肌纤维内肌质网钙漏可能诱发肌钙蛋白抑制亚基降解

1、生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2009, 61 (3: 223-229223研究论文Received 2008-12-01 Accepted 2009-03-31This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 30770805.*Corresponding author. Tel: +86-29-84774807; E-mail: yuzhib肌纤维内肌质网钙漏可能诱发肌钙蛋白抑制亚基降解李 全,王云英,李 辉,焦 博,余志斌 *第

2、四军医大学航空航天医学教育部重点实验室,航空航天生理教研室,西安 710032摘 要 :本文以肌钙蛋白抑制亚基 (troponin I subunit, TnI作为肌节蛋白降解的分子标记,探讨舒张期肌纤维内 Ca 2+浓度升 高与肌原纤维降解的关系。采用在收缩期增加肌质网 (sarcoplasmic reticulum, SR钙离子释放通道开放机率的 caffeine ,以及 在舒张期引起 SR 钙离子释放通道钙漏的 H 2O 2,灌流大鼠离体比目鱼肌,以 Western blot技术检测 TnI 表达水平,并比较 其降解程度。结果显示,离体比目鱼肌肌条在 40 min无钙 Krebs 液灌流

3、期间,静息张力未见明显改变,发展张力缓慢降 低, TnI 未发生降解。用低浓度 caffeine (1与 5 mmol/L灌流肌条,静息张力仅在疲劳收缩期间短暂升高,对肌条疲劳程 度与疲劳后的恢复速率均无显著性影响,灌流后肌条的 TnI 未发生降解;高浓度 caffeine (10 mmol/L灌流使静息张力持续 升高,肌条易发生疲劳,且疲劳收缩后肌条的发展张力不能恢复, Tn I 发生明显降解。 H 2O 2灌流对肌条疲劳程度没有明 显影响,疲劳收缩后发展张力呈迅速恢复后较快下降,静息张力持续增加,且呈浓度依赖性。用 1 mmol/L H2O 2灌流肌 条, TnI 未发生降解,用 5与 1

4、0 mmol/L H2O 2灌流肌条时, TnI 降解程度随浓度增大而增加。由于肌条静息张力与舒张 期间肌纤维内 Ca2+浓度密切相关,以上结果提示,舒张期 SR 钙离子释放通道钙漏增加,可能引起肌纤维 TnI 降解。关 键 词 :肌钙蛋白抑制亚 基;静息张力;发展张力;降解 中图分类号:R337.2Calcium leak of sarcoplasmic reticulum induces degradation of troponin I inskeletal muscle fibersLI Quan, WANG Yun-Ying, LI Hui, JIAO Bo, YU Zhi-Bin*

5、Key Laboratory of Aerospace Medicine, Ministry of Education; Department of Aerospace Physiology, the Fourth Military MedicalUniversity, Xian 710032, ChinaAbstract: The troponin I subunit (TnI was used as a molecular marker to explore the relationship between the resting intracellular Ca2+concentrati

6、on and myofibril degradation in muscle fibers. The isolated soleus muscle strips of rats were treated by caffeine and H2O 2. Caffeine is an opener to increase the calcium release channel open probability of sarcoplasmic reticulum (SR in contraction phase.H 2O 2 induces a calcium leak of SR calcium r

7、elease channel in relaxation phase. The expression and degradation of TnI were detected byWestern blot. The resting tension of tetanic contraction and expression of TnI were not changed, but the developed tension was loweredin isolated soleus muscle strips during 40 min of calcium-free Krebs perfusi

8、on. Low concentrations of caffeine (1 and 5 mmol/Lperfusion induced a transient increase in resting tension during fatigue period, but did not alter the extent of fatigue, recovery rate afterfatigue and expression of TnI in muscle strips. High concentration of caffeine (10 mmol/L perfusion induced a

9、 progressive increase inresting tension, a higher rate of fatigue and a decrease in recovery rate after fatigue in muscle strips. There was a detectable degradationof TnI in soleus after 10 mmol/L caffeine treatment. H2O 2 perfusion facilitated a progressive increase in resting tension in a dose-dep

10、endent manner, but did not influence the fatigue rate of tetanic contraction. The recovery rate after fatigue showed a quickresumption before decline during H2O 2 perfusion. Degradation of TnI occurred in 5 and 10 mmol/L H2O 2-treated soleus muscles. Sinceresting tension is dependent on intracellula

11、r Ca2+ concentration, the above-mentioned results suggest that SR Ca2+leakage in relaxationphase may induce a degradation of TnI in skeletal muscle fibers.Key words: troponin I; resting tension; developed tension; degradation生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2009, 61(3: 223-229224关于废用性或去负荷骨骼肌萎

12、缩过程中肌原纤 维降解而导致萎缩的机制,至今仍未阐明。有研究 表明,骨骼肌收缩负荷降低,通过尚未阐明的机 制,可引起肌纤维内 Ca 2+浓度升高,进而激活 Ca 2+依 赖 性 蛋 白 水 解 酶 , 导 致 肌 原 纤 维 的 降 解1。Duchenne 肌营养不良综合征 (Duchenne musculardystrophy 由于 dystrophin 蛋白的缺失,导致力传导 障碍,亦呈现肌纤维萎缩。这可能是由于外源性 Ca 2+经牵张敏感性阳离子通道进入细胞,激活蛋白 水解酶系统,进而引起肌原纤维的降解 2。然而, 废用性骨骼肌肌纤维内 Ca 2+浓度升高的原因是外源 性 Ca 2+内流

13、增加,还是内源性 Ca 2+释放增加,或 是两者均涉及,目前还不清楚。采用细胞膜 L 型 Ca 2+通道抑制剂硝苯吡啶 (nifedipine长期作用,可 防止去负荷比目鱼肌肌球蛋白重链从 I 型向 II 型转 化,但不能防止骨骼肌的萎缩 3。相反, Wagatsuma 等报道防止去负荷骨骼肌肌纤维内 Ca 2浓度增高, 可部分阻止肌肉的萎缩 4。在心肌钙超载条件下,肌钙蛋白抑制 (troponin Isubunit, TnI与连接 (troponin T subunit, TnT亚基首 先被降解,并漏出心肌细胞外,成为心肌细胞损伤 的标志 5。骨骼肌发生损伤时,亦是先降解细丝, 从肌节中游离

14、出来的细丝,其 TnI 与 TnT 同样发生 降解 6。因此,骨骼肌 TnI 与 TnT 亦可作为肌节蛋 白发生降解的标志。为探明骨骼肌肌纤维内 Ca 2+浓度升高的 Ca 2+来源与作用,以及肌纤维内 Ca 2+浓度升高特征与肌节 降解之间的关系,本研究采用离体大鼠比目鱼肌灌 流 技 术 , 在 无 钙 灌 流 条 件 下 , 使 用 肌 质 网 (sarcoplasmic reticulum, SR钙离子释放通道开放剂 caffeine ,以及增加 SR 钙离子释放通道钙漏的 H 2O 2处理,以不同方式增加肌纤维内源性 Ca 2+释放,并 以 TnI 作为肌节降解的标志分子,观测肌纤维内

15、 SR 钙漏对肌条静息张力、间断强直疲劳收缩的疲劳程 度、疲劳收缩后张力恢复的速率以及 TnI 蛋白表达 水平的影响。1 材料与方法1.1 实验动物 选用健康雄性 Sprague-Dawley 大 鼠,体重 180210 g,鼠龄约 2个月,由第四军 医大学实验动物中心提供。1.2 离体肌条灌流技术与收缩功能测量 采用 戊巴比妥钠 (50 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,约 10mi n 后,迅速剪开后肢小腿皮肤,充分暴露肌肉 后,将两侧肌肉筋膜剪开。尽量在远心端剪断跟 腱,轻柔游离出比目鱼肌。将游离的比目鱼肌放置 于 Krebs 液中,顺肌纤维方向沿纵轴剪下宽度约为 1 mm的全长肌条。用 0号

16、线行近心端肌腱结扎后, 水平放置于肌肉灌流系统的肌肉槽中;近心端用 0号线结扎固定于等长张力传感器 (TB-651,日本光 电 ,远心端则采用弹簧夹固定于肌槽的另一端。 采用 Krebs-Henseleit 溶液按 6 mL/min行非循环灌 流。灌流液组成 (mmol/L: NaCl 120.0, KCl 4.7, NaH 2PO 4 1.2, MgSO 4 1.2, CaCl 2 2.5, EDTA 0.25, NaHCO 3 20.0, glucose 10.0。以 95% O2和 5% CO2的混合气体充分氧合,使 pH 维持在 7.40±0.20。采 用铂金丝场刺激,电刺激

17、器 (SEN-3301,日本光电 输出脉宽 500 µs、间隔 20 s的正向方波单收缩刺 激,以 0.1 mm增量,逐步拉伸比目鱼肌,至等长 收缩张力为最大时的肌肉初长 L max 位置,平衡 10min 。然后改用 100 Hz刺激频率、 50%工作周期 (duty cycle, DC的间断强直收缩刺激 (以 1 000 ms 作 为一个间断强直收缩周期,其中电刺激引起强直收 缩的时间为 500 ms ,休息时间间隔为 500 ms,则 定义其 DC 为 50%,收缩间隔 60 s,平衡 20 min后,采用 30% DC的间断强直收缩,并用不含钙 离子的 Krebs 液灌流肌条

18、 50 min。然后分别加入 1 mmol/L、 5 mmol/L、 10 mmol/L caffeine或 H 2O 2灌流 9 min,将收缩间隔缩短为 1 s,进行间断强 直疲劳收缩 5 min,延长间断强直收缩间隔至 60 s, 恢复 40 min。采用 Chart 软件 (AD Instruments, Australia记录 与分析肌条间断强直收缩参数。实验结束后,用滤 纸吸干肌肉表面附着的水分并称重。再按文献 7公 式计算每一肌肉的横截面积 (CSA。按 1 mg组织加 入 20 µL匀浆缓冲液 (50 mmol/L Tris-HCl, 0.1%Triton X-100

19、, 1 mmol/L EDTA, 50 mmol/L NaF, 10mmol/L -磷酸甘油, 5 mmol/L 焦磷酸钠, 0.2mmol/L Na3VO 4, 200 µmol/L PMSF, pH 7.40, 使用匀浆机 (PT-MR 2100, CE制备匀浆。加入 1/3体积的 3×上样缓冲液 (30 mmol/L Tris-HCl, 6%SDS , 0.3%溴酚蓝, 30%甘油, 3% -巯基乙醇, pH 6.8。将肌匀浆分装于 1.5 mL 离心管中, 80 oC 加热 5 min。冷却后, 12 000 r/min离心 5 min。 以备电泳使用。1.3 蛋白

20、印迹技术 (Western blot 肌肉蛋白分225李 全等:钙漏与 TnI 降解离采用 SDS-不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE系统 (Bio-Rad MINI-PROTEIN II垂直电泳槽 。采用 12% Laemmli分离胶 (Acr:Bis =29: 1。每样品孔上 30 µg蛋白质样品,在 20 mA/gel恒流下电泳至溴酚 蓝到达凝胶底部时,结束电泳,将凝胶从电泳槽中 取出,进行染色或转膜。凝胶染色与脱色按本实验 室已建立的方法进行 7。用 Bio-Rad 半干转膜仪在 20V 条件下,转膜 10 min。取出硝酸纤维素膜 (NC膜 放入封闭缓冲液 (1%

21、 BSA+TBS室温摇动 30 min, 转 入一抗中,用 0.1% BSA+TBS按 1:4 000稀释 TnI-1单克隆抗体, 4 o C 轻摇过夜。 TBS 组成为 (mmol/L:Tris-HCl 20, NaCl 137, KCl 2.7, pH 7.40。将 NC 膜放入洗膜缓冲液中 (0.05% SDS+0.5% TritonX-100+TBS中清洗 3次,每次 10 min。用 TBS 清洗 2次,每次 5 min。红外荧光标记的二抗按 1:10 000比例用 0.1% BSA+0.1% Tween-20+PBS稀释,室温 避光轻摇 1 h。使用 0.1% Tween-20+P

22、BS清洗 3次, 每次 10 min,最后用 PBS (137 mmol/L NaCl, 2.68mmol/L KCl, 8.10 mmol/L Na2HPO 4, 1.47 mmol/LKH 2PO 4 清洗 2次,每次 5 min 。将 NC 膜置于 Odyssey 红外线扫描仪 (Li-Cor, USA上, 选择 800 nm激发波长进行扫描,获取特异性蛋白条带图像。 1. 4 数据的统计学分析 将各实验组数据以 mean±SEM表示。使用 SPSS10.0统计软件对随机区 组设计资料进行方差分析。 P <0.05时认为差异具有显著性。2 结果2.1 Caffeine灌流

23、对比目鱼肌静息张力的影响对照组在 40 min无钙灌流期间,静息张力基 本保持不变 (图 1A 。 40 min的 caffeine 或 H 2O 2灌 流分为 10 min的平衡期、 5 min的疲劳期与 25 min的恢复期。 1 mmol/L caffeine灌流后,静息张力 仅在疲劳期升高至基础水平的 162%,平衡期与恢 复期均保持在基础水平; 5 mmol/L caffeine灌流 下,静息张力在疲劳期升高至基础水平的 423%, 恢复 5 min降至基础水平; 10 mmol/L caffeine灌 流的第 7分钟静息张力即逐渐升高, 到疲劳期开始 时已升至基础值的 240%,在

24、疲劳期最高升至 572%,然后下降,在恢复期末仍高于基础水平 191% (图 1A 。2.2 Caffeine灌流对比目鱼肌疲劳程度的作用以疲劳期开始的第 1次强直收缩的最大张力 (T0 为 100%,计算每隔 0.5 min的强直收缩张力峰值 (Ti /T0 之比,绘制比目鱼肌间断强直收缩的疲劳曲线 (图 1B 。无钙灌流对照组肌条 5 min疲劳后,张力峰 值降至 8%。 1、 5与 10 mmol/L caffeine作用下, 疲劳第 5分钟的张力峰值分别降至 4%、 11%与 15%。与对照组相比, 10 mmol/L caffeine肌条的 疲劳程度明显减小 (P <0.05。

25、 图 1. Caffeine灌流时比目鱼肌强直收缩静息与发展张力的变化Fig. 1. Changes in resting and developed tensions of intermittent tetanic contraction with and without caffeine treatment in soleus musclestrips. A : Resting tension. The muscle strips were equilibrated for 10 min, fatigued for 5 min, and then recovered for 25 min.

26、 B : Developedtension during 5 min of fatigue. Values are mean±SEM,n =6 in each group.生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2009, 61(3: 223-2292262.3 Caffeine灌流下比目鱼肌疲劳后恢复速率的 变化 无钙灌流作为对照组,强直收缩疲劳后,恢复 期发展张力恢复至最大 62%。由于无钙灌流期间强 直收缩的发展张力一直呈现逐步降低,故不能恢复 至疲劳前 100%的水平。与对照组相比, 1 mmol/Lcaffeine 灌流组恢复期发展张

27、力的恢复速率略增强; 5 mmol/L caffeine灌流组恢复期发展张力的恢复速 率在前 15 min基本相当,以后逐渐降低。 10 mmol/Lcaffeine 灌流组,恢复期发展张力仅恢复至 22% (第 9 min,即转而下降,至恢复期末已降至 5% (图 2 。 2.4 H2O 2灌流对比目鱼肌静息张力的影响 对照组在 40 min无钙灌流期间,静息张力亦基 本保持不变 (图 3A 。而在 1 mmol/L H2O 2灌流下, 平衡期静息张力稍下降至 91%,转而逐渐升高,至 疲劳结束时为 114%;恢复期静息张力继续升高, 到恢复结束时升至 180%。 5 mmol/L H2O

28、2灌流时, 平衡期静息张力无明显下降,至疲劳结束时,静息 张力升高到基础值的 195%;恢复期升高到最大值 249% (第 30 分钟 ,随后逐渐下降,第 40分钟时 为 197%。 10 mmol/L H2O 2灌流后,静息张力逐渐 升高,平衡期末达 109%,疲劳结束时达 187%; 恢复期保持升高至最大值 364%,然后逐渐下降, 第 40 min时为 313% (图 3A 。2.5 H2O 2灌流对比目鱼肌疲劳程度的作用与对照组相比, 1、 5或 10 mmol/L H2O 2灌流对比目鱼肌强直收缩的疲劳程度未见明显影响。疲 劳第 5分钟, 1 mmol/L H2O 2灌流组发展张力峰

29、值 降至 7%; 5 mmol/L灌流组降至 9%; 10 mmol/L灌流组降至 17%,三组均值与对照组间无显著性差 别 (图 3B 。2.6 H2O 2灌流下比目鱼肌疲劳后恢复速率的变化图 4为不同浓度 H 2O 2灌流时,比目鱼肌强直收 缩疲劳后的恢复曲线。与对照组相比, 1、 5或 10mmol/L H2O 2灌流下,疲劳后恢复的速率均明显增 快,发展张力恢复的最大值均大于 85%。但是, 图 3. H2O 2灌流时比目鱼肌强直收缩静息与发展张力的影响Fig. 3. Changes in resting and developed tensions of intermittent t

30、etanic contraction with and without H2O 2 treatment in soleus musclestrips. A : Resting tension. The muscle strips were equilibrated for 10 min, fatigued for 5 min, and then recovered for 25 min. B : Developedtension during 5 min of fatigue. Values are mean±SEM, n =6 in each group.图 2. Caffeine

31、灌流下比目鱼肌疲劳后恢复速率的变化 Fig. 2. Recovery rate after fatigue in soleus muscle strips with andwithout caffeine treatment. The muscle strips were recovered for25 min after fatigue. Values are mean±SEM,n=6 in each group.227李 全等:钙漏与 TnI 降解 发展张力很快下降,在第 25分钟, 1 mmol/L H2O 2灌流组发展张力仍高于对照组,为 72%; 5与 10mmol/L灌流

32、组则明显低于对照组,分别为 47%与 38%。 图 4. H2O 2灌流下比目鱼肌疲劳后的恢复速率Fig. 4. Recovery rate after fatigue in soleus strips with and withoutH 2O 2 perfusion. The muscle strips were recovered for 25 min afterfatigue. Values are mean±SEM, n =6 in each group.2.7 TnI的表达水平图 5A 为 SDS-PAGE 凝胶染色图,表明各泳道 蛋白上样量基本相同。图 5B Wester

33、n blot显示,对 照组比目鱼肌包含慢缩型骨骼肌 TnI (ssTnI与快缩 型骨骼肌的 TnI (fsTnI, ssTnI 表达明显高于 fsTnI 的表达。与对照相比, 1与 5 mmol/L caffeine灌 流组肌条 ssTnI 与 fsTnI 的表达水平未见明显改变, 10 mmol/L caffeine灌流组肌条的 ssTnI 与 fsTnI 表 达均降低,提示出现明显的降解。 1 mmol/L H2O 2灌流组肌条的 ssTnI 与 fsTnI 表达水平无显著改变, fsTnI 表达略高于对照肌条,可能是所取肌条部位 的不同所引起的差别。随 H 2O 2灌流浓度从 5 mmo

34、l/L增至 10 mmol/L,肌条 ssTnI 与 fsTnI 呈现降解,且 呈浓度依赖性增加。3 讨论本实验观测结果显示,离体比目鱼肌肌条在 40min 无钙 Krebs 液灌流期间,静息张力未见明显改 变,发展张力缓慢降低, TnI 未发生降解。低浓 度 caffeine (1与 5 mmol/L灌流肌条,静息张力仅在 疲劳收缩期间升高,在平衡期与恢复期均保持在基图 5. Caffeine与 H 2O 2灌流后比目鱼肌 TnI 的降解 Fig. 5. Degradation of TnIs in soleus after caffeine and H2O 2perfusion. A :

35、SDS-PAGE, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.CON, control. B : Western blot. TnI, troponin I. TnI-1, primaryantibody against all of TnI isoforms. ssTnI, slow skeletal muscleTnI isoform. fsTnI, fast skeletal muscle TnI isoform.础值水平;高浓度 (10 mmol/L caffeine灌流在平衡 期即引起静息张力升高,疲劳收缩期升高更加明 显,在恢复期虽下降,但仍明显

36、高于基础值水平。 低浓度 caffeine 对肌条疲劳程度与疲劳后的恢复速率 均无显著性影响,灌流后肌条的 TnI 未发生降解; 高浓度 caffeine 则使肌条不易发生疲劳,且疲劳后 肌条的张力不能恢复,肌条 TnI 发生明显的降解。 三种浓度 (1、 5与 10 mmol/L的 H 2O 2灌流,均可引 起肌条静息张力增加,随浓度增加,静息张力升高 程度亦增加。 H 2O 2灌流对肌条疲劳程度没有明显影 响,却可加速疲劳后发展张力的恢复速率,但是, 发展张力短暂恢复后,转而迅速下降。除 1 mmol/LH 2O 2灌流肌条的 TnI 未发生降解外, 5与 10 mmol/LH 2O 2灌

37、流肌条的 TnI 降解程度随浓度增加而增加。 3.1 骨骼肌收缩期 SR Ca2+释放增加不会产生 TnI 降解本实验在无 Ca 2+的 Krebs 液灌流 50 min后,再 进行 caffeine 或 H 2O 2的处理,且 Krebs 液中含 0.25mmol/L的 Ca 2+络合剂 EDTA ,细胞外液无 Ca 2+,故228 生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2009, 61(3: 223-229 2+ 胞外 Ca 不参与对灌流肌条的影响。 大量研究表明小于5 mmol/L的caffeine是横纹肌 肌质网 Ca 2+ 释放通道(ryan

38、odine receptor, RyR的开 放剂，可增加 RyR 开放的几率 。离体灌流肌条的 静息张力可作为舒张期肌纤维内 Ca 浓度高低的指 标 。由于 SR 的 Ca -ATP 酶(SERCA活性不受 ca ffeine 的影响，其摄取 Ca 能力又足够强，故 2+ caffeine 灌流期间，虽然收缩期肌纤维内 Ca 浓度 升高，但静息张力不会发生明显改变(图 1A。在 疲劳收缩的中期，由于 SERCA 活性被抑制，故出 现静息张力的短暂升高(图 1A。1 mmol/L 的 caffeine 灌流下静息张力升高仅持续 1 min，5 mmol/L 的 caffeine 作用下，静息张力

39、升高峰值虽然达到基础 值的 423%，但持续时间约 8 min。依据 1 与 5 mmol/L caffeine 灌流肌条未出现 TnI 的降解，结合肌条疲劳 收缩后恢复期发展张力恢复速率基本未改变(图 2， 提示骨骼肌收缩期肌纤维内Ca2+浓度短时间(不超过 10 min的升高，不会引起 TnI 出现可检测到的降 解。 10 mmol/L 的 caffeine 可引起 RyR 持续性开放8， 即无论在收缩期还是舒张期，肌纤维内 Ca 浓度将 持续增高。因此导致肌条静息张力迅速升高，并在 疲劳中期升高至基础值的 572% (图 1A，并在 40 min 的灌流期间保持在抬高的水平。正是由于这种

40、 长时间的肌纤维内 Ca 2+ 浓度的升高，导致了 TnI 的 降解，且 ssTnI 与 fsTnI 均发生降解(图 5。推测因 为肌节细丝上调节蛋白的降解，可能引起肌条疲劳 收缩后，恢复期发展张力不能恢复，出现大幅降 低。这尚需进一步的实验证明。 3.2 骨骼肌舒张期 SR 钙漏增加引起 TnI 降解 为了进一步探明肌条收缩期或舒张期肌纤维内 Ca 浓度升高，哪一阶段更能引起 TnI 的降解，采 用 H 2 O 2 灌流肌条。据研究报道，由于肌质网 RyR 富含半胱氨酸残基，其相当于一个氧化还原感受器 ， 因此，H2O2 可引起肌质网 RyR 在舒张期漏出 Ca 2+ 10 10 2+ 2+

41、 2+ 9 2+ 2+ 8 下，因静息张力升高幅值较大，且持续时间均超过 10 min，均引起肌条 TnI 的降解。另一方面，恢 复期发展张力迅速降至对照组水平之下，也提示存 在 TnI 的降解。结合 10 mmol/L caffeine 灌流的结 2+ 果，提示肌条在舒张期肌纤维内 Ca 浓度升高更易 引起 TnI 的降解。关于肌纤维内大幅且持续时间较 长的 Ca 2+ 浓度升高引起 TnI 降解的机制，是值得进 一步探讨的问题，深入的实验观测正在进行之中。 综上所述，离体灌流肌条 TnI 降解需要满足一 定的条件，即肌纤维内 Ca2+ 浓度增加的幅值需足够 大，持续时间要足够长，且舒张期肌

42、质网 RyR 的 钙漏可能是引起 TnI 降解的因素之一。 * * * 致谢：单克隆抗体 TnI-1 为美国 Section of Molecular Cardiology, Evanston Northwestern Healthcare, Northwestern University Feinberg School of Medicine 的 Dr. J .P. J IN 惠赠，深表谢意。 参考文献 1 Kent MP, Spencer MJ, Koohmaraie M. Postmortem proteolysis is reduced in transgenic mice overe

43、xpressing calpastatin. J Anim Sci 2004; 82(3: 794-801. 2 Yeung EW, Whitehead NP, Suchyna TM, Gottlieb PA, Sachs F, Allen DG. Effects of stretch-activated channel blockers on Ca2+i and muscle damage in the mdx mouse. J Physiol 2005; 562(Pt 2: 367-380. 3 Feng HZ (冯汉忠, Yu ZB. Effects of nifedipine on myosin heavy chain (MHC isoforms transition in unloaded soleus. Space Medicine & Medical Engineering (航天医学与医学工 程 2005; 18(2: 89-93 (Chinese, English abstract. 4 Wagatsuma A, Fujimoto K, Yamada S. Effect