精编啤酒厂化验室设计

1、（精编）啤酒厂化验室设计广西工业职业技术学院设计说明书课题名称：啤酒厂微生物实验室设计姓名：廖国旭专业：食品药品监督管理班级：药监1031班起止日期：指导教师：韦丽刖言设计化验室目的在于对啤酒原辅料及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标， 提高质量安全和达 到食品可接受水平，保证饮品质量，维护消费者权利，为企业提供有力销售保障， 使企业强有力的立足于世界市场。化验室基本任务是对啤酒原辅料、 半成品及成品进行检验，确保啤酒的质量 与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标， 提高质量安全 和达到食品可接受水平，保证饮品质量。化验室功能

2、是为啤酒的质量提供有效的保障，让啤酒达到消费者可接受水平，保证啤酒质量，通过工作人员运用精密的检测仪器设备对啤酒进行检验与验证，以合格的身份进入销售市场，让消费者买的放心喝得开心。化验室主要由理化实验室、微生物室、值班室、办公室、仪器室、天平室、 更衣室、洗涮室、缓冲间、无困室、准备室摘要对于啤酒生产来说，质量检验的重要性是不言而寓的。化验室应该摆脱仅仅进行 化验的狭隘定义，而要为啤酒生产的各个工序提供指导， 对啤酒质量进行有效的 控制。为保证分析结果的准确性，就要从多个方面对化验室进行建造， 建立合理 完善的管理制度。本分析化验室主要担任本厂所有原料、半成品及成品的检测 ，起到控制和管理生

3、产，保证和监督本厂生产的味精的质量和卫生指标的作用，也为开发新产品、制定 合理的工艺参数提供数据依据本分析化验室主要包括：办公室、仪器室、试剂室、 理化实验室、准备室、微生物检验室.啤酒厂分析化验室的主要任务是对原材料分析、 半成品化验分析、成品化验分析 起到控制和管理生产，保证和监督食品质量和卫生指标作用。 在成品成厂时，必 须对出厂的各规格啤酒，经过检验，各理化指标、技术质量均要符合卫生标准， 以保证人民健康和商品信誉。本分析化验室的整体目标是完成对原料、 辅料、半成品及成品的检测和质量 控制，保证产品的质量。并对新产品、新工艺的开发。1.啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准41.2原料

4、的检测项目及标准 41.3半成品检测项目及标准 41.4成品检测项目及标准 52啤酒原料、半成品及成品的检测方法62.1啤酒原料的检测方法 62.2啤酒半成品的检测方法72.3啤酒成品的检测方法 7-233. 试剂和仪器清单243.1试剂清单253.2玻璃仪器清单 263.3设备清单273.4化验室的月试剂消耗量 274. 化验室的平面布置图及设计说明 284.1化验室设置294.2化验室的平面布置图 304.3设计说明（包括水、电、平面布置说1明）315. 化验室人员配制和组织管理326. 化验室的岗位责任制347. 参考文献368. 谢辞361.啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准1.1

5、啤酒半成品检测项目及标准序号微生物检验检测标准1致病菌、厌氧菌不得检出2乳酸菌数>1 X106cfu/mL1.2啤酒成品检测项目及标准序号微生物检测项目检测标准1菌落总数<502大肠困群<33致病菌不得检出2.啤酒半成品及成品的检测方法2.1半成品2.1.1酵母死活细胞（死亡率）的测定活的菌体，由于新陈代谢不停的进行着，细胞内氧化还原值（ rH ）较小，而还原力强。这时如有像美蓝那样的无毒染料进入活的细胞内，即被还原脱色： 而死的细胞代谢停止，无还原力，即被染成蓝色。美蓝无毒，且能为活细胞还原 成无色故多用于区别细胞的死活。 但美蓝浓度、作用时间等都用影响，因此以制 片后五分

6、钟内计算的死细胞数为据。检查方法：取0.1%美蓝一滴，置载玻片中央，然后去酒母液少许和入美蓝液中， 搅拌均匀，加盖玻片，在显微镜下检查数已变蓝的细胞及未变蓝的细胞（可数 56个视野的细胞数），计算死细胞占总细胞数的百分率。死亡率的计算：酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞数的百分数，在显微镜下数一定的细胞数，并记录死活细胞数，按下式计算死亡率死亡率=b/a%2.2成品2.2.1志贺氏菌检验221.1范围本标准规定了食品中志贺氏菌（Shigella）的检验方法。本标准适用于食品中志贺氏菌的检验221.2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a恒温培养箱：36

7、 C±C；b冰箱：2 C5 C；c膜过滤系统；d厌氧培养装置：41.5 C± 1 C；e电子天平：感量0.1g ；f显微镜：10 x100 X；g均质器；h振荡器；i无菌吸管：1mL （具0.01mL刻度）、10mL （具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；j无菌均质杯或无菌均质袋：容量 500mL ；k无菌培养皿：直径 90mm ；IpH计或pH比色管或精密pH试纸；m全自动微生物生化鉴定系统。2.2.1.3培养基和试剂a志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素。b麦康凯（MAC ）琼脂。c木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂。d志贺氏菌显色培养基。e三糖铁（TSI）琼脂 f营养琼脂斜面

8、。g半固体琼脂。h葡萄糖铵培养基。i尿素琼脂。j禺半乳糖苷酶培养基。k氨基酸脱羧酶试验培 养基。l糖发酵管。m西蒙氏柠檬酸盐培养基。n粘液酸盐培 养基。o蛋白胨水、靛基质试剂。p志贺氏菌属诊断血清。q生化鉴定试剂盒。221.4操作步骤221.5增菌以无菌操作取检样25g （mL），加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的 均质杯，用旋转刀片式均质器以 8000r/mi n10000r/mi n 均质；或加入装有 225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min2min , 液体样品振荡混匀即可。于41.5 C±1C，厌氧培养16h20h。2.2.1.6 分离取增菌

9、后的志贺氏增菌液分别划线接种于 XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36 CC培养20h24h ,观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表 1。表1志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贺氏困的困洛特征MAC琼脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定221.7初步生化试验221.8

10、自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种 TSI、 半固体和营养琼脂斜面各一管，置 36 C C培养20h24h，分别观察结果。2.2.1.9凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗 糖）、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无 动力的菌株，挑取其2.2.1.6中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化 试验和血清学分型。2.2.1.10生化试验及附加生化试验2.2.1.11生化试验用2.2.1.8中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即B-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验

11、。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性；宋内氏菌和痢疾志贺氏菌 1型，鲍氏志贺氏菌13型的B-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌 属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏 菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验， 也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验， 应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。 生化 反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集， 仍不得判定为志 贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表 2。表2志贺氏菌属四个群的生化特征生化反应A群：痢疾B群：福氏C群：鲍氏D群：宋内志贺氏困志贺氏困志贺氏困氏志贺氏菌?-半

12、乳糖a-a+苷酶尿素一一一一赖氨酸脱羧一一一一酶鸟氨酸脱羧一一b+酶水杨苷一一一一七叶苷一一一一靛基质/ +(+)一 / +一甘露醇一+ c+棉子糖一+一+甘油(+)一(+)d注：+表示阳性；-表示阴性；-/+表示多数阴性；+/-表示多数阳性；（+ ）表示迟缓阳性；d表示有不同生化型。a痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。c福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。221.12附加生化实验由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（an aeroge ni cE.coli ）、A-D（Alkalesce ns-Disparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志

13、贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验（36 °C培养24h48h）。志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。表3志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别生化反A群：痢B 群:福C群：鲍D群：宋大肠埃A-D菌应疾志贺氏志贺氏志贺内氏志希氏菌氏菌氏菌氏菌贺氏菌葡萄糖一一一一+铵西蒙氏一一一一dd柠檬酸盐粘液酸一一一d+d盐注1 : +表示阳性；-表示阴性；d表示有不同生化型。注2 :在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌

14、、A-D （碱性-异型）菌至少有一项反应为阳性。221.13如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据表3的初步判断结果，用4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试 剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。2.2.1.14结果报告综合以上生化试验的结果，报告 25g （mL）样品中检出或未检出志贺氏菌。2.2.3沙门氏菌检验2.2.3.1 范围本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella ）的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2.2.3.2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1 ）冰箱：2 C5C。2）恒温培养箱：36

15、 C±C，42 C±C。3 ）均质器。4 ）振荡器。5）电子天平：感量 0.1g。6）无菌锥形瓶容量500mL， 250mL。7）无菌吸管：1mL （具O.OImL刻度）、10mL （具O.ImL刻度）或微量移液器及吸头。8）无菌培养皿：直径 9Omm 。9） 无菌试管：3mm X50mm、10mm X75mm。10 ）无菌毛细管。11 ） pH计或pH比色管或精密pH试纸。12 ）全自动微生物生化鉴定系统。2.2.3.3 培养基和试剂1 ）缓冲蛋白胨水（ BPW）。2）四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。3）亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液。4）亚硫酸铋（BS）琼脂。5）HE 琼

16、脂。6）木糖赖氨酸脱氧胆盐（ XLD ）琼脂。7）沙门氏菌属显色培养基。8）三糖铁（TSI）琼脂。9）蛋白胨水、靛基质试剂。10）尿素琼脂（ pH7.2 ）。11 ）氰化钾（KCN ）培养基。12 ）赖氨酸脱羧酶试验培 养基。13 ）糖发酵管。14 ）邻硝基酚B-D半乳糖苷（ON MG ）培养基。15 ）半固体琼脂16 ）丙二酸钠培养基。17）沙门氏菌0和H诊断血清。18 ）生化鉴定试剂盒。2.3.3.4 操作步骤2.3.3.4.1 前增菌称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW 的无菌均质杯中，以8000r/min 10000r/min 均质1min2min ,或置于盛有225mLBP

17、W 的无菌均质袋中，用 拍击式均质器拍打 1min 2min 。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需 测定 pH 值，用 1mol/mL 无菌 Na0H 或 HCl 调 pH 至 6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 °C ±C培养8h18h。如为冷冻产品，应在45 C以下不超过15min,或2 C5 C不超过18h解冻。2.3.3.4.2 增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1mL，转种于10mLTTB内，于42 C± 1C培养18h24h。同时，另取1mL，转种于10mLSC内，于36 C&

18、#177;1 C培养 18h 24h 。2.3.3.4.2 分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂 平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36 C±1 C分别培养 18h24h （XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或40h48h（BS 琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落 ,各个平板上的菌落特征见表 1表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂困洛为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，困洛周围培养基可 呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不 变。HE琼脂监绿色或监色，多数困

19、洛中心黑色或几乎全黑色；有些困株 为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂困洛呈粉红色，带或不带黑色中心，有些困株可呈现大的带 光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色 困洛，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。23343生化试验自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在 斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌 ，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基 和营养琼脂平板，于36 C±C培养18h24h，必要时可延长至48h。在三糖 铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖

20、氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶试验培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA +(-) + (-)+可疑沙门氏菌属KA +(-) + (-)-可疑沙门氏菌属AA +(-) + (-)+可疑沙门氏菌属AA + / + / 非沙门氏菌KK+ / - + / + / 非沙门氏菌注：K:产碱，A:产酸；+:阳性,:阴性； + ( ):多数阳性，少数阴性；+ / :阳性或阴性。接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2 )、氰化钾(KCN)培养基，也可在初步判断结 果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 C±

21、C培养18h24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于 2 C5 C或室温 至少保留24h，以备必要时复查。表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表反应序号硫化氢(H2S)靛基质pH7.2 尿素氰化钾(KCN)赖氨酸脱羧酶A1+A2+A3+ / 注：+阳性；一阴性；+ / 阳性或阴性。反应序号A1 :典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。表4沙门氏菌属生化反应初步鉴别表pH7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶判定结果甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）+沙门氏菌W或V（要求符合本群生化特

22、性）+一+沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）注：+表示阳性；+表示阴性。反应序号A2 :补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结 果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应序号A3 :补做ON MG。ON MG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性 甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴别。表5沙门氏菌属各生化群的鉴别项目InIVV卫矛醇+一一+一山梨醇+一水杨苷一一一+一一ON MG一一+一+一丙二酸盐一+一一一KCN一一一+一注：+表示阳性；一表示阴性。如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据541的初步判断结果，从

23、营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液， 使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。233.5结果与报告综合以上生化试验的结果，报告 25g （mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。2.2.4金黄色葡萄球菌检验2.241设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36 C±C。、冰箱：2 C5 C、恒温水浴箱：37C65 C、天平: 感量0.1g、均质器、振荡器。无菌吸管：1mL （具O.OImL刻度）、10mL （具0.1mL刻度）或微量移液器及 吸头。无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。无菌培养皿：直径90mm。

24、注射器：0.5mL。pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.2.4.2培养基和试剂10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤。7.5%氯化钠肉汤。血琼脂平板。Baird-Parker 琼脂平板脑心浸出液肉汤 (BHI) 。兔血浆。稀释液：磷酸盐缓冲液。营养琼脂小斜面。革兰氏染色液。无菌生理盐水2.2.4.3 操作步骤2.2.4.3.1 样品的处理称取 25g 样品至盛有 225mL7.5% 氯化钠肉汤或 10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min 10000r/min 均质1min2min，或放入盛有225mL7.5% 氯化钠肉汤或 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中， 用拍击 式均质

25、器拍打 1min 2min 。若样品为液态，吸取 25mL 样品至盛有 225mL7.5% 氯化钠肉汤或 10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶 (瓶内可预置适当数量的 无菌玻璃珠 )中，振荡混匀。2.2.4.3.2 增菌和分离培养将上述样品匀液于36 C±C培养18h24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠 肉汤中呈混浊生长，污染严重时在 10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 平板和血平板， 血平板 36C±1C培养 18h 24h。Baird-Parker 平板 36 C±1 C 培养 18h 24

26、h 或 45h 48h。金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上，菌落直径为 2mm 3mm ，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度， 偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落； 但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色 较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、 湿润、金黄色（有时为白色） ，菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进 行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。2.2.4.3.3 鉴定 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞

27、，无荚 膜，直径约为0.5 （jm1。血浆凝固酶试验：挑取、 Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到5mLBHI和营养琼脂小斜面，36 C±C培养18h24h。取新鲜配 置兔血浆 0.5mL ，放入小试管中，再加入 BHI 培养物 0.2mL 0.3mL ，振荡摇 匀，置36 C±1 C温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时， 呈现凝块） 或凝固体积大于原体积的一半， 被判定为 阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对 照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶

28、试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI，36 C±1 C培养18h 48h ，重复试验。葡萄球菌肠毒素的检验： 未检出金黄色可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素 的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录 B 检测葡萄球菌肠毒素。2.2.4.3.4 结果与报告结果判定：符合 5.2.3、5.3，可判定为金黄色葡萄球菌。结果报告：在25g （mL ）样品中检出或葡萄球菌2.2.4 菌落总数2.2.4.1 样品的稀释固体和半固体样品： 称取 25g 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min 10000r/min 均质1min2min，或

29、放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取 25mL 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的 样品匀液。2.2.4.2 检样25g（mL）样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个3个适宜稀释度的样品匀液，各取 1mL 分别加入无菌培养皿内培养计数各平板菌落数计算菌落总数每皿中加入 15mL 20mL平板计数琼脂培养基，混匀报告用 1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1mL ，沿管壁缓慢注于盛有9mL

30、稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面） ，振摇试管 或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。按上述操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次 1mL 无菌吸管或吸头。根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1mL 样品匀液于无菌平皿内，每 个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取 1mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作 空白对照。2.2.4.3 培养琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±CC培养48h ±2h。水产品30 土C培养7

31、2h ±3h 。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时， 可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按621条件进行培养。2.2.4.4 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。选取菌落数在 30CFU300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。 低于 30CFU 的平板记录具体菌落数，大于 300CFU 的可记录为多不可计。每个 稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时， 则不宜采用，

32、 而应以无片状菌落生长的平 板作为该稀释度的菌落数； 若片状菌落不到平板的一半， 而其余一半中菌落分布 又很均匀，即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计 数。2.2.4.5 结果与报告 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内， 计算两个平板菌落数的平 均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g （mL ）样品中菌落总数结果。 计算：1）（式中：N样品中菌落数；UC平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1 第一稀释度）低稀释倍数）平板个数；n2 第二稀释度）高稀释倍数）平板个数；d 稀释因子）第一稀释度

33、） 。若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300CFU ，则对稀释度最高的平板进行计 数，其他平板可记录为多不可计， 结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 若 所有稀释度的平板菌落数均小于 30CFU ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以 稀释倍数计算。若所有稀释度）包括液体样品原液） 平板均无菌落生长，则以小于 1乘以最低稀 释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU300CFU之间，其中一部分小于 30CFU 或大于 300CFU 时，则以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落数乘 以稀释倍数计算。2.2.4.6 菌落总数的报告菌落数小于 100CFU 时，按“四舍五入

34、”原则修约，以整数报告。 7.2.2 菌落数大于或等于 100CFU 时，第 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则 修约后，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告。2.2.5 大肠菌群测定2.2.5.1 范围 木标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。 本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。2.2.5.2 仪器和试剂冰箱:0°C-4 °C。恒

35、温培养箱:36 C士 1C。恒温水浴锅:46 C 士 1 C .显微镜:10X100X。均质器或灭菌乳钵。架盘药物天平 :0g-500g, 精确至 0.5g.灭菌吸管1mL（具0.01mL刻度）,10mL（具0.1mL刻度）。灭菌锥形瓶 :500mL.灭苗玻璃珠 :直径约 5mm.灭菌培养皿 :直径 90mm.灭苗试管：16mm X160mm.灭菌刀 .剪子、摄子等2.2.5.3 培养基和试剂乳糖胆盐发酵管。伊红美蓝琼脂平板。乳糖发酵管。EC肉汤。磷酸盐缓冲液 .0.85% 灭菌生理盐水 .革兰氏染色液。2.2.5.4 操作步骤2.2.5.4.1 检样稀释以无菌操作将检样 25g（mL） 放于

36、含有 225ml ，灭菌生理盐水或其他稀释液的灭茵玻璃瓶内 （瓶内预置适当数量的玻璃珠 ）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成 1：10 的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以 8000r/min10000r/min 的 速度处理 1min ，做成 1 ：10 的均匀稀释液。用 1mL 灭菌吸管吸取 1:10 稀释液 1mL ，注人含有 9ML 灭菌内，振摇试管混匀， 做成 1 ：100 的稀释液。另取 1mL 灭菌吸管，按上条操作依次做 10 倍递增稀释液，每递一次，换用 1 支 1ml 灭菌吸管。根据食品卫生标准要求或对检样污染情汉的估计， 选择三个稀释度，每个稀释度， 接种三管。2.2.5

37、.4.2 乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在 1mL 以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL以及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种三管， 置36 C 士C温箱内，培养24h 士 2h ,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为人肠菌群阴性，如有产气省，则按下列程序进行。2.2.5.4.3 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36 C士 1C温箱内，培养18h-24h ，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。2.2.5.4.4 证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落 1 个2 个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36 C士

38、1 C培养箱内培养24h 士 2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。2.2.5.4.5 报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查 MPN 检索表，报告每 100mL（g） 大肠菌群 的 MPN 值 .2.2.5.4.6 粪大肠菌群 （Faecalcoliform）用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物 （见 4.2）转种于 EC 肉汤管内，置44.5 C 士 0.2 C水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面），培养24h 士 2h， 经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂

39、平板上，置培养18h-24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。2.2.5.5 结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查 MPN 检索表，报告每 100mL （g）粪大肠菌群的MPN值（见表1 ）。表1大肠菌群最可能数（MPN ）检索表阳性管数MPN100 mL (g)95%可信限1mL (g) X30.1mL (g )X30.01mL (g ) X3下限上限000000000123<30306090<590000011110123306090120<51300000222201236090120160000033330123901301601901100014

40、070<51020021010211010315011070102301111103036011215011319012011030360121150122200123240130160131200132240133190200901036020114030370202200203260220210404702212801001500222350223420230290231360232440233530300230401200301390701300302640150380030395032043070210032175014023003221200300380032316003209

41、3015038003211500300440032221003504700323290033024003601300033146007102400033211000150048000333>24000注1 ：本表采用3个稀释度imL(g)、0.1mL(g)和0.01mL(g)，每稀释度三管。注2 :表内所列检样量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍；如改用O.ImL、O.OImL (g)和O.OO1mL(g)时，其余可类推3. 试剂和仪器清单3.1试剂清单试剂名称规格数量蔗糖5OOg2葡萄糖5OOg2D 果糖25g2乳糖5OOg2淀粉酶25Og

42、2胰蛋白酶25Og2琼脂粉1OOg2牛肉膏5OOml2酵母膏5OOml2大豆蛋白胨5OOml2蛋白胨5OOml2胰蛋白胨5OOml2胰酪胨5OOg2植物蛋白胨5OOg2多胨5OOg2氢氧化钠500g2品红25g4异戊醇500ml2乙醇500ml2石蕊25g3乙醚500ml2浓硫酸500ml2甲基红25g4硫酸铜、500g4硫酸钾500g4硼酸250ml4溴甲酚绿25ml2酚酞25ml3盐酸500ml3磷酸500ml23.2玻璃仪器清单仪器名称规格（ml）需要量（个）烧杯100104004锥形瓶250105005漏斗2分液漏斗2镊子4吸管110210510105205255玻璃棒5火困刀或剪子5

43、橡胶管5试管18*18010烧瓶5003酸、碱式滴定管50各3量筒102502100525055002温度计100 C5酒精灯5表面皿中号5平皿90cm100容量瓶10450510010250550023.3设备清单仪器名称型号数量双数显振汤培养相BS-1E 型3烘箱SX2-2.5-10 型5咼压蒸汽火菌锅MLS-3750 型3干热火菌器MOV-112S90L/AT 型5自动菌落计数仪迅数AS1型5微生物米样器JWL-I 型5卧式超低温保存箱MDF-293 型5冰箱西门子KG23E6710°C-4 °C生化培养箱SPX-250B 型 205L4014±1°

44、;C, 25 °C60 °生物显微镜XS2-3G401600X2004143014干燥消毒箱GRX202PH计33.4化验室的月试剂消耗量例：以金黄色葡萄球菌检验中的10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量计算，每次实验所消耗的10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为 225ml,每周做一次检测项目 的10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤使用量为 225ml,则每月使用的10%氯化钠胰酪 胨大豆肉汤使用量为量为900ml，规格为1000ml瓶，折合得使用10%氯化钠 胰酪胨大豆肉汤为0.9瓶.4. 化验室的平面布置图及设计说明4.1化验室设置设计的化验室包括：微生物化验室、办公室、缓冲间、无菌室、

45、天平室、设备室、 更衣室。4.2化验室平面图4.3设计说明4.3.1微生物化验室布局微生物化验室是按2 : 1的比例尺来进行设计的。整个微生物化验室总面积为（长3000cm X宽2000cm ）,化验室操作台坐落在微生物化验室的西南角， 操作台（长1234cm X宽276cm ），操作台两边各设2个水槽，操作台上配有均 质器、水浴锅、通风橱（长 334cm X宽276cm ），有毒或刺激性药物的取用在通风橱内操作，操作台旁电源开关一组，电插座 2个整个化验室的所有门都是防火防腐蚀的 ,门统一规格为 141cm, 向内推开式， 化验室内各功能室采用隔板做墙隔开， 以减小占地面积 ,隔板也为防火防

46、腐蚀的， 采用耐火或不易燃材料建筑；电路电线埋入墙体内，以免遭氧化及腐蚀。4.3.1.1 操作区4.3.1.1.1 整洁：微生物操作区是各种病原菌相对集中的地方 ,为了减少粉尘流动 , 防止交叉污染 ,操作区应与外界分开。操作区地面用专用拖把每天拖1 次,每周用消毒剂擦洗一次。每天早上工作前 ,用紫外线照射 30min ，或每天工作后 ,用紫外 线照射 60min ，对整个操作区进行消毒 ,下午工作结束后用消毒液消毒工作台面 , 以保证工作环境的安全清洁。4.3.1.1.2 光线：细菌培养的细小菌落及血清试验凝聚颗粒的观察,都需要有充足的光线。操作区除设置常规照明灯外，还必须安装操作台灯,以保

47、证试验结果的正确判断。4.3.1.1.3 温度和湿度：由于无菌操作的要求 ,实验过程中经常使用酒精灯，因此 , 微生物学实验室不能安装吊扇。为了达到实验所需的适宜温度,尤其是满足某些仪器对温度湿度的要求 ,实验室应安装空调。4.3.1.1.4 污染物处理： 操作区备有消毒缸 ,用于处理沾有活菌的玻片等污染物品。 检验剩余的标本及使用过的带菌平板、 试管均须集中地点安全防止， 经消毒灭菌 处理后再洗涤或丢弃。4.3.1.2 无菌室布局无菌室面积为（长782cm X宽925cm ）,无菌室温度控制在17 C25 C；温度 波动小于0.5 C /h ;湿度j075%，无菌室完全封闭，进出无菌室至少要

48、经两道门 ,中间隔有缓冲间，无菌室与外间设置一个可开的窗口，用于传递器具。第一缓冲间面积为（长782cm X宽545cm），第二缓冲间面积为（长 782cm X宽230cm ），最后才进到无菌操作室，无菌操作室内还设有无菌操作台 （长782cm X宽 275cm ） ,位于室中间，台面材料为具有耐酸，耐碱以及刚度好的塑料材料， 地板为防滑地被砖、洁净、干燥，室内还应设有空调 ,灭火器。4.3.1.2.1 无菌室必须保持整洁，无菌室为 10000 级（局部 100 级）清洁区，采 用紫外灯配合臭氧灭菌， 工作人员进入无菌室应换专用鞋、 专用衣。 无菌室使用 前必须用紫外线消毒 30min ，操作

49、结束后清洁台面，再用紫外线消毒 30min 。 定期用乳酸或甲醛熏蒸。4.3.2 办公室布局办公室面积为（长782cm X宽725cm ），应设有办公桌（长260cm X宽155cm）、冰箱（长343cm X宽171cm ）、空调、灭火器、桌上摆有电脑、打印 机以及相关的检验书籍和文件等，办公桌旁设电源开关一组，电插座 6 个。4.3.3 天平室布局天平室面积总为（长 741cm X宽750cm ）,天平室有双层玻璃和窗帘，室 内设有灭火器、空调、天平台（长 423cm X宽316cm ），各天平之间有合理的间 距,各不影响 ,天平台旁设电源开关一组，电插座 1 个。4.3.4 设备室布局设备

50、室面积为（长741cm X宽675cm ）,内设有灭菌锅、冰箱、低温保存 箱、培养箱 ,还设有电源插座各一个。4.3.5 更衣室布局更衣室分为男女更衣室，总面积为（长903cm X宽741cm ）,男更衣室（长460cm X宽354cm ）,女更衣室（长460cm X宽387cm ）,男女更衣室间,各设有 小型衣柜（长460cm X宽130cm ），衣杆、水龙头1个、吹风器1台以及酒精 消毒器1台，对工作人员进行工作前消毒。4.3.供电化验室建筑的供电应留有足够的负荷余量， 设施应安全可靠，一般采用双路 供电，不具备双路供电条件的，应设置自备电源。有特殊要求的，应配备不间断 电源。各个实验室配

51、置三相（338v）和单相（220v）供电路线、设置电源总开关、总 开关上均安装上漏电保护措施（对电冰箱、等长期运行电器不受总开关控制），稳定供电电压吗，配置足够供电电源插座，电线路采用护套暗铺，且在走廊配置 防爆灯等。为保障实验室的正常工作，电源的质量、安全可靠性及连续性必需保 证。一般用电和实验用电必须分开，对一些精密、贵重仪器设备 要求提供稳压、 恒流、稳频、抗干扰的电源，必要时须建立不中断供电系统，还要配备专用电， 如不间断电源（UPS）等。4.4供水供水要求为自来水和专用水，水压不够要设有水箱。排水中若有酸性或碱性物质， 要标明浓度和数量；若有放射性物质要注明有多少种放射性物质和浓度。4.5通风实验室经常由于实验时间长，人员多和实验过程中产生一些有害气体，造成空气 污浊，对人体不利。为了防止实验室工作人员吸入或咽入一些有毒的、可致病的 或毒性不明的化学物质和有机气体，实验室中应有良好的通风，必要时应设空调。5. 化验室人员配制和组织管理5.1人员配置：化验室主任、技术负责人、质量负责人、仪器设备管理负责人、试剂管理负责人、检验人员（共10人）5.2 化验室人员管理5.2.1 所有化验员需培训考核合格后持证上岗，熟悉化验专业知识。5.2.2 掌握采取样品的性质，熟悉采样方法，会使用采样工具。5.2.3 掌握分析所用各种标准溶液的配置