积雪草提取物对胃粘膜的保护作用及其机制探讨

1、    积雪草提取物对胃粘膜的保护作用及其机制探讨        【摘要】目的观察积雪草提取物(TCA)对胃粘膜损伤的防治作用及其可能的机制。方法采用大鼠胃损伤模型，测定损伤指数、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、细胞因子、胃粘膜细胞存活率等。结果(1)TCA对乙醇胃粘膜损伤具有预防作用；(2)对乙酸胃溃疡具有治疗作用；(3)可以降低MPO、MDA、IL-8的产生；(4)可以增加胃粘膜细胞的存活率。结论(1)TCA对胃粘膜损伤有防治作用；(2)TCA降低血管的通透性及

2、减少MPO、MDA、IL-8；(3)对胃粘膜细胞的直接保护作用可能是其作用机制之一。【关键词】积雪草提取物胃粘膜保护细胞因子 Protection of titracted extract of centella asiatica on gastric mucosa and its possible mechanismCHEN Baowen, JI Baoan, ZHANG Xuezhi, et al.Department of Gastroenterology and Chinese-West Medicine, First Hosptial, Beijing Medical Univers

3、ity, 100034【Abstract】ObjectiveTo study the gastric mucosal protective effect of titracted extract of centella asiatica (TCA) and its possible mechanism in rats. MethodsTo adopt gastric damage models in rats; detect damage index; myloperoxidase (MPO); malonaldehyde (MDA); cytokines; gastric mucosal c

4、ell viability etc. Results(1)TCA could prevent gastric mucosal damage from ethanol; (2) TCA could exert therapeutic effect on gastric ulcer induced by acetic acid; (3) MPO, MDA, IL-8 were all decreased and gastric mucosal cell viability increased. Conclusion(1)TCA has preventive and therapeutic effe

5、cts on gastric mucosal injury; (2) TCA reduces vascular permeability MPO, MDA and IL-8; (3)TCA has direct protective effect on gastric mucosal cell, one of its mechanism may be cytoprotection.【Key words】TCAGastric mucosal protectionCytokines积雪草(centella asiatica,TCA)的提取物是一种含有多种香树脂醇型的三萜物质，其中有积雪草甙、积雪草

6、酸、积雪草糖等多种成分。椐中药大词典记载：它具有抗菌、改善微循环、刺激血管增生和促进结缔组织生长的作用。本文旨在探讨其对胃粘膜损伤的防治作用及其机理，为寻找新的胃粘膜保护剂提供理论基础。 材料与方法一、材料积雪草提取物(1g提取物=10g生药)由军事医学科学院提供。血小板活化因子(PAF)购于Sigma公司。Wistar大鼠由北京医科大学动物实验中心提供。二、胃粘膜损伤动物模型制作与实验方法(一)乙醇致胃粘膜损伤动物模型参照Tanaka1的方法制作，以观察TCA对胃粘膜损伤的预防作用；乙酸烧灼胃溃疡模型是根据Konturek2介绍的方法，制作成功后，分别饲以不同剂量的TCA，观察对溃疡的治疗作

7、用。幽门结扎模型用以观察TCA对胃液分泌和胃液酸度的影响。(二)TCA对PAF所致的血管通透性的影响：将大鼠随机分为实验组和对照组，胃内灌服TCA(100mg/kg)或生理盐水，1小时后尾静脉同时注射PAF 2ng/kg和Evans蓝20mg/kg，15分钟后脱颈处死，测定胃组织中Evans蓝的含量表示血管通透性。含量高者示血管通透性增加3。(三)胃粘膜MPO、MDA、氨基己糖4按文献介绍的方法测定，IL-6、IL-8和TNF用ELISA或放免测定法。(四)TCA对离体大鼠胃粘膜上皮细胞的保护作用，参照李铁的方法5。(五)TCA对血小板聚集率的影响：将分离的兔血小板悬浮于血小板悬浮液中，调整血

8、小板数目至4.0×105/mm，取血小板悬浮液300l，37，预温5分钟，开动自动平衡血小板聚集仪搅拌开关，加入不同剂量的PAF标准品，测定血小板聚集率。预先加入PAF拮抗剂金纳多(ginaton)或TCA，再加入PAF，以测定它们对PAF引起的血小板聚集的影响。三、统计学方法数据表示方法为平均值±标准差，两组均数间比较采用t检验或方差分析，多组均数间比较采用q检验。结果一、TCA对胃酸分泌的影响TCA(100mg/kg)对大鼠幽门结扎4小时后胃液量、胃液酸度及胃酸排出量有增加的趋势，但与对照组相比差异无显著性。二、TCA对乙醇致胃粘膜损伤的作用(一)TCA对乙醇致损伤模型

9、中溃疡指数(ulcer index, UI)，髓过氧化物酶(MPO)，丙二醛(MDA)，氨基己糖(hexosamine, HEX)的影响：TCA可明显降低乙醇所致的胃粘膜损伤，胃粘膜活性MPO、MDA含量也较对照组明显降低，氨基己糖无明显变化。(二)TCA对乙醇致胃粘膜损伤中IL-6、IL-8的影响：TCA(100mg/kg)处理组胃粘膜的IL-8含量为(95.80±6.85)ng/100，较对照组(165.56±17.37)ng/100明显降低，IL-6与对照组相比差异无显著性。三、TCA对乙酸所致胃溃疡的治疗作用(一)溃疡直径及溃疡面积：不同剂量

10、的西咪替丁对乙酸所致胃溃疡治疗2周后，TCA 50mg组、TCA 100mg组及西咪替丁组溃疡直径及溃疡面积较对照组明显减少(表1)。表1TCA对乙酸所致胃溃疡直径及溃疡面积的影响组别例数溃疡直径(mm)溃疡面积(mm2)对照组73.5±0.4110.41±2.26TCA50mg62.23±0.28*4.22±1.14TCA100mg71.86±0.24*2.97±0.76西咪替丁81.43±0.35*2.19±0.89*与对照组相比P0.05；与对照组相比P0.001(二)TCA治疗2周对MPO、MDA、HEX、

11、细胞因子的影响：TCA 50mg.kg-1.d-1、TCA 100mg.kg-1.d-1治疗胃溃疡2周后，MPO及MDA、IL-8的含量与对照组相比明显减低(P0.05)。不同治疗组治疗2周后胃粘膜中的氨基己糖、IL-6的含量与对照组相比差异无显著性(表2)。表2TCA治疗2周对MPO、MDA、HEX的影响组别例数MPO(g/100)MDA(nmol/)HEX(g/)IL-6(ng/100)IL-8(ng/100)对照组7241.29±23.59187.93±14.2067.11±10.24105.53&

12、#177;12.89135.42±7.29TCA 50mg6103.64±13.86?92.49±20.66?51.09±8.5586.54±10.1981.08±6.37?TCA 100mg780.16±15.31105.79±12.73?48.69±3.6196.25±10.1487.77±4.23?西咪替丁8121.12±24.42?166.81±21.4856.76±5.20122.44±17.5192.26±7.43?*与对照

13、组相比P0.05四、TCA对PAF所致的血管通透性的影响TCA(100mg/kg)可明显减低PAF所致的血管通透性的增加。与对照组相比差异有显著性(P0.05)。五、TCA对离体胃粘膜上皮细胞的保护作用培养基中加入终浓度为100g/ml的TCA即可减轻5%的乙醇对胃粘膜细胞的损伤(1)。1TCA对离体胃粘膜上皮细胞的保护作用*与5%乙醇组相比差异有显著性(P0.001)六、TCA对血小板聚集率的影响TCA不但对PAF引起的血小板聚集率无抑制作用，反而增强PAF所致的血小板聚集，PAF拮抗剂金纳多对PAF所致的血小板聚集有明显的抑制作用。讨论积雪草，性微寒，味苦辛无毒，具有清热解毒、清肝凉血、除

14、湿利水之功能，药用全草，赤木正志等发现从积雪草中提取的积雪草苷有促进肉芽组织再生和表皮形成的作用，并在临床上治疗烧伤、带状疱疹中被得到确认。动物实验证实，积雪草煎剂能减少大鼠幽门结扎溃疡与应急性溃疡的溃疡面积，但不减少幽门结扎大鼠胃液分泌。Chatterjee6等发现积雪草提取物明显抑制大鼠冷冻束缚应急性溃疡的形成。我们研究了积雪草提取物(主要成分为三萜皂甙)及其对多种胃损伤的保护作用及其机制。结果发现：积雪草提取物对大鼠幽门结扎4小时后胃液分泌量、胃液酸度及胃酸排泌量不但不减少反而有增加的趋势，说明保护作用不是通过抑制胃酸分泌起作用的。TCA可明显减低乙醇所致的胃粘膜损伤。IL-6在正常组织

15、及炎症组织中均有，与胃炎活动程度无关，可能其具有抗炎作用7。IL-8与胃粘膜炎症程度明显相关8。MPO是中性粒细胞的标志酶，而中性粒细胞浸润程度是炎症活动的标志，可以反映炎症活动的程度。MDA是长链脂肪酸发生氧化作用后的终末产物，可作为氧化作用后的标志，其含量能反映氧自由基的含量。氧自由基在粘膜损伤中起重要作用9。中性粒细胞浸润程度及氧自由基形成在TCA处理组明显低于对照组，而对胃粘膜无明显保护作用。为研究TCA对溃疡的治疗作用，我们用不同剂量的TCA对乙酸所致胃溃疡进行治疗，用生理盐水和西咪替丁做对照，治疗2周后发现50mg及100mg组对溃疡具有治疗作用，与西咪替丁组无明显差别。血小板活化

16、因子(PAF)能趋化并激活中性粒细胞，损伤血管引起血管通透性增加，导致胃粘膜损伤。我们观察到预先用TCA灌胃能明显减低胃粘膜组织中Evans蓝的含量，说明TCA具有减低血管通透性的作用。但是，TCA在体外并不减低PAF引起的血小板聚集率，反而增加PAF引起的血小板聚集。因此，TCA对PAF所致的胃粘膜损伤的预防作用可能不是通过减低血小板的聚集起作用的，其原因尚有待进一步研究。胃粘膜保护的概念从总体上看可分为两种：一种为器官保护或组织保护，其机制在于通过抑制攻击因子的产生或增强防御因子的功能，从而在整体上产生胃粘膜保护作用；另一种称为细胞保护，可在细胞水平上直接减轻损伤因子的攻击，提高细胞抵抗力

17、5。我们用不同浓度的TCA预先处理细胞，然后5%的乙醇造成胃粘膜细胞损伤，结果表明100800g/ml的积雪草能提高细胞存活率，并且呈剂量相关性，提示TCA在体外对胃粘膜细胞具有直接的保护作用。直接的细胞保护作用可能是TCA对胃粘膜细胞损伤有防治作用的机制之一。国家自然科学基金资助课题(39570888)作者单位：100034北京医科大学第一医院参考文献1. Tanaka T, Morioka Y, Gebert U. Effects of a novel xanthine derivative on experimental ulcers in rats. Drug Res, 1993, 4

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