红茶菌调节小鼠免疫功能的实验研究(1)

1、红茶菌调节小鼠免疫功能的实验研究(1)        作者：李波清，孟玮，王志强，于敏，孙旭红【关键词】 红茶菌;,小鼠;,免疫功能摘要：目的探讨红茶菌对小鼠免疫功能的调节作用。方法Balb/c小鼠30只，体重1822 g，随机分为两组，用红茶菌液给小鼠灌胃30 d后处死，以MTT法测定NK细胞的杀伤活性；以腹腔巨噬细胞吞噬白色念珠菌的方法评价巨噬细胞吞噬功能；以胸腺细胞增殖法和脾细胞增殖法分别测定IL1和IL2的生物活性。结果红茶菌能显著提高NK细胞的杀伤活性；巨噬细胞吞噬功能明显增强；红茶菌灌胃组IL1和IL2

2、活性分别为：0.549±0.024，0.405±0.018；对照组分别为：0.341±0.021，0.361±0.011，实验组与对照组比较，IL1，IL2活性得到显著提高(P0.01)。结论 红茶菌能显著增强小鼠的免疫功能。关键词：红茶菌; 小鼠; 免疫功能Abstract：ObjectiveTo investigate the regulative effect of black tea fungus on the immunological function of mice. MethodsThirty Balb/c mice(weight 182

3、2 g) were randomly divided into two groups. All the mice were sacrificed after they had been given black tea fungus in intragastric administration for thirty days. The killing activity of NK cells were detected by MTT method, and peritoneal macrophage swallowing C. albicans test was used to appraise

4、 the phagocytes function. The activities of interleukin 1 and interleukin 2 were separately detected by mouse thymocyte or splenic cell proliferation test.ResultsThe activities of IL-1 and IL-2 of mice were 0.549± 0.024, 0.405±0.018 in experimental group respectively; they were 0.341±

5、 0.021 and 0.361±0.011 respectively in control group. They were significantly higher in experimental group than those in control group (P0.01). The killing activity of NK cell and the phagocytes function of the macrophages in vitro were also markedly promoted(P0.01).ConclusionThe black tea fung

6、us can enhance the immunological function of mice significantly.Key words：Black tea fungus; Mice; Immunological function    红茶菌又称“海宝”或“胃宝”，是在我国民间广为流行的一种保健饮品，为我国传统医药的重要组成部分。前期研究中我们发现红茶菌对小鼠具有显著的抑瘤作用，为进一步探讨其抑瘤机制，我们通过用红茶菌对小鼠进行胃内灌注的方法，观察红茶菌对小鼠免疫功能的调节作用。1 材料与方法1.1 动物Balb/c小鼠，体重1822 g，雌

7、雄兼有，引自北京大学基础医学部实验动物研究中心。1.2 细胞株K562细胞由北京大学基础医学部免疫系提供。1.3 试剂红茶菌，本室保存菌种，总菌数为5.5×107CFU/ml，RPMI1640（Gibco公司），LPS（Sigma公司），白色念珠菌（本室保存），ConA（北京医药站），MTT（Sigma公司），DMSO（国产）。1.4 仪器全自动酶标仪（Multiskan MS），CO2培养箱（Forma公司），低速冷冻离心机（IEC公司），电子精密天平（METTLER TOLEDO）。1.5 动物分组随机把Balb/c小鼠分为对照组和实验组，各组15只。对照组以自来水0.5 ml/

8、只，实验组以红茶菌0.5 ml/只，每天胃内灌注1次，第30天颈椎脱臼处死小鼠，进行实验观测。1.6 MTT法测定NK细胞杀伤活性常规取脾脏制成细胞悬液，用不含血清RPMI1640液洗涤2次，以10糞 RPMI1640配成1×106个细胞/ml，作为效应细胞；取连续传代培养的K562细胞悬液各100 l加入96孔平底培养板，再向每孔中加入MTT（5 mg/ml）10 l，每组设3个平行孔，另设3个效应细胞对照孔（100 l上述脾细胞加100 l 10糞 RPMI1640及10 lMTT）和靶细胞对照孔（100 l上述K562细胞加100 l10糞 RPMI1640及10 l MTT）

9、，置37，5%CO2培养箱中4 h，取出后1 000 r/min，离心10 min，测560 nm处A值，计算NK细胞杀伤活性。NK细胞杀伤活性（%）=实验孔A值效应细胞对照孔A值    靶细胞对照孔A值×1001.7 体外巨噬细胞吞噬功能测定各组小鼠于实验第30 d分别腹腔内注射冷RPMI1640液5 ml，轻柔按摩10 s后吸出液体，1 000 r/min离心10 min，弃去大部分上清，留约5 ml，加100 l白色念珠菌液（1×105CFU）混匀，置37恒温培养箱内60 min后混匀涂片，瑞氏染色，计算体外巨噬细胞吞噬百分率1

10、。1.8 IL1和IL2的诱生与检测1.8.1 IL1的诱生无菌操作向小鼠腹腔内注射冷RPMI1640培养液5 ml，轻柔按摩10 s后吸出液体，离心洗涤3次，调整细胞浓度为2×106/ml，加入有丝分裂原LPS（10 U/ml），置37，5%CO2培养箱内诱导36 h，离心取上清为IL12 ，置-20冰箱保存备用。1.8.2 IL1的检测 无菌操作取正常Balb/c小鼠胸腺，制成1×107/ml细胞悬液，取细胞悬液及待检上清各100 l加入96孔细胞培养板中，置375%CO2培养箱中72 h。培养结束时行1 000 r/min离心10 min，弃上清，加入200 l DM

11、SO，在全自动酶标仪波长为560 nm处测定其A值，表示IL1的活性。1.8.3 IL2的诱生 无菌操作制备小鼠脾细胞悬液，用RPMI1640液离心洗涤（1 000 r/min，10 min）3次后以10糞 RPMI1640配成5×106/ml，取100 l加入96孔细胞培养板内，加入ConA（5 g/ml），置37 5%CO2培养箱内诱导36 h，离心取上清为IL22，置-20冰箱保存备用。制备活化脾淋巴细胞：按上述方法取正常Balb/c小鼠脾脏，制成5×106/ml细胞悬液，加入ConA（5 g/ml），置37 5%CO2培养箱内培养48 h，收集细胞，离心洗涤3次，用RPMI1640液配成5×106/ml细胞悬液，作为检测IL2的反应细胞。1.8.4 IL2活性检测取-20冰箱保存的IL2上清及上述反应细胞各100ul加入96孔平底