山莨菪碱对创伤性肺损伤细胞因子及其mRNA表达的影响

1、    山莨菪碱对创伤性肺损伤细胞因子 及其mRNA表达的影响        【摘要】目的研究山莨菪碱(654-2)对创伤性急性肺损伤(ALI)家兔血浆中肿瘤坏死因子-(TNF-)、白细胞介素-6(IL-6)的含量及其在内脏组织中mRNA表达的影响。方法用ELISA和RT-PCR方法测定24只大耳白兔血浆中TNF-、IL-6的含量及其在内脏组织中mRNA的表达。结果创伤性ALI家兔与正常组比较，血浆中TNF-、IL-6的含量升高(P0.05)，内脏组织中TNF-、I

2、L-6 mRNA的表达显著增多(P0.01)。654-2治疗后明显降低ALI家兔血浆中TNF-、IL-6的含量(P0.05)，抑制内脏组织TNF-、IL-6 mRNA的表达(P0.05)。结论654-2能有效抑制ALI家兔多种组织TNF-、IL-6 mRNA表达，降低血浆中TNF-、IL-6的含量。【关键词】山莨菪碱；急性肺损伤；肿瘤坏死因子-；白细胞介素-6；基因表达 Significance of anisodamine on cytokine activity and the expression of cytokine mRNA in traumatic acute lung inju

3、ryYIN Wen*，LIANG Jihe, HU Xiaoming，et al.（*Departement of Emergency,XinJing Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, China）【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of Anisodamine on contents of TNF-、IL-6 in plasma and their mRNA expression in lung、 liver、 heart and kindney

4、 tissues of traumatic acute lung Injury(ALI).MethodsELISA and RT-PCR were used to detect contents of TNF-、IL-6 in plasma and their mRNA expression in lung、liver、heart and kidney tissues of traumatic ALI rabbits.ResultsAs compared with normal group, the contents of TNF-,IL-6 in plasma(P0.05) and thei

5、r mRNA expression in tissues (P0.01) significantly increase. Anisodanine treatment can significantly decrease the contents of TNF-、IL-6 in plasma (P0.05),inhibit the expression of TNF-、IL-6 mRNA in lung、liver、heart and kidney tissues of traumatic ALI rabbits(P0.05).ConclusionAnisodamine seems to be

6、effective in decreasing contents of TNF-、IL-6 in plasma and their mRNA expression in multiple organ and tissues.【Key words】 Anisodamine;Acute lung injury;Tumor necrosis factor-;Interleukin-6;Gene expression我们采用复制创伤性急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型1，观察山莨菪碱(654-2)治疗前后血浆中肿瘤坏死因子-(TNF-)、白细胞介素-6(IL-6)含量及上述细

7、胞因子在肺、肝、心、肾组织中mRNA表达的变化，探讨654-2对创伤性ALI的保护作用及可能机制。材料与方法1.动物分组：健康大耳白兔(本校动物中心提供)24只，6月龄，体重2.02.5 kg，雌雄不限，3%戊巴比妥25 mg/kg体重静脉麻醉，随机分为3组：(1)创伤模型组(M)8只，兔仰卧固定于撞击台上，以冲击速度5.7 m/s，力75.8 N/cm2冲撞能量约204 J使胸壁压缩40%，约3 cm，兔非撞击侧胸壁被硬板支撑，兔体只可挤压，不能移位，随后静脉注射大肠杆菌内毒素50 g/kg体重。(2)654-2治疗组(T)8只，按M组制成创伤性ALI，即刻给予654-2 2 mg/kg体重

8、静注，随即以每小时1 mg/kg体重静脉维持。(3)正常对照组(C)8只，无特殊处理。2.观察指标与方法：(1)TNF-、IL-6含量：各组动物均于0、0.5、1、1.5、2、4、6、12 h经颈动脉采血用ELISA方法进行TNF-、IL-6含量测定(TNF-、IL-6试剂盒由我校免疫教研室提供，按说明书操作)。(2)TNF-、IL-6 mRNA表达：各组动物于创伤后12 h处死，留取肺、肝、心、肾组织。各组织总mRNA提取采用Chomczyniski建立的酸酚-氯仿非超速离心一步法2(试剂盒为美国Promega产品)。采用RT-PCR技术对肺、肝、心、肾组织mRNA进行扩增。25个循坏后行常

9、规琼脂糖电泳，以-actin为内参对照进行像分析，结果以各组的校正光密度值与-actin的校正光密度值之比值表示。3.统计学方法：t检验。结果表1组别撞击后时间(h)00.511.524612M0.22±0.100.67±0.22*1.06±0.26*#1.51±0.28*#1.01±0.31*#0.37±0.180.31±0.120.25±0.08T0.20±0.090.37±0.110.47±0.10*0.49±0.09*0.46±0.12*0.37±

10、0.120.34±0.110.34±0.10C0.18±0.090.20±0.100.19±0.100.18±0.120.19±0.110.22±0.110.24±0.110.20±0.12     注：与C组比较，*P0.01，*P0.05；与T组比较，#P0.05表2类同 表2组别撞击后时间(h)00.511.524612M0.14±0.090.19±0.100.27±0.120.31±0.080.49±

11、;0.12*#0.50±0.13*#0.60±0.21*0.47±0.12*#T0.18±0.090.22±0.120.18±0.100.22±0.090.19±0.080.25±0.080.55±0.12*0.22±0.08C0.14±0.060.19±0.060.18±0.070.17±0.070.17±0.120.14±0.070.17±0.090.14±0.08   &

12、#160; 表3组别TNF-IL-6肺肝心肾肺肝心肾M1.70±0.22*1.60±0.30*0.80±0.22*1.18±0.42*1.40±0.08*1.30±0.30*0.80±0.33*0.90±0.18*T1.30±0.30*#1.20±0.23*#0.60±0.18*#0.93±0.39*#1.03±0.18*#1.01±0.19*#0.50±0.23*#0.40±0.28#C0.75±0.280.71±

13、0.170.36±0.400.52±0.140.75±0.350.73±0.230.36±0.300.41±0.22     注：与C比较,*P0.05,*P0.01;与M比较,#P0.01,#P0.01 讨论本实验模型组动物血浆中TNF-含量于伤后0.5 h开始升高，1.5 h达峰值，2 h开始下降，612 h降到对照组水平。而IL-6在创伤后2 h开始升高，46 h达峰值，之后逐渐下降，12 h仍明显高于对照组，TNF-较早于IL-6在血浆中出现且升幅较大，提示它们的因果关系。TNF-可能是

14、ALI的启动因子，启动了IL-6、IL-8等细胞因子群，使合成、分泌增多，从而扩大了级联反应。能诱导PMN在肺等组织聚集、粘附、释放IL-6和IL-8等炎性介质，引起SIRS进而导致多器官功能衰竭综合征，说明ALI是MODS的一个重要部分。模型组动物肺、肝、心、肾RT-PCR结果显示TNF-、IL-6 mRNA表达明显上调，提示由内源性细胞因子作为致病递质在多器官功能衰竭综合征的发病过程中起关键性作用，说明TNF-、IL-6参与了创伤后内脏功能损害的发生发展过程。本实验结果显示，654-2能显著降低模型组血浆中TNF-、IL-6的含量及幅度，不同程度抑制它们在肺、肝、心、肾等组织中的表达。可见，创伤性ALI早期应用654-2治疗可能有助于减轻TNF-、IL-6等细胞因子mRNA的过量表达、产生及其介导的急性炎症反应，避免创伤性ALI的发生、发展。基金项目：国家自然科学基金资助项目(39770736)作者单位：尹文（710032西安，第四军医大学西京医院急诊科）虎晓岷（710032西安，第四军医大学西京医院急诊科）张松涛（710032西安，第四军医大学西京医院急诊科）蔡春（710032西安，第四军医大学西京医院急诊科）梁继河（胸心外科）张金山（第四军医大学基础