甘桔汤总皂苷抗炎作用研究

1、    甘桔汤总皂苷抗炎作用研究            作者：时间：2007-11-22 13:55:00                            

2、0;                 作者：齐云 沈映君 王文魁 蔡润兰    【关键词】  慢性炎症模型  【摘要】 目的 探讨甘桔汤总皂苷在抗炎方面具有的作用及其作用特点。方法 采用多种非特异性炎症模型对甘桔汤总皂苷抗炎作用进行评价。结果 甘桔汤总皂苷对多种急性炎症作用明显，但对慢性炎症作用却并不突出。结论 甘桔汤总皂苷是甘桔汤宣肺利咽的主要物质基础，其抗炎作用是肯定的。 关键词 甘

3、桔汤总皂苷 炎症 急性炎症模型 慢性炎症模型【Abstract】 Objective To study the effect and characteristic of Ganjietang total saponins（simply called as GJTTS）on the anti-inflammation.Methods Using several types non-specific inflammation models，we focused on the anti-inflammation effect of GJTTS.Results The experiment resul

4、ts indicate that the GJTTS could obviously inhibit oedema and infiltration of acute inflammation models.But it hasnt obvious anti-inflammation effect on chronic inflammation models.Conclusion GJTTS is main substances in Ganjietang that have effect on Xuanfeiliyan，its anti-inflammation effect is obvi

5、ous.Key words ganjietang total saponins（GJTTS） inflammation acute inflammationmodel chronic inflammation model甘桔汤原名桔梗汤，出于汉代张仲景伤寒论，主要用于治疗少阴咽痛。该方后世多称甘桔汤，为中医临床治疗咽喉肿痛的祖剂，后代以此为基础方加味化裁的方剂不胜枚举。而从现代医学的角度审视，咽喉肿痛多与咽喉部急慢性炎症有直接关系，作为中医治疗咽喉肿痛的祖剂，该方是否具有抗炎的药理作用，是中医临床关心的问题之一。尽管作为单味药的甘草和桔梗，其药理研究的报道不少，且发现甘草桔梗均有较明显的抗炎作

6、用，但对甘桔汤的药理药化研究却不多，涉及全方有关抗炎作用的研究尚未见报道，为阐明甘桔汤宣肺利咽的现代药理作用及其发挥作用的主要物质基础，我们对该方的总皂苷进行了较为全面的抗炎作用进行了观察。1 材料1.1 实验药物 甘草（Glycyrrhiza inflata Bat.）及桔梗（Playcldon grandiflorum（Jacq）A.DC.）均购自成都市荷花池中药材市场，按甘草桔梗1:2比例混合，温水浸泡30min，水煎煮3次，每次2h，合并水提液，纱布初滤后，离心（2000rpm，5min），上清液加入已预处理的D 101 大孔吸附树脂，以蒸馏水洗至流出液近无色，再以80%乙醇洗脱至无皂

7、苷反应，收集乙醇洗脱液，减压回收，水浴挥干，置6080烘箱干燥至恒重，得甘桔汤总皂苷（GJTTS）（其中，桔梗皂苷按1995版药典薄层色谱法作定性检测，甘草酸含量用HPLC法作定量检测，结果总皂苷中甘草酸含量为33.98%）。临用时用生理盐水配制成所需浓度。1.2 动物 昆明种雄性小鼠，体重1822g或2325g，SD雄性大鼠，体重160200g，国家医药管理局四川抗生素工业研究所提供，动物合格号为川实动物管第83号。1.3 试剂 角叉菜胶为Sigma公司产品，磷酸组织胺，中国科学院上海生物化学研究所，依文思蓝，Fluka进口分装。总蛋白测定药盒，元生生物科技股份有限公司。其他试剂为国产分析纯

8、。2 方法与结果2.1 对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响 1 雄性小鼠按体重随机分为5组（分组见表1），每组动物连续灌胃给药5天，正常对照组给予相同体积的生理盐水。末次给药后30min，在每小鼠在后足跖皮下注射1%角叉菜胶（1%角叉菜胶、99.0%生理盐水）0.03ml，4h后沿踝关节上的观察致炎前后标记线剪下左右后足，以左右足重量差为足肿胀度，结果见表1。表1 甘桔汤总皂苷对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响 注:与对照组比较， P<0.05， P<0.01，以下同2.2 对组织胺所致小鼠足肿胀的影响（容积法） 2 雄性小鼠按体重随机分为5组（分组见表2），每组动物连续灌胃给药5天，正常对照

9、组给予相同体积的生理盐水。试验前在各鼠左后足处作标记，用小鼠容积测定仪测定各鼠足容积两次，取平均值作为各鼠给药前正常足容积。末次给药后30min在每小鼠左后足跖皮下注射0.2%磷酸组织胺0.03ml，于致炎后30、60、90、120min测定各鼠左后肢足跖容积，观察致炎前后小鼠足容积变化值，以足肿胀度（致炎前后肿足体积差值）表示药物的抗炎效果。结果见表2。2.3 对蛋清致大鼠足肿胀的影响（容积法） 2 雄性Wistar大鼠按体重随机分为5组（分组见表3），每组动物连续灌 胃给药2次，正常对照组给予相同体积的蒸馏水。未次给药（试验第二天）前在各鼠左后足处作标记，用大鼠容积测定仪测定各鼠足容积两次

10、，取平均值作为各鼠给药前正常足容积。每组大鼠灌胃给药，各组给药后30min于动物左后足跖皮下注射10%新鲜鸡蛋清溶液（10%蛋清、90%生理盐水）0.1ml，分别于致炎后30、60、120、180、240和300min测定各鼠左后肢足容积，观察致炎前后大鼠足容积变化值，以足肿胀度（致炎前后肿足体积差值）表示药物的抗炎效果。结果见表3。表2 甘桔汤总皂苷对组织胺致小鼠足肿胀的影响 表3 甘桔汤总皂苷对蛋清致大鼠足肿胀的影响 2.4 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 2 雄性小鼠按体重随机分为5组（分组见表4），除地塞米松腹腔注射给药外，其余各组动物连续灌胃给药3天，正常对照组给予相同体积的生理盐水。

11、末次给药后60min将30l二甲苯涂于小鼠左耳廓两面致炎，右耳不涂为对照，致炎后45min处死小鼠，用直径8mm的打孔器在两耳对称位置取下左右耳片称重，以左右耳片重量差作为耳肿胀度，计算肿胀抑制百分率。结果见表4。表4 甘桔汤总皂苷对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 2.5 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 3 雄性小鼠按体重随机分为5组（分组见表5），每组动物连续灌胃给药3天，正常对照组给予相同体积的生理盐水。末次给药后1h，各鼠尾静脉注射2%依文思蓝溶液（NS配制）0.1ml/10g体重，同时腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只，20min后处死小鼠，用6ml生理盐水注入腹腔，收集冲洗液，300

12、0rpm15min，取上清液于723分光光度计590nm处比色，以吸光度（OD）值判断小鼠腹腔毛细血管的通透性。结果见表5。表5 甘桔汤总皂苷对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 2.6 对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响 3 雄性小鼠按体重随机分为5组（分组见表6），每组动物连续灌胃给药3天，正常对照组给予相同体积的生理盐水。末次给药后1h，各鼠尾静脉注射1%依文思蓝溶液（NS配制）0.1ml/10g体重，随即于小鼠腹部正中部位脱毛区滴二甲苯40l，20min后小鼠脱颈椎致死，剥下腹部蓝染皮肤，用直径1.2cm打孔器取下等面积蓝染皮肤，剪碎放入盛有4ml丙酮-硫酸钠提取液的具塞玻璃试管内，置暗处放置，

13、每日轻摇23次，3日后3000rpm15min，取上清液于723分光光度计590nm处比色，以吸光度（OD）值判断小鼠腹腔毛细血管的通透性。结果见表6。表6 甘桔汤总皂苷对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响 2.7 对角叉菜胶致大鼠急性胸膜炎模型 4 胸腔渗出液量、 蛋白渗出量、WBC数和分类及胸膜组织形态的影响 取健康雄性大鼠38只，按体重随机分为5组分（分组见表7），每组动物连续给药7天，正常组及模型组给予等体积生理盐水，于未次给药30min后，模型组及各给药组动物分别用乙醚轻度麻醉后，向右胸膜腔内注入1%角叉菜胶0.2ml/100g体重，正常对照组注入等体积生理盐水，致炎后4h各组动物灌胃给予相应药物或生理盐水。8h后断头处死，用吸管将胸膜腔内全部渗出液吸出，再以无钙镁Hank液2ml冲洗胸腔，冲洗液与渗出液合并，作白细胞计数及分类，然后将渗出液离心，取0.5ml上清液按总蛋白药盒说明书方法对蛋白进行定量测定，结果见表7，8。表7 甘桔汤总皂苷对角