHENYM,MCDANIELR,etal.Engineeredbiosynthesisofn

32、ovelpolyketidesfromStreptomycessporepigmentpolyketidesynthaseJ.JAmChemSoc,1998,120(31):774927759.14PIELJ,HERTWECKC,SHIPLEYP,etal.Cloning,sequencingandanalysisoftheenterocinbiosynthesisgeneclusterfromthemarineiso2lateStreptomycesmaritimus:evidenceforthederailmentofanaro2maticpolyketidesynthaseJ.ChemB

33、iol,2000,43:1213.15MCDANIELR,EBERT2KHOSLAS,HOPWOODDA,etal.Engi2neeredbiosynthesisofnovelpolyketides:manipulationandanalysisofanaromaticpolyketidessynthasewithunprovencatalyticspecificitiesJ.JAmChemSoc,1993,115:11671211675.16MCDANIELR,EBERT2KHOSLAS,HOPWOODDA,etal.Engi2neeredbiosynthesisofnovelpolyket

34、ides:actandactgenesencodearomataseandcyclaseenzymes,respectivelyJ.JAmChemSoc,1994,116:10855210859.17FUH,EBERT2KHOSLAS,HOPWOODDA,etal.Engineeredbiosynthesisofnovelpolyketides:dissectionofthecatalyticspecificityoftheactketoreductaseJ.JAmChemSoc,1994,116:416624170.18SHENB,SUMMERSRG,WENDT2PIENKOWSKIE,et

35、al.TheStreptomycesglancescenstcmKLpolyketidesynthaseandtcmNpolyketidecyclasegenesgovernthesizeandshapeofaromaticpolyketidesJ.JAmChemSoc,1995,117:681126821.19MCDANIELR,HUTCHINSONCR,KHOSLAC,etal.Engineeredbiosynthesisofnovelpolyketides:analysisofTcmNfunctionintetra2cenomycinbiosynthesisJ.JAmChemSoc,19

36、95,117:680526810.20KRAMERPJ,ZAWADARJX,MCDANIELR,etal.Rationalde2signandengineeredbiosynthesisofanovel182carbonaromaticpolyke2tideJ.JAmChemSoc,1997,119(4):6352639.21BRNKERP,MCKINNEYK,STERNERO,etal.Isolationandchar2acterizationofthenaphthocyclinonegeneclusterfromStreptomycesare2naeDSM40737andheterolog

37、ousexpressionofthepolyketidesynthasegenesJ.Gene,1999,227:1252135.22APARICIOJF,FOUCESR,MENDESMV,etal.Acomplexmul2tienzymesystemencodedbyfivepolyketidesunthasegenesisinvolvedinthebiosynthesisofthe262memberedpolyenemacrolidepimaricininStreptomycesnatalensisJ.ChemBiol,2000,7(11):8952905.23PIEPERR,LUOGL,

38、CANEDE,etal.Remarkablybroadsubstratespecificityofamodularpolyketidesynthaseinacell2freesystemJ.JAmChemSoc,1995,117:11373211374.24TANGL,FUH,MCDANIELR.Formationoffunctionalheterologouscomplexesusingsubunitsfromthepicromycin,erythromycinandolean2domycinpolyketidesynthasesJ.ChemBiol,2000,7:77284.25MENDE

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40、signofovelchromomycinanalogsJ.Chem,2004,11:21232.27ZHANGC,HG,etal.ConstructionofSac2novelketolide32deoxy232oxo2BJBiotechnol,2002,18(2):1982203.28L.Geneticmanipulationofpolyketidesynthasegenesinstreptomycesavermitilis(阿维链霉菌中聚酮合酶基因的遗传改造)D.Beijing:ChinaAgriculturalUniversity,2004.29KINOSHITAK,PFEIFERBA

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46、icationondihy2drostreptosebiosynthesisJ.JAmChemSoc,2000,122:12397212398.中国药学杂志2006年10月第41卷第19期(下转第1471页)ChinPharmJ,2006October,Vol141No1191451心肌细胞排列紧密,横纹清晰,核居中,间质可见血管扩张,未见炎细胞浸润,无心肌间质水肿,无出血。21312电镜观察结果假手术组心肌细胞膜完整,线粒体膜完整,嵴致密,基质颗粒均匀(图1A)。溶剂对照组细胞水肿,部分心肌细胞膜局部破裂;线粒体分布紊乱、肿胀,外膜破损,嵴减少、排列紊乱、模糊不清、甚至断裂消失,基质减少,线

47、粒体内大片空化(图1B)。冠心丹参片100mgkg-1组心肌线粒体改变明显轻于溶剂对照组,心肌细胞膜无破裂,肌原纤维完整有序;线粒膜完整,嵴致密,基质密度变淡,局部出现空化区域(图1C)。冠心丹参片200mgkg-1组心肌细胞膜无破裂,肌原纤维完整有序;线粒体体膜完整,嵴致密,基质颗粒均匀(图1D)。脉流量,改善微循环,抑制血小板聚集,抗心律失常和抗血栓形成等。本实验证实大鼠冠心丹参片灌胃抗心肌缺血再灌注损伤作用,提示冠心丹参片不仅可用于治疗和预防心绞痛,对于预防和治疗心肌缺血再灌注损伤也有积极的治疗价值。目前认为,心肌缺血再灌注过程中,再灌注对心肌的损伤比缺血期更为严重,这种损伤主要与心肌细

48、胞内Ca2+超载有关4。有研究表明,丹参阻止Ca2+内流,减轻Ca2+超载,减少ATP的分解,能够减少缺血心室肌细胞APD不均一性以及缓解此时出现的Ca2+超载现象,因而可能减少因折返或自律性增高所导致的心律失常的发生5。丹参具有ATP敏感钾通道的开放作用,但丹参是否具有开放线粒体或肌浆膜的ATP敏感钾通道作用尚待证实。目前线粒体可能成为保护心肌的药理学重要靶位2,冠心丹参片kg-,嵴。但该。本实验中大鼠冠心丹参片给药后MBP轻度降低可能与三七皂苷扩张外周血管,降低动脉血压有关,但降低血压一方面可降低心脏负荷,另一方面降压反射性引起交感兴奋,加上丹参本身通过抑制心肌细胞Na+,K+2ATP酶可能使心收缩力增强,心率加快,使心氧耗增加,这对冠心病病人不利,因此该方剂尚待进一步完善。REFERENCES1Ch1P(2000)Vol(中国药典2000年版1一部)S12000:5712SATOT,SASAKIN,SEHARASEYONJ,etal1Selectivepharma2cologicalagentsimplicatemitochondrialbutnotsarcolemmalKATPchannelsinischim