纳洛酮对缺血再灌注心肌c-fos基因表达的影响

1、    纳洛酮对缺血再灌注心肌c-fos基因表达的影响        摘要目的：研究纳洛酮对心肌缺血再灌注损伤的影响，从分子水平探讨心肌缺血再灌注损伤的保护机制。方法：30只大白兔随机分为三组：（1）对照组；（2）心肌缺血30分钟再灌30分钟组；（3）静注纳洛酮10分钟后缺血30分钟再灌30分钟组。提取心肌总RNA与经同位素标记的c-fos cDNA探针进行分子杂交并自显影，测定c-fos基因mRNA水平。结果：纳洛酮能显著抑制心肌缺血再灌注时c-fos基因的表达。结论：纳洛

2、酮可能具有全心缺血再灌注损伤的分子保护作用。关键词心肌缺血再灌注c-fos基因纳洛酮 Effects of Naloxone on Expression of c-fos Gene during Global Myocardial Ischemia-reperfusionZhang Chi，Wan Hong，Wan Dening(Department of Anesthesiology，Shenzhen East Lake Hospital，Shenzhen 518020)AbstractObjective：To observe the effects of naloxone on expre

3、ssion of c-fos gene during global myocardial ischemia-reperfusionMethods：30 rabbits were randomly divided into control group，IR group（ischemic 30min-reperfusion 30min） and NAL group （naloxone was injected before IR）Total cellular RNA was isolated after 30min of ischemia and reperfusionOptical densit

4、y（OD） value was measuredResults：OD values decreased more in NAL group than that in IR groupConclusion：Naloxone depresses effectively the expression of c-fos geneIn the molecular modulation，naloxone may protect myocardium from ischemia-reperfusion injuryKey wordsMyocardial protectionIschemia-reperfus

5、ion injuryc-fos geneNaloxone心肌缺血再灌注损伤机制较复杂。有研究表明，c-fos基因可能参与心肌缺血再灌注损伤1。纳洛酮（Nal）对缺血再灌性心律失常有防治作用2，还能改善心肌的收缩和舒张性功能，对心肌有保护作用3。本文利用离体兔心脏灌注模型，观察纳洛酮对心肌缺血再灌注时c-fos基因表达的影响，研究纳洛酮、心肌缺血再灌注损伤及c-fos基因之间的关系，从而探讨纳洛酮抗心肌缺血再灌注损伤的可能机制。材料与方法模型制备实验用大白兔30只，雌雄不限，体重450500g，3戊巴比妥钠（3035mgkg）腹腔注入，麻醉后先将心脏离体，迅速于4生理盐水中行主动脉插管并与灌注装

6、置连接，Langendorff灌注15分钟（灌注液为Krebs-Henseleit液，经95O2和5CO2混合气体平衡，pH7.357.45），然后灌注Thomas液使心脏停跳。缺血30分钟后恢复Langendorff灌注30分钟，灌注液仍为K-H液。将标本迅速置于40保存备用。实验分组30只大白兔随机分成三组，每组10只。对照组（C组）：预灌15分钟后再继续灌注30分钟。缺血再灌注组（IR组）：预灌15分钟后，停灌30分钟，再复灌30分钟。纳洛酮组（NAL组）：心脏离体前10分钟静注Nal1mgkg，余皆同IR组。组织总RNA提取，杂交及放射自显影采用异硫氰酸胍-酚氯仿一步法4，提取RNA，

7、然后与经同位素标记的c-fos cDNA探针进行打点杂交。杂交膜于40自显影7天后用IBAS系统处理，得出每个c-fos杂交点的积分光密度值（optical density，OD）。统计分析实验数据以±s表示，采用方差分析和q检验进行统计学处理。P0.05有显著性差异。结果心肌缺血30分钟再灌30分钟后心肌细胞c-fos基因表达明显增加，IR组OD值（11.855±1.257）比N组显著增高（P0.01）。纳洛酮预处理对心肌缺血再灌注c-fos基因表达有明显抑制作用，NAL组与IR组相比，有显著性差异（P0.01），与对照组相比无显著性差异（P0.05）（表1）。讨论资料显

8、示，在心肌局部或全心缺血再灌注时c-fos基因能快速、早期表达1，与钙离子、IP3、cAMP等第二信使有密切关系。c-fos基因的表达产物FOS蛋白与c-jun基因的蛋白产物JUN形成异源二聚体，作用于DNA特殊序列，调节相关基因的转录，发挥第三信使作用。表1各组心肌c-fos基因mRNA点杂交OD值组别例数OD值C101.842±0.063?IR1011.855±1.257NAL102.570±0.416?与IR组比较，?P0.01 Brand1等人发现将动物冠状动脉左前降支阻断10分钟，缺血区中c-fos基因即被诱导表达，为对照组3.6倍。而其他学者也发现，在

9、心肌缺血14小时内，c-fos基因表达达到高峰，随后逐渐下降。另有学者发现，反复多次缺血再灌注比短时间单次缺血再灌注更能诱导c-fos基因大量表达4。本实验结果显示，离体心肌在缺血再灌注过程中c-fos基因表达明显增强，提示c-fos基因可能参与了心肌缺血再灌注过程。c-fos基因含有DNA依赖的RNA多聚酶催化的转录启动信号和多腺苷化信号，包括钙离子在内的上述第二信使进入细胞核后，通过作用于c-fos基因5端的调节成分诱导其转录mRNA。阿片受体拮抗药纳洛酮可增加冠脉血流量，降低心肌cAMP和Ca2含量，Ca2内流减少，可促进细胞膜的稳定性，从而限制缺血再灌注心肌释放去甲肾上腺素，并且通过抑

10、制黄嘌呤氧化酶的形成，减少再灌注氧自由基的生成5。本实验结果表明，纳洛酮抑制了心肌细胞c-fos基因的表达，可能正是通过以上机制而发挥对抗心肌缺血再灌注损伤的作用。张赤（深圳市东湖医院麻醉科518020）万红（湖北医科大学附一院麻醉科）万德宁（湖北医科大学附二院麻醉科）王焱林（湖北医科大学附二院麻醉科）参考文献1，Brand T，Hari SProto-expression in porcine myocardium subjected to ischemia and reperfusionCirc Res，1992，7113512，Fagbemi O，Lepran I，Parratt JRN

11、aloxone inhibits early arrhythmias resulting from acute coronary ligationBr J Pharmacol，1982，765043，Zhan ZY，Lee AY，Wong TMNaloxone blocks the cardiac effects of myocardial ischemia and reperfusion in the rat isolated heartClin Exp Pharmacol Physiol，1985，123734，Webster KA，Discher DJInduction and nuclear accumulation of fos and jun proto-onco