复方竹节参片对类风湿性关节炎作用的实验研究

1、复方竹节参片对类风湿性关节炎作用的实验研究         09-08-29 11:53:00     编辑：studa20                   作者：王振富谭庆玲张惠陈龙全 【摘要】  目的探讨中药复方竹节参片治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法建立弗氏完全佐剂诱

2、导小鼠关节炎病理模型,采用复方竹节参片治疗，通过关节炎指数、足趾容积、病理学检查、血清细胞因子测定进行观察。结果复方竹节参片能明显抑制弗氏完全佐剂性关节炎小鼠关节肿胀及病理学改变,降低关节炎指数，降低关节炎病理模型小鼠血清中异常增高的白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和细胞肿瘤因子（TNF-）水平(P<0.05)。结论复方竹节参片具有明显抑制促炎症细胞因子病理性的升高，从而有效控制了类风湿性关节炎病情发展。 【关键词】  类风湿性关节炎；佐剂；复方竹节参片；小鼠Abstract：ObjectiveTo explore the mechanism of com

3、pound Japanese ginseng pill in treatment of rheumatoid arthritis. MethodsThe pathological model of arthritis was established by freunds  complete adjuvant in mice, and arthritis index, serum cytokines were detected and histopathological change was observed.ResultsCompound Japanese ginseng pill

4、could inhibit articular swelling of mice,alleviate pathological changes obviously,and reduce the index of mouse arthritis and the contents of serum IL-6, IL-8, INF-. ConclusionCompound Japanese ginseng can inhibit the pathological increase of  inflammatory cell,and control the  development

5、 of rheumaotoid arthritis effectively .Key words：Rheumatoid  arthritis;  Adjuvant;  Compound Japanese ginseng pill;  Mice    复方竹节参片采用当地民族药物竹节参(五加科植物竹节参Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根茎，又名竹节人参、北三七，是我国西南地区民间用以治疗风湿痹证、筋骨疼痛、虚损劳伤的名贵中草药) 为主，选用中药血当归、淫羊藿、白芍、青风藤、地蜂子、穿山龙等配伍组方，浓缩提

6、取，制备成复方竹节参糖衣片剂型，临床上主要用于各类风湿性关节炎等风湿疾病1的治疗。本文旨在研究复方竹节参片对佐剂性关节炎(adjuvant induced  arthritis,AA) 小鼠的治疗效果，并测定对AA小鼠血清细胞因子IL-6、IL-8、TNF-的影响，探讨其可能作用机制。1  材料与仪器1.1  实验动物及分组昆明小鼠(由湖北省实验动物中心提供)50只，体重1820 g。随机分为5组，每组10只，即对照组，模型组，复方竹节参片高、低（4，6 g·kg-1·bw）实验组，雷公藤多苷片(4 g·kg-1·bw)治疗

7、组。1.2 药品试剂及器材试验药品制备：复方竹节参片，批号：040915，由湖北民族学院医学院附属医院制剂室提供。    复方竹节参片去糖衣粉碎，按水煎剂制备法得12浓缩药液，滤过，滤液加95%乙醇搅拌，冷藏24 h，过滤，弃去沉淀物，回收乙醇浓缩至12（即每毫升含生药2.0 g），高压灭菌保存备用；雷公藤片由黄石市制药厂生产(批号：040318)，雷公藤多苷片临用时调制(应用阿拉伯胶配成混悬液，4 g·kg-1·bw)；弗氏完全佐剂（SIGMA产品）；IL-6，IL-8，TNF-试剂盒由中国人民解放军总医院科技开发中心放免所提供。精密电子分析

8、天平；TL-16G型高速离心机（上海实验仪器厂生产）；GC-1200 放射免疫计数器（中国安徽科大创新股份有限公司）；容积测量仪，自制；切片机Leica Jung Biocut2035，德国；AXIOSKOP2PLUS光学显微镜,德国ZEISS公司。     09-08-29 11:53:00     编辑：studa202 方法2.1 小鼠模型制备2与检测方法小鼠均左后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(0.1 ml/只)致炎，第7天时随机分为5组，于致炎第8日灌胃给药，1次/d，连续灌胃给药21 d，对照组和关节炎模型组

9、给生理盐水每只3 ml；复方竹节参片低、高剂量治疗组给药剂量分别为4，6 g·kg-1·bw；阳性药雷公藤多苷片治疗组给药剂量4 g·kg-1·bw，1次/d，共21 d。关节炎指数3评价 (Arthritisindex AI)：记录实验小鼠佐剂性关节炎的发生及严重程度，分5级。0级：关节无红肿；1级：足小趾关节红肿；2级：趾关节、足跖部均红肿；3级：踝关节以下均红肿；4级：包括踝关节，全部红肿。初次免疫后7 d起，每7天评分1次；用排水法测足爪体积，以足爪肿胀抑制率观察复方竹节参片对病变的抑制作用；采用放免法检测病变小鼠外周血IL-6，IL-8，TNF

10、-；摘取小鼠继发病变左侧踝关节，10%甲醛固定，8%甲酸脱钙，乙醇梯度脱水，浸蜡，石蜡包埋，切片，HE染色，病理学光镜观察：关节滑膜组织、炎性细胞浸润、软骨破坏及骨侵蚀情况。2.2 数据分析实验数据采用SPSS  FOR  WINDOWS 10.0软件进行，配对t检验统计处理。3 结果3.1 小鼠关节组织病理学观察正常组：踝关节组织学结构正常；模型组：踝关节出现明显病变，关节软骨面毛糙凹凸不平、缺损,软骨细胞固缩甚至消失形成软骨空陷窝，相邻骨质疏松，关节腔变窄，且滑膜充血、水肿、呈不规则增厚，滑膜内有大量淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和浆细胞浸润，表面滑膜组织可见灶性坏死；

11、竹节参组及雷公藤多苷片组：关节软骨表面光滑，未见软骨破坏及骨侵蚀，滑膜细胞仅轻度增生，且排列整齐、细胞形态规则，见少量炎性细胞浸润。3.2 关节炎指数比较给药1周和2周，复方竹节参片实验组与病理模型组相比，关节炎指数差异显著(P<0.05或P<0.01)；复方竹节参片高、低剂量组及雷公藤多苷片组之间比较，无显著性差异（P>0.05）。结果见表1。表1  关节炎指数的比较（略）3.3 对小鼠继发性炎症反应的影响复方竹节参片各剂量组对小鼠佐剂性关节炎肿胀具有明显的抑制作用，与模型组比较有显著性差异(<0.05或<0.01)。结果见表2。表2  复方

12、竹节参片对小鼠小鼠继发性炎症反应的影响（略）3.4 对佐剂性关节炎模型小鼠外周血细胞因子的影响与对照组比较，模型组小鼠血清中IL-6，IL-8，TNF-水平明显升高（P0.01）；经灌胃用药1周后，复方竹节参片和雷公藤片组能使病变小鼠血清中IL-6，IL-8，TNF-水平降低（P0.05或P0.01），且复方竹节参片和雷公藤片组无显著差异。结果见表3。表3  复方竹节参片对小鼠佐剂性关节炎外周血IL-6、IL-8、TNF-的影响（略）4  讨论    类风湿性关节炎（RA）是一种以慢性炎症为特征的免疫性疾病，主要侵犯全身各处关节，呈多发性和对称

13、性慢性增生性滑膜炎，由此引起关节软骨和关节囊的破坏，最后导致关节强直畸形。本研究采用弗氏完全佐剂诱导大鼠关节炎病理模型，其病理特征与人类风湿性关节炎相似。    复方竹节参片由竹节参、血当归、淫羊藿、白芍、地蜂子、青风藤、穿山龙等配伍组成，具有益气活血、通络止痛、祛风除湿、温肾壮骨的功效。临床用于治疗风湿性、类风湿性关节炎和损伤性、骨质增生性关节炎等1病症。本研究显示复方竹节参片及雷公藤片治疗组均能明显减轻AA小鼠左后足趾肿胀程度，降低小鼠关节炎指数,两治疗组之间比较无显著性差异；通过细胞因子的检测我们进一步发现，病变小鼠外周血中的IL-6，IL-8，TNF-水平

14、显著升高。细胞因子实质上是维持免疫细胞功能协调运转，相互联络的“信使”，其促炎因子与抗炎因子间的失衡4，5是导致肌体组织免疫损伤和“炎症瀑布”的主要因素。竹节参能明显抑制IL-6，IL-8，TNF-活性的释放，这表明其对减轻炎症反应与组织破坏有积极作用；从病理改变程度方面，复方竹节参片组与雷公藤组均能有效控制AA小鼠炎细胞浸润、关节狭窄、软骨和骨的侵蚀破坏。因此，复方竹节参片能显著控制AA小鼠的病情发展，其明显抑制促炎症细胞因子IL-6，IL-8，TNF-病理性的升高可能是复方竹节参片有效治疗类风湿关节炎的作用机制之一。【参考文献】  1陈龙全，张国安，何军，等复方竹节参片治疗风湿类疾病218例临床观察J时珍国医国药,1998,9(5):391.2徐叔云，卞如濂，陈 修药理实验方法学，第版M北京：人民卫生出版社，1991：700.3张国恩，杨德华，钱玉中，等痹康饮合剂治疗大鼠胶原性关节炎的实验研究J中成药，2006， 28（5）：690.4巴德年细胞因子协调免疫应答的“语言”和治疗疾病的生物技术型