仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性(1)

1、    仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性(1)    】目的： 建立仓鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物学特性. 方法： 将仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1接种于仓鼠胰腺背膜下，分别于第7, 14, 21, 28日各剖杀10只，肉眼及光学显微镜下观察原位肿瘤的生长、淋巴结转移及肝转移，同时观测腹水量. 结果： 仓鼠胰腺癌原位模型成活率达95%，生长迅速. 接种后第7， 14， 21， 28日原位肿瘤大小分别为（16±6），（173±44），（369±87），（974±226） m

2、m3. 第21日，毛细淋巴管内可见癌细胞团，部分淋巴结有癌细胞转移，可见少量淡血性腹水. 第28日，淋巴结阳性率进一步增加，可见血性腹水，量明显增多；部分仓鼠发生了肝转移. 结论： 仓鼠胰腺癌细胞株 pGHAM1原位模型建立方法简便，易复制，而且肿瘤保持了胰腺癌的生物学特性，是理想的胰腺癌研究模型.【关键词】 胰腺肿瘤；疾病模型，动物；金仓鼠0引言胰腺癌是一种恶性程度高、预后极差的肿瘤1. 其原因是胰腺癌发病隐匿，很难早期诊断，而即便早期诊断，部分患者也已经发生肝脏转移、腹膜播散或者局部复发2. 基于为胰腺癌研究提供一个肿瘤的试验系统目的，已有大量胰腺癌动物模型建立，但很多是裸鼠模型. 在肿瘤

3、研究方面，由于裸鼠没有正常的免疫系统，其发病机制可能与人有所不同3. 而叙利亚金色仓鼠在形态学、生物学以及免疫学等方面与人相似. 我们拟建立仓鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物学特性.1材料和方法1.1材料雌性叙利亚金黄仓鼠40只，45周龄，纯近交系，体质量4050 g，购自中国兰州生物制品研究所. 饲养条件：温度（22±3），相对湿度为（40±5）%，光/暗周期为12 h/12 h，按照标准食物喂养，自由饮水；DMEM培养液为Gibcol BRL产品；胎牛血清购自杭州四季青生物工程公司.1.2方法1.2.1仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1的建立用甲硝二胺诱导叙利亚金黄色仓鼠胰腺导

4、管癌4. 肿瘤组织用剪刀剪成1 mm×1 mm×1 mm并用套针植入仓鼠肩胛区皮下，68 wk后处死动物，切除肿瘤自治后反复继代种植，第8次种植后切除肿瘤组织，用0.5 g/L的胰蛋白酶消化，37下EDTA处理10 min, 1000 r/min离心10 min，收集细胞，于含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养液中培养，并加 100 U/L青霉素链霉素，100 mg/L卡那霉素以及100 mg/L两性霉素B，反复传代培养60代，建立pGHAM1细胞株.1.2.2仓鼠胰腺癌原位模型的建立PGHAM1细胞株于DMEM培养液中稳定传代56代. 观察细胞增殖旺盛时终止培养，用无

5、血清DMEM培养液制备细胞悬液，调整细胞密度至1×1010/L，备用. 以60 mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠，取腹部正中切口，牵出胰腺，于脾门较宽大处胰腺背膜下注射1×106/L PGHAM1细胞悬液后常规关腹. 于术后7, 14, 21, 28 d分别剖杀10只. 切除原位肿瘤，用测径器测量肿瘤大小，按公式V=/6×长×宽×高计算肿瘤体积，同时观察腹水的质与量、有无淋巴结、大网膜、壁层腹膜及肝脏转移.1.2.3病理学检查切除大网膜，平铺在蜡片上，“卷席法”处理大网膜标本；40/L甲醛固定原位肿瘤、壁层腹膜、肝脏及可疑淋巴结，石蜡包埋切片，HE

6、染色，光学显微镜观察.    2结果2.1原位肿瘤及转移情况接种后第7日，可见胰内原发灶大小（16±6） mm3,侵至背膜，10只仓鼠中有5只管状斑处有癌细胞团；壁腹膜镜检显示间皮细胞部分正常（Fig 1A），而部分间隙增宽；肝脏及淋巴结未见转移，无腹水. 第14日，胰腺内原发灶大小（173±44） mm3,侵至背膜；10只仓鼠中9只管状斑处可见癌细胞团，且较原来增大；壁腹膜间皮细胞开始增生脱落（Fig 1B）；未检测到淋巴结和肝脏转移，未见腹水. 第21日，肿瘤进一步增大至（369±87） mm3，侵至背膜；有少量淡血性腹

7、水；10只仓鼠管状斑均可见癌细胞团，同时毛细淋巴管中亦可见癌细胞团；壁腹膜间皮细胞大片脱落；10只仓鼠有4只检测到淋巴结转移；肝脏未见转移. 第28日，原位肿瘤大小为（974±226） mm3，与周围脏器或组织粘连（Fig 1C）；腹水呈血性，量较大；10只仓鼠有1只死亡，8只检测到淋巴结转移；5只肝脏表面出现大小较一致的多发转移结节.2.2病理学特征原位移植瘤呈圆形或椭圆形，表面凹凸不平，外观呈粉红色（Fig 1C），切面呈灰白色，部分中心有坏死，肿瘤组织质地较脆；镜下可见肿瘤细胞呈多角形、梭形或不规则形，胞质淡染，胞核大而圆，异形性明显，核分裂相多见，肿瘤细胞结节状生长，排列成实

8、性巢状，内有小的血窦，无腺腔样结构，与低分化胰腺腺癌一致（Fig 1D）. 转移肝脏表面可见多发结节，部分已经发生融合（Fig 1E）；镜下可见肝小叶结构遭破坏，取而代之的为癌细胞团，癌细胞特征与胰腺原位肿瘤细胞特征一致（Fig 1F）.            【关键词】,胰腺肿瘤Establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer and its biologic cha  

9、0;      本篇论文是由3COME文档频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站的，论文版权属原作者，请不用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。3讨论近年来，胰腺癌的发病率在世界范围内呈明显上升趋势5. 同时，也是我国人口死亡的十大恶性肿瘤之一. 由于其恶性度高，发病隐匿，易早期转移，加上对放化疗不敏感等特性，使得即使成功地进行了手术切除，术后5 a生存率也不到20%6，7. 裸鼠是最多用来建立肿瘤模型的动物，由于裸鼠缺乏胸腺，不具备T细胞免疫力，故对异种移植不产生排斥反应，成活率高，容

10、易建立胰腺癌动物模型8. 但是，由于其缺乏免疫功能，使得裸鼠胰腺癌模型的发病机制可能与人有所不同. 除此之外，许多裸鼠胰腺癌模型是将癌细胞接种在皮下建立的，它的优点是便于观察，但是这样做却改变了解剖与生理条件. 由于裸鼠胰腺癌模型存在以上不足，因此它并不是最理想的研究模型.叙利亚金色仓鼠在形态学、生物学以及免疫学等方面与人有相似之处3. 例如，人大网膜上广泛分布着管状斑，网膜上的管状斑是腹腔淋巴系统的末梢吸收装置，与毛细淋巴管相连，在生理情况下，其主功能是吸收腹水和腹水中的有形成分9. 而当腹水中有癌细胞时，可能就会被网膜管状斑吸收，导致肿瘤的早期淋巴转移和随后的血行转移. 仓鼠网膜上的管状斑

11、与人的大网膜上的管状斑解剖结构相似.我们利用高恶性度的仓鼠胰腺癌细胞株建立的胰腺癌原位模型，经过35 d潜伏期后逐渐增大；第21日，镜下可检测到淋巴结转移；第28日，部分肝脏表面有大小较一致的转移结节. 但是在淋巴结转移之前，首先检测到的是网膜管状斑有癌细胞团，随后毛细淋巴管中可检测到癌细胞团，最后才检测到淋巴结转移. 这一现象说明网膜管状斑与胰腺癌的转移关系密切. 该模型的特点是潜伏期短、生长迅速、转移早且转移率高，同时还保持了胰腺癌的生理和解剖特性. 因此，仓鼠胰腺癌原位模型是体内研究的理想模型.【参考文献】1 Alexakis N, Halloran C, Raraty M, et al

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