FACSAriaⅡ流式细胞仪上样准备

1、FACSAri a H流式细胞仪上样准备（一）上样时需要准备的物品+漂白水3-5L+75%酒精5L+无菌PBS或生理盐水5-10L（二）FACSAriaH分选时需自备的质控品+ Accudrop beads （分选时液滴延迟校准）:货号345249,货期需4周,如需分选要提前订购。注：做分选时需自备，如无自备亦可上样，但不保证分选效果。（三）上样时，样品的准备律保证细胞活，性：需4C冰上保存律保证样品为单个细胞，不黏连：反复吹打，用尼龙膜过滤*分选时，需再次培养的，收集管内需装至少1/2培养基。建立实验模板1 在软件界面左侧Browser面板下，依次点击New Folder、Experimen

2、t、Specimen（均可重命名），单击Specimen左侧“ +”符号，显示下方的Tube,点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色。Status Pareers Thre$boWVoltaAc2在软件Cytometer面板上，点击Parameters选项卡，选择实验所需荧光通道（按Ctrl键可多选），并删除多余通道。选择荧光素名称、信号放大类型（log/lin ）、信号脉冲类型（H/A/W），Q Cytometer - FACS A ria (1)LaserRafaoParameterCytometer Connected3在右侧worksheet页面中，画出实验所需模板：选择点图（双参数）或直

3、方图（单参数），在图中选择参数，并建立所需“门”（多边形、矩形、十字象限形、线形，根据实验情况而定）。利用鼠标右键Show Populations选项建立图之间的联系Comp worksheetworksheetc寻WSLW 口50100150200250iLCLQiQQ4Corwio1010 10FITC-ACreate Statistics View Ctrl+B.QiQ3Showdi. comp worksheet Show HiArirehy Ctrl+GklAll EventQ因QISend tfl- BackOr4tr电 ti 口必星 hy C t*Dupli cat eCtrl+

4、B PuuCtrl+VM CutCtrl+X喀 CopyCtrl+CDeleteDeleteBring to FreniShfw図的図Q44至此，一个简单的实验模板基本建成。现在可以将样本管放在上样台上，点击上样面板的load，此时Acquire Data自动被激活或手动点击采集控希【J面板上的Acqiredata按钮，仪器开始获取样本数据。Acquisrtion DashboardCurrent ArnvtyTube 001Threshold Rate0 evt/sSlopping Gale Ey&nts0 evtElapsed Time00:00:00B-a&it Contrdshext

5、TubeAcqutsltion SetupStoCTxng Gate:Storage Gdte:Acqursltm StatusPrKwsed Evmts-!Threshold Count:AJI Events 神 Everts To Record:tOGOO eArtv Stopping Time (sec): AH Everts v Events Td DispJay:iMeM7 Flow Rate:Etectronw Abort Rate：5调整Cytometer面板中各通道电压，使FSC/SSC中信号位于利于观察的位置。调整阈值(Threshold),除碎片和噪音信号。调整上样速度(F

6、lowRate)囲 Arquhition DashboardCuriwt ActivityActive Aube/WellTube 001Contfcls+J Next TtieThreshold Rate0 evt/sSlopping Gale EventsOevtElapsed Time00:00:00.Acqutte Data Rtcd DdtdAcquisition 5eti 1 G i 阳 Stati sti es Vi awr如.Show Populations? | *Scale to Fopuliti on1 19:,Sho# Gater- Ering to Fr1Send to BAckOrder Popiilby CcuntDuplicateCtrl+EI iiiiihiTTT i ii川 i i mi|j pas(eCtrl+Vw：CD 吉 PECM CutCtrl+X心 CcpyCtrl+CDelateTube : 3/1 E+56J45/4/19/3PopulationffEvents Parent