一氧化氮对肝硬化大鼠肠系膜血管反应的影响

1、    一氧化氮对肝硬化大鼠肠系膜血管反应的影响        实验研究肝硬化大鼠离体肠系膜血管对苯肾上腺素(PE)的收缩反应以及对乙酰胆碱(Ach)、硝普钠(SNP)的舒张反应，以探讨肝硬化血流动力学紊乱的NO机制。材料与方法1.实验动物: SD大鼠，雌雄各半，体重170220g。随机分二组，一组为正常对照组(7只)，另一组为肝硬化模型组，由皮下注射50%CCl4，3天1次，共计10周诱导而成（肝硬化形成经病理证实）。2.试剂: 左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)为美国S

2、igma公司产品，PE由上海第十制药厂生产，Ach由军事医学院药材供应站提供，SNP由北京制药工业研究所实验药厂生产。3.游离肠系膜血管床: 参照文献1。4.实验记录: 经过30min平衡后，于灌流液内加入PE，逐步增加浓度使其终浓度达到约13.3kPa(100mmHg)的灌注压P0（经预试验获得的正常大鼠的肠系膜血管床最大灌注压的50%)；经10min平衡后，分别加入Ach 8×10-10 mol/L及SNP 5×10-9mol/L（经预试验获得的，在PE单独存在时正常大鼠血管最大舒张反应的一半约需的浓度），记录此时的灌注压P1，并计算M值；冲洗掉PE及血管舒张剂，导入L

3、-NAME到基础灌注压，平衡30min后，逐步加入PE到终浓度（达到灌注压P0时的浓度）；再经10min平衡后，分别加入上述剂量的Ach及SNP，记录此时的灌注压，并计算M值（方法同前）。5.统计学处理: 采用t检验。结 果1.正常组及肝硬化组在加入PE后血管张力均增加，但肝硬化组需给予明显高于对照组的浓度才能获得和对照组相同水平的灌注压(表1)。2.加入L-NAME对基础灌注压没有影响，但可增加两组对PE的反应性，表现为达到相同灌注压水平所需的PE浓度降低。肝硬化组PE的浓度降低幅度更大。但是L-NAME仍不能完全纠正肝硬化组对PE的反应性，表现为肝硬化组需给予明显增高于对照组的PE的浓度(

4、表1)。3.在L-NAME存在时，加入Ach，两组的血管舒张反应较单独用PE时均明显减弱，减弱的程度两组之间并无明显差异(表2)。4.加入SNP，在L-NAME存在时，两组的舒张反应较单独用PE均明显增强，但肝硬化组的血管舒张反应明显弱于对照组，表现为肝硬化组M值明显低于对照组(表2)。讨 论研究表明肝硬化时外周血管对缩血管因子的反应性下降。加入NOS抑制剂L-NAME后两组对PE的敏感性则增加，表明内脏血管NO的生成对基础张力起重要调节作用。但是，较高的L-NAME浓度(30mol/L)还不能完全纠正该低反应，提示肝硬化时NO活性增强可能不是唯一的解释。在给予L-NAME后，血管对SNP的舒

5、张反应增强。有研究认为这是由于L-NAME致NO缺乏使血管平滑肌cGMP高水平调节，引起血管对直接的NO供体SNP的反应性增强2。而肝硬化组舒张反应较对照组弱，考虑这与肝硬化时cGMP长期暴露给平滑肌诱导的NO致活性降低有关3。实验提示肝硬化时肠系膜血管内皮NO合成基本不变。表明可能有内皮诱导的超极化因子通过K+通道的激活，对Ach引起的肠系膜血管舒张反应起作用。实验表明NO在肝硬化血流动力学紊乱中起重要作用，但内皮依赖的血管舒张因子Ach的实验数据不支持肠系膜血管内皮NO合成增强，是否存在于其它外周血管床或肝硬化患者还不清楚。作者单位：430030武汉，同济医科大学附属同济医院肝病研究所参

6、考 文 献1 McGregor DD. The effect of sympathetic nerve stimulation on vasoconstictor responses in perfused mesenteric vessels of the rat. J Physiol, 1965, 171: 21-50.2 Raleric V, Methie RT, Alexander B, et al. NG-Nitro-L-arginine methyl ester attenuates vasodilator response to acetylcholine but enhance

7、s those to sodium nitroprusside. J Pharm Pharmacol, 1991, 43: 871-874.3 Tsuchida S, Hitaoka M, Sudo M, et al. Attenuation of sodium nitroprusside responses after peolomnged incution of rat aorta with endotoxin. Am J Physiol, 1994, 267: H2305-H2310.表1正常及肝硬化大鼠肠系膜血管对PE的收缩反应(±s)基础压PEPE+L-NAME(30mol

8、/L)组别PE(mol/L)灌注压(kPa)PE(mol/L)灌注压(kPa)PE(mol/L)灌注压(kPa)对照组02.60±0.4419.4±3.513.09±0.720.9±0.6#13.45±0.69肝硬化组02.30±0.5236.3±7.6*12.25±0.744.0±3.0*#12.69±0.97与对照组比较 *P<0.01, *P<0.05， 与单独用PE比较#P<0.01 表2正常及肝硬化大鼠肠系膜血管对Ach及SNP的舒张反应(±s)AchSNP组别PEPE+L-NAMEPEPE+L-NAME对照组M值(%)52.0±6.226.3±6.0#51.1±8.180.9±7.3#肝硬化组M值(%)47.5±6.722.9