厦门大学 仪器分析-仪分实验-实验 19-高效液相色谱法ppt课件

1、编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月实验目的实验目的 了解了解HPLC仪器根本构造仪器根本构造,掌握实验仪器的普通运掌握实验仪器的普通运用方法；用方法； 加深对色谱分别原理的了解，掌握主要实验条件加深对色谱分别原理的了解，掌握主要实验条件的选择；的选择； 掌握液相色谱定性定量分析技术。掌握液相色谱定性定量分析技术。实验内容实验内容反相高效液相色谱法分别测定烷基苯系反相高效液相色谱法分别测定烷基苯系物物 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2

2、006年年9月月实验讲解要点实验讲解要点 一、色谱分别原理一、色谱分别原理 二、色谱分析技术二、色谱分析技术 三、三、 HPLC仪器和运用方法仪器和运用方法 四、四、 HPLC和和GC的比较的比较 五、五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原测定烷基苯化合物原理理 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月一、色谱分别原理一、色谱分别原理色谱法是一类高效分别方法。色谱法是一类高效分别方法。 色谱分别原理是什么？色谱分别原理是什么？ HPLC和和GC仪器的分别部件是什么？仪器的分别部件是什么？它们有什么不同？它们有什么不同？ HPLC和和GC的主要差别？的主

3、要差别？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月二、色谱分析技术二、色谱分析技术 色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特点是分别才干强、定量准确，适宜于复杂特点是分别才干强、定量准确，适宜于复杂样品或多组分样品分析。样品或多组分样品分析。 常见的色谱定性方法？常见的色谱定性方法？ 色谱定量分析的根据？色谱定量分析的根据？ 气相色谱实验采用那种定量分析方法？有何气相色谱实验采用那种定量分析方法？有何特点？特点？ HPLCHPLC和和GCGC的运用特点的运用特点 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写

4、日期：2006年年9月月三、三、 HPLC仪器和实验技术仪器和实验技术 HPLC HPLC仪器的根本组分？仪器的根本组分？ 主要部件的任务原理？主要部件的任务原理？ HPLCHPLC和和GCGC仪器的比较仪器的比较 HPLCHPLC和和GCGC实验技术的比较实验技术的比较 有人以为色谱分析实验很简单，就是打一有人以为色谱分析实验很简单，就是打一针样品而已，他是怎样以为的？他能否给病针样品而已，他是怎样以为的？他能否给病人打过针？为什么没有？人打过针？为什么没有？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月四、高效液相色谱仪的根本组成四、高效液相色谱仪的根本

5、组成分几个系统？分几个系统？和和GCGC有何不同？有何不同？高压泵任务原理？高压泵任务原理？GCGC是如何进样的？是如何进样的？记录系统和记录系统和GCGC一样一样吗？吗？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月高压泵任务原理单向阀高压泵任务原理单向阀 高压液体有危险吗？高压液体有危险吗？ 高压泵如何改动流速？高压泵如何改动流速？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月高压泵任务原理单向阀高压泵任务原理单向阀 HPLC HPLC进样针与进样针与GCGC有何不同？有何不同？ 为什么为什么HPLCHPLC与与GCG

6、C进样要求不同？进样要求不同？六通阀任务原理流路切换六通阀任务原理流路切换编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月五、五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原理测定烷基苯化合物原理 什么是正相色谱？什么是反相色谱？什么是正相色谱？什么是反相色谱？ 什么是键合固定相？什么是键合固定相？ 预测一下苯和甲苯在预测一下苯和甲苯在C18C18反相柱上的保管反相柱上的保管顺序？顺序？ 什么是反相色谱疏水机理？什么是反相色谱疏水机理？ 本实验的主要色谱分析条件有那些？本实验的主要色谱分析条件有那些？ 流动相组成对保管时间有何影响？举例阐流动相组成对保管时间有何影响？举

7、例阐明？明？ 改动检测波长对色谱图有何影响？改动检测波长对色谱图有何影响？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月HPLC的溶剂选择的溶剂选择 本实验采用什么流动相？本实验采用什么流动相？ 什么是什么是HPLCHPLC级甲醇、乙腈溶剂？级甲醇、乙腈溶剂？ 如何获得超纯水？如何获得超纯水？ 本实验所用的流动相如何配制？本实验所用的流动相如何配制？ 流动相为什么要除气？如何除气？流动相为什么要除气？如何除气？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月六、实验部分六、实验部分 一、溶液配制一、溶液配制1 1 配制规范系

8、列溶液配制规范系列溶液 三组分混标液：每三组分混标液：每mLmL溶液分别含溶液分别含1.00mg1.00mg苯、苯、甲苯和乙苯。甲苯和乙苯。 分别准确移取分别准确移取0.400.40、0.800.80、1.201.20、1.601.60和和2.00mL2.00mL三组分混标液于三组分混标液于10mL10mL容量瓶中，用流容量瓶中，用流动相溶剂定容。动相溶剂定容。2 2 流动相的配制、过滤和除气。流动相的配制、过滤和除气。 五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。苯和丁苯。 规范苯测试液。规范苯测试液。 未知样品未知样品1 1号、号、2 2号和号和3

9、 3号。号。 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月二、色谱实验条件二、色谱实验条件 A A组：组：Waters HPLCWaters HPLC仪仪色谱柱：色谱柱：Nova Pak C18 (3.9Nova Pak C18 (3.9150mm, 4m)150mm, 4m)流动相：流动相：CH3OH-H2O (70/30, v/v)CH3OH-H2O (70/30, v/v)流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min检测波长：检测波长：254nm254nm进样体积：进样体积：20L20LB B组：组：TSP HPLCTSP HPLC仪仪色谱柱

10、：色谱柱：Hypersil BDS C18 (4.0Hypersil BDS C18 (4.0200mm, 5m)200mm, 5m)流动相：流动相：CH3OH-H2O (80/20, v/v)CH3OH-H2O (80/20, v/v)流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min检测波长：检测波长：254nm254nm进样体积：进样体积：20L 20L 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月三、实验内容与主要步骤三、实验内容与主要步骤1 1 改换流动相。改换流动相。2 2 开动仪器，让色谱柱平衡。开动仪器，让色谱柱平衡。3 3 设置色谱任务站参数。设