间歇低氧幼鼠8-异前列腺素F2α变化及芹菜素的干预效果

1、间歇低氧幼鼠8-异前列腺素F2变化及芹菜素的干预效果         08-11-03 10:42:00     编辑：studa20              作者：周永海，蔡晓红，张存雪，李源，李宁，龚永生，胡良冈  【关键词】  间歇低氧；8-异前列腺素F2；芹菜素    Abstract:&

2、#160; Objective: To detect the changes of 8-iso-prostaglandin F2 (8-ISO-PGF2) in serum and the hippocampus and to observe the intervention effect of apigenin in immature rats exposing to intermittent hypoxic. Methods: Thirty two 34 week-aged SD rats were randomly divided into intermittent hypoxia (I

3、H) group，air control(C) group，apigenin+ DMSO (Q) group and DMSO control(R) group. Each group had eight rats. Intermittent hypoxia model was induced by an intermittent hypoxia cabin and the cabin was flushed with 99.99% nitrogen alternating with 99.5% oxygen. The cycle of hypoxia- reoxygenation was 9

4、0 s. After 2 weeks，the serum and hippocampus levels of 8-Iso-Prostaglandin F2were tested by ELISA. Results: In the serum，the expression of 8-ISO-PGF2 in IH and R groups were significant higher than that in C and Q groups (P <0.01，respectively). There were no difference between C and Q groups (P &

5、gt;0.05)，and no difference between IH and R groups (P >0.05). The similar results were found in hippocampus. Serum 8-ISO-PGF2 and hippocampus 8-ISO-PGF2 were positively correlated (r =0.818，P <0.01). Conclusion: The 1evels of 8-iso-PGF2 increases in both serum and hippocampus of immature rats

6、with IH and the 1evels of 8-iso-PGF2 in serum can reflect indirectly the degree of oxidative stress in hippocampus. Apigenin can reduce the 1evel of 8-iso-PGF2 in serum and hippocampus. Therefore，it has plication prospect in treatment of injuries which induced by IH.    Key words:

7、0;  Intermittent hypoxia；8-ISO-PGF2；Apigenin    儿童睡眠障碍阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)可造成神经系统损害，从而引起认知功能障碍、学习成绩下降，其危害逐渐引起社会的广泛关注。目前认为OSAHS最重要的病理生理改变是夜间反复的间歇低氧，进而引起机体氧化应激。芹菜素是天然存在的一种黄酮类化合物，能清除氧自由基及NO自由基等，从而体现了对神经的保护作用1。本试验模拟OSAHS的典型病理生理特征，建立慢性间歇低氧的幼

8、鼠模型，测定血清及海马中8异前列腺素F2水平，并观察芹菜素的干预作用，以期为临床应用芹菜素治疗间歇低氧造成的损伤提供实验基础和理论依据。    1  材料和方法    1.1  动物与药品  取体重为80100 g健康雄性SPF级SD幼鼠(34周龄)32只，由温州医学院实验动物中心提供，合格证号：SYXK(浙)2005-0061。芹菜素纯度为98%，批号：060313（陕西慧科植物开发有限公司）；二甲基亚砜（DMSO）批号：040602（上海生工生物工程技术服务有限公司）。芹菜素配制方法：25 mg芹菜素

9、+8 ml生理盐水+40l DMSO，配成11.6×10-3mol/L，4 冰箱保存。溶剂配制方法：8 ml生理盐水+40l DMSO，配成0.5%的溶剂，4 冰箱保存。    1.2  仪器  CYES蛐脱酢趸计宀舛怯缮虾味潜沓峁湫脱醪蘸涂掌舛哉詹兆灾疲魈逵刹恍飧种瞥桑崭侵屑洳糠治黄甯制俊跹狗髁考啤刂瞥绦颉痰缙鳌绱欧拖允酒鞯茸槌煽刂葡低场湫脱醪?25 cm×48 cm×24 cm大小，侧壁上有4个进气的单向阀，4个排气的单向阀；空气模拟对照舱60 cm×48 cm×24 cm大小，侧壁上有2个

10、进气的单向阀，2个排气的单向阀），电磁阀由宁波亚德客自动化工业有限公司提供，单片机选用台湾华邦（Winbond）的W78E516B八位单片机，医用压缩氧气(浓度>99.5%)和压缩高纯度氮气(浓度>99.99%)由温州市医用氧厂提供。    1.3  动物模型建立及分组  参照McGuire、Gozal等2，3方法建立慢性OSAHS动物模型。取34周龄雄性幼鼠32只，按数字表法随机分为间歇低氧组（IH），空气对照组（C），芹菜素+DMSO组(Q)和二甲基亚砜组(R)，每组各8只。IH、R、Q组置于常压间歇低氧舱内。90 s为一次低氧

11、囱跹罚?.3 kPa压力通氮气30 s、停30 s，25 L/min流量通氧气12 s、停18 s，在停止通气阶段由连接的测氧仪分别测间歇低氧舱内的氧浓度高值、低值和CO2 浓度，CO2 浓度始终<0.01%，湿度为（50±10）%。每天7.5 h (8:50-16:20)。C组幼鼠置于同等条件下的空气模拟对照舱，通压缩空气，与间歇低氧舱由同一单片机程序控制气体输入。Q组幼鼠每天于常压低氧前30 min腹腔注射25 mg/kg4用DMSO溶解的芹菜素，R组则注射同量DMSO+生理盐水。幼鼠自由活动，不限饮食，实验时间为2周。    实验过程中，白天

12、各舱上面均盖厚布，使舱内保持黑暗，模拟黑夜，幼鼠进入睡眠状态。每天间歇低氧结束后，幼鼠出舱，置于日光灯下，模拟白天，自由活动，饮食不限。    1.4  血清及海马8-ISO-PGF2测定  低氧结束次日，戊巴比妥钠（35 mg/kg，腹腔注射）麻醉，将幼鼠仰卧固定，剖开腹腔，抽取腹主动脉血3 ml，低温离心机4 000 r/min离心15 min，取上清，-20 保存待测；取血后迅速断头处死幼鼠，取出海马，留取100 mg，用磷酸缓冲液反复冲洗干净后-80 保存待测。ELISA试剂盒购自美国Assay designs公司，按照试剂盒说明书操作

13、，用CurveExpert1.38软件绘制标准曲线，计算各孔相应8-ISO-PGF2浓度。批内和批间变异系数分别为6.5%和7.8%，最低可测范围为40 pg/ml。    1.5  统计学处理方法  采用SPSS12.0统计软件。用单因素方差分析，方差齐者组间比较用LSD-t检验，方差不齐者用Tamhanes T2 检验。两变量的相关分析用Pearson 直线相关分析法。    2  结果    2.1  各组幼鼠血清与海马中8-ISO-PGF2的含量结果

14、0; 见表1。    2.2  血清和海马组织中8-ISO-PGF2含量的相关分析  两者呈显著正相关（r =0.818，P0.01，n =64）结果见图1。    3  讨论    睡眠是人生命的重要组成部分，儿童睡眠障碍以OSAHS为多见，发病率约为2%。OSAHS患儿存在一定程度的执行能力、注意力、记忆力和言语能力下降5；有研究发现，虽经鼻持续气道正压通气(nCPAP)、口咽部手术等方法治疗，OSAHS患者受损的学习记忆等认知功能也只能得到部分改善6, 7，因此，如何早期便捷、有效地判定OSAHS所致的间歇低氧脑损伤程度及探寻一种新的方法来进行防治具有重要意义。    OSAHS特征性的低氧方式