微生物复习提纲(完整)

1、应用微生物技术复习提纲1、微生物学的发展史，重要人物所做的突出贡献史前时期：中国古代农民用谷物酿酒（8000年前至1676）初阶阶段：荷兰人列文虎克，准确地描述了微生物的形态。奠基时期：1、巴斯德：微生物学的奠基人。他把微生物学的研究从形态描述推进到生理学研究水平，并开创了寻找病原微生物的兴盛时期，使微生物学开始以独立的学科形成。贡献：（1）曲颈瓶实验彻底否定了 “自然发生”学说；（2）证实了发酵是由微生物引起的。（3）将病原菌减毒，使其转变为疫苗。（狂犬疫苗）2、科赫：（1）发明了固体培养基制备方法,并建立通过了固体培养 分离纯化微生物 的技术；（2）用自创的方法分离了许多病原菌，如炭疽芽抱

2、杆菌、结核分枝杆菌 等;（3）提出了科赫法则”;（4）创立了许多显微镜技术，如细菌鞭毛染色法、悬滴培养法等。发展阶段：1、布赫纳：用酵母菌无细胞压榨汁将 葡萄糖 进行酒精发酵 获得成功,发现了微生物 酶的重要作用，从此将微生物学推进到了生化研究的阶段。此后，微生物生理、生化等研究得到了迅速的发展2、弗莱明：发现点青霉能抑制葡萄球菌的生长，揭示了微生物间的拮抗关系，并发 现了青霉素。2、细菌的形态、细胞结构功能和繁殖方式、生长曲线细菌的形态与结构功能：细菌是具有细胞壁的一类单细胞原核微生物，形体微小，结构简单。无成形细胞核，无核膜和核仁，除蛋白体外无其他细胞器，在适宜的条件下有相对稳定的形态与结

3、构，分布广，种类多，与人关系密切。细菌的形态：通常以微米（Micrometer,um;1um=1/1000mm）作为测量它们大小的单位按其外形主要有三类：1）、球菌：呈圆球形或近似圆球形， 有的呈矛头状或肾状。 单个球菌的直径约在 0.81.2um 左右。又称 化脓性球菌 （1、双球菌，2、链球菌 3、四联球菌和八叠球菌 4、葡萄球菌） 举例：肺炎双球菌，溶血性链球菌，藤黄八叠菌，金黄色葡萄球菌2）、杆菌：各种杆菌的大小，长短，弯度，粗细差异较大。大多数杆菌中等大小，长（2-5微米，宽0.3-1微米）。多数呈直杆状，大的杆菌如炭疽杆菌（35umx 1.01.3um）,小的如野兔热杆菌（0.30

4、.7um X0.2um）。介于球菌和杆菌之间的，称为球杆菌。两端多呈钝圆形， 少数两端平齐（炭疽杆菌）,两端尖细（梭杆菌）末端膨大呈棒状 （白喉杆菌）排列一般 分散存在，无一定排列形式，偶有成对或链状，（枯草芽抱杆菌）,呈链状，个别呈特殊的排列呈八字状或栅栏状，（用喉杆菌）。3）、螺旋菌：菌体弯曲，可分为两类：弧菌（Vibrio）:菌体只有一个弯 曲呈弧状或逗点状。 如霍乱弧菌。弧菌广泛分布于自然界， 尤以水中为多，有 100多种。螺菌（Spirillum）:菌体有数个弯曲，如鼠咬热螺菌。细菌形态可受各种理化因素的影响，一般说来，在生长条件适宜时培养818小时的细菌形态较为细菌形态较为典型型；

5、幼龄细菌形体较长；细菌衰老时或在陈旧培养物中，或环境中有不适合于细菌生长的物质（如药物、抗生素、抗体、过高的盐分等）时，细菌常常出现不规则的形态，表现为多形性（Pleomorphism）,或呈梨形、气球状、丝状等，称为衰退型 （Involutionform）,不易识别。观察细菌形态和大小特征时，应注意来自机体或环境中各种因 素所导致的细菌形态变化细菌的结构：细菌的结构对细菌的生存，致病性和免疫性等均有一定作用。分为基本结构和特殊结构，各种细菌共有的结构称为基本结构，包括细胞壁，细胞膜，细胞质和核质，将某些细菌在一定条件下所持有的结构称为特殊结构，包括鞭毛，芽抱，菌毛和荚膜。基本结构：1、细胞壁

6、，细胞壁为细菌表面比较复杂的结构，是一层厚度平均为15-30纳米，质量均匀的网状结构，可承受细胞内强大的渗透压而不被破坏。 细胞壁紧贴细胞膜外，坚韧而有弹性。（主要成分是肽聚糖又称黏肽，由肽聚糖单体聚合而成的网状大分子，单体由（N-乙酰葡萄糖胺（G）和N-乙酰胞壁酸（M）两种氨基糖经3 -1, 4糖昔键连接形成的多糖骨架，在 N-乙酰胞壁酸分子上连接四肽侧链，肽链之间再由肽桥或者肽链联系起来，组成一个机械 性很强的网状结构。各种细菌细胞壁的肽聚糖的支架均相同，四肽侧链的组成及其连接方式随菌种而异）功能：细菌细胞壁坚韧而富有弹性，保护细菌能承受胞内巨大渗透压，而不被破坏，与细胞膜共同参与细胞内外

7、物质的交换，细胞壁可允许水分及直径小于1纳米的可溶性小分子自由通过。革兰氏阳性菌：肽聚糖（基本结构），包括聚糖骨架，四肽侧链，五肽交联桥 磷壁酸（特 殊成份），包括膜磷壁酸，壁磷壁酸 表面蛋白（特殊成分），包括 SPA,M蛋白三维立体 结构，磷壁酸，抗原性强，是革兰氏阳性的重要表面抗原，调节离子通过黏肽层中起到作用，革兰氏阴性菌：肽聚糖（基本结构），包括聚糖骨架，四肽侧链外膜（特殊成分），二维平面结构。 外膜层位于细胞壁外侧，由脂蛋白，脂质双层，脂多糖三部分组成。2、细胞膜：又称细胞质膜，位于细胞壁内侧，紧包在细胞质外的具有弹性的半渗透性生物唆，主要由磷脂和蛋白质组成。 在电子显微镜下观察，显

8、双层结构。磷脂分子由一个带正电 荷且能溶于水的极性头（磷酸端）和一个不带电荷，不溶于水的非极性尾（煌端）构成。极 性头朝向膜的内外两个表面，呈亲水性，非极性端则埋藏在膜的内层，形成磷脂双分子层， 其中含有各种功能的蛋白质。功能：具有选择性通透作用，与细胞壁共同完成菌体内外物质的交换；膜上有多种呼吸 酶，参与细胞的呼吸过程，膜上有多种合成酶，参与生物合成过程。3、细胞质：又称原生质，为无色透明黏稠的胶状物，基本成分是水，糖，蛋白质，脂类， 核酸，少量无机盐，是细胞的内环境，内含丰富的酶系统，是细胞合成和分解代谢的主要场 所。细胞质中还有多种重要的结构1）质粒：是染色体外的遗传物质，游离于细胞质中

9、，闭环双链DNA分子，分子量小于染色体（脱氧氢核酸），携带某些特殊的遗传信息，编码。如细菌的耐药性，产抗生素，性菌 毛等一些次要性状，能进行独立复制，非细菌生存所必需，失去质粒的细菌能正常存活。2）核糖体：又称核蛋白体，其化学组成为70%的RNA和30%的蛋白质。细胞中约 90%的RNA存在于核糖体中，当mRNA与核糖体连成多聚核蛋白体后，就成为合成蛋白质的场所。原核细胞完整的核蛋白体沉降系数为 70S ,由50S和30S两个亚基组成，是许多抗菌药物 选择作用的靶位，如链霉素能与 30S亚基结合，红霉素能与 50S亚基结合，从而干扰细菌 蛋白质的合成而导致细菌的死亡。3）胞质颗粒：大多数为营养

10、储藏物，包括多糖、脂类、多聚磷酸盐等。较为常见的是储藏 高能磷酸盐的异染颗粒的形态及位置，可以鉴别细菌。4）核质：又称为拟核、类核，由裸露的双链 DNA缠绕而成，是细菌遗传变异的物质基础， 决定细菌的遗传特征。细菌的核质多集中在菌体中部，无核膜、核仁。一般呈球状、棒状或 哑铃状。特殊结构1）芽抱：某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形或椭圆形的、折光性强的 特殊结构，称为芽抱，主要由革兰氏阳性菌产生。芽胞的大小、形状、位置等随菌种而异， 细菌的芽胞对热力、 干燥、辐射、化学消毒剂等理化因素均有强大的抵抗力。一般消毒方法 不易将芽胞杀死，杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸气灭菌。当进行消毒灭

11、菌时，应以芽胞是否被杀死作为判断灭菌效果的指标。1芽抱对理化因素抵抗力强的原因 可能与以下因素有关：1 .芽抱的含水量少，因此蛋白质受热不易变性；2 .芽抱是有多层致密结构包裹成的坚实小体；芽抱体内含有一种特殊成分2, 6一口比咤二竣酸（DPA ,以钙盐形式存在，增强了耐热性。2）荚膜：有些细菌在一定条件下向细胞壁外分泌的一层黏液性物质，厚度在 1.2微米以上 称为荚膜，在普通显微镜下可以看见，如肺炎球菌荚膜；厚度在0.2微米以下的成为微荚膜。 荚膜的化学组成因菌种而异，一般为多糖或多肽的多聚体。夹膜不易着色，要用墨汁负染色 法或特殊荚膜染色才能看清。细菌一般在机体内喝营养丰富的培养基中才能形

12、成荚膜。有荚膜的细菌在固体培养基上形成黏液（M型）或光滑（S型）菌落，去荚膜后其菌落变为粗糙（R型）。功能：抗吞噬作用；抗干燥作用；储存养料；：可使菌体附着于适当的物体表面3）鞭毛：在某些细菌菌体上具有细长而弯曲的丝状物，成为鞭毛，其数目为一至数十根。鞭毛的长度超过菌体若干倍，但直径很细，通常为1030nm,需用电镜观察，或用特殊的鞭毛染色法，可以在普通光学显微镜下看到。鞭毛的化学组成是蛋白质，被称为鞭毛蛋白。 按鞭毛的数目、位置和排列不同，可分为：1、偏端单毛菌，整个菌体只有一根鞭毛，位于菌体的一段，如霍乱弧菌2、两端单毛菌，如空肠弯曲菌3、丛毛菌，在菌体的一端或两端有一丛或两丛鞭毛，如铜绿

13、假单胞菌4、周毛菌，如伤寒杆菌，枯草杆菌等。功能：有些细菌的鞭毛与致病性有关，如霍乱弧菌、空肠弯曲菌等的鞭毛运动活泼，可帮助细菌穿透小肠黏膜表层，是细菌易于黏附而导致病变发生。二|运动功能：鞭毛是细菌的运动器官。 鞭毛往往有化学趋向性， 常朝向有高浓度营养物质的 方向移动，而避开对其有害的环境。 没有鞭毛的细菌只能因水分子的撞击而产生原地的颤动。抗原性：可以用于鉴别细菌，鞭毛具有特殊H抗原，可用于血清学检查。4）菌毛：菌毛是许多G-和少数G+菌体表面遍布的一种比鞭毛更为纤细、短而直的丝状物， 又叫作纤毛，其化学组成是菌毛蛋白， 与细菌的运动无关。菌毛在普通光学显微镜下看不到， 必须用电子显微镜

14、观察。菌毛由结构蛋白亚单位菌毛蛋白（pilin ）组成，具有抗原性。 根据功能不同，菌毛可分为普通菌毛和性菌毛两类：普通菌毛：普通菌毛短、细、直，遍布于菌体表面，能与宿主黏膜表面的受体相互作用，是细菌感染的第一步，菌毛和细菌的致病性密切相关；性菌毛：比普通菌毛长而粗，中空呈管状。见于少数革兰阴性菌， 数量少，一个菌只有14根。由F质粒编码，又称F菌毛。带有性菌毛的细菌称为 F+菌或雄性菌，无性菌毛者称为F-菌或雌性菌。性菌毛能在细菌之间传递某些遗传性状，如细菌的毒性及耐药性可通过这种方式传递，这是某些肠道杆菌容易产生耐药性的原因之一。细菌的繁殖方式：细菌主要以无性二分裂方式进行繁殖生长曲线：将

15、一定数量的细菌接种于适当的培养基，定时取样测定细菌数量， 用于研究细菌生长过程的规律。以培养时间为横坐标，细菌数的对数为纵坐标， 可得出一条生长曲线。 曲线形成的条件是少数细菌接种到固定容积的液体培养基中培养。例题：接种一段时间后，菌数迅速增长(如图 BC段)，此时种群数量变化与 _J_型曲线 相似，原因是营养充足，培养条件适宜。(3)若此细菌最初的数目是 n,每20min繁殖一代，调整期后 2h,发酵罐中的菌数为64n;(4) AD段与种群数量变化的_S_型曲线相似，请解释曲线 C点E点的成因： 随着营养物质的消耗，有害代谢产物的积累，pH的变化等，细菌的分裂速度下降，死亡细胞的数目增加，整

16、个培养基中新增加的细胞数目和死亡的细胞数目达到动态平衡(5) CD段表示此细菌群体的生长进入稳定 期，该期是积累次级代谢 产物的关键时期。(6)种内斗争最激烈的阶段是 CD_°细菌数目的打的3、放线菌的形态、繁殖方式放线菌是一大类形态极为多样，多呈菌丝状生长和以抱子繁殖的、陆生性强的原核微生物, 革兰氏染色阳性。（1）放线菌的菌丝。 其菌体有分枝状菌丝体构成，菌丝的粗细与杆菌相近（1um）。根据形态和功能不同，可将放线菌的菌丝分为基内菌丝、气生菌丝、抱子丝 。1）基内菌丝：指伸入培养基内部或表面的菌丝。直径为0.21.2um,多数无隔膜，有些还能产生各种水溶性和脂溶性色素，是培养基呈

17、现黄、绿、橙、红、紫、蓝、褐、黑等各种颜 色。功能为吸取营养物质和排泄废物。2）气生菌丝:基内菌丝不断向空中生长，分化出直径比基内菌丝粗、颜色较深的菌丝。其 直径为1 1.4um。形状为直形或弯曲，有分枝，有的产生色素。功能是分化形成抱子丝。3）抱子丝:当气生菌丝发育到一定阶段，在其顶端分化出可形成分生池子的菌丝，即抱子 丝。抱子丝的形状及螺旋的数量、大小、疏密程度、旋转方向随放线菌种的不同而不同。因 此这些特征是放线菌分类的重要依据。抱子丝的功能为形成分生池子，其繁殖作用。（2）放线菌的抱子：抱子丝发育到一定阶段即分化形成放线菌的繁殖器官一一分生抱子。不同放线菌分生抱子的形状、排列方式、表面

18、结构及成熟抱子堆的颜色不同，因此分生抱子的各项特征也是放线菌菌种鉴定的依据。分生抱子的形状有球形。椭圆形、杆状、柱状和瓜子状等。抱子的颜色有灰、白、黄、红、蓝、绿等。抱子表面的纹饰因种而异，在电子显微 镜下清晰可见，有的光滑，有的褶皱状、刺状、毛发状等。一些放线菌不产生分生抱子，而是在菌丝顶端形成抱囊， 抱囊内产生多个球形或近球形，有鞭毛或无鞭毛的抱囊抱子。 如游动放线菌属，没有气生菌丝或不发达， 其在基内菌丝上形成 抱囊，抱囊内的抱囊抱子上着生一至数根极生或周生鞭毛，可运动；链抱囊菌属有气生菌丝，在气生菌丝的主丝或侧丝的顶端由抱子丝盘卷而成抱囊，内含多个无鞭毛的抱囊抱子。放线菌的繁殖方式主要

19、以形成分生抱子繁殖，极少数种类是以基内菌丝分裂形成抱子状细胞进行繁殖。分生抱子主要通过横隔方式形成：气生菌丝顶端先波曲成为抱子丝，然后形成横隔，细胞壁加厚并收缩，分成一个一个的细胞，最后，细胞成熟形成一串分生抱子。游动放线菌属、链抱囊菌 属等主要借助产生的抱囊抱子繁殖。4、酵母菌的形态和繁殖方式形态：酵母菌主要为单细胞，形态因种而异。基本形态为球形、卵圆形和圆柱形，有些酵母菌形状特殊，可呈柠檬形、瓶形、三角形、弯曲形等。酵母菌细胞大小因种类而异，长为520um ,可达50um ,宽为15um,可达10um以上，比细菌大几倍至几十倍。繁殖方式：有性和无性，以无性为主（1）无性繁殖1）牙殖：是酵母

20、菌最常见的繁殖方式。2）裂殖：少数酵母菌，如裂殖酵母属的种类以二分裂的方式繁殖，与细菌的繁殖方式相仿。3）产生无性抱子（2）有性繁殖主要以形成子囊抱子的方式进行有性繁殖。5、显微镜的使用及维护方法使用步骤：1）、取出显微镜，注意用左手托住镜座，右手握紧镜臂，小心的拿出来轻放于实验台靠身 体左侧位置以便右侧可以记录观察得到的结果。2）、是光源的调节，打开电源前先插上插头，并且把电流调节器旋到最小的位置，然后才 打开电源，调节旋钮至光线强度适合自己的位置。最后就是对被观察物的观察，先转动物镜转换器至低倍物镜，好用低倍物镜进行定位， 因为低倍镜的视野比高倍镜大，易于找到目标及确定检查位置。3）、把标

21、本放到载物台上，把观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节螺旋，使物镜至标 本05mm处，调节聚光器使光线变弱，目镜观察并同时用粗调节螺旋慢慢升起载物台.直 至视野出现*再用细调节螺旋使视野清晰为止。将其移到视野中央。换高倍镜进行观察。维护：1、使用时应按规范的流程进行操作，显微镜属于高精密仪器，极易损坏，切记应轻拿轻 放。2、注意显微镜清洁，擦拭时应该用专门的擦拭纸进行擦拭3、注意防尘防潮，不能置于潮湿和灰尘大的地方，同时也不能让酸碱氯仿等腐蚀性化学 试剂接触到显微镜4、长时间不适用，应该用防尘罩把显微镜罩住后放于显微镜柜里，置于阴凉干燥的通风 处。6、革兰氏染色的基本原理方法和注意事项原理：G

22、+菌:细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种 透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水 而孔隙缩小，故保留结晶紫 -碘复合物在细胞膜上。呈紫色。G一菌:肽聚糖层薄，交联松散， 乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫 -碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红步骤：滴水一取菌一涂片一干燥固定一结晶紫染色1min 一水洗一碘液1min 一水洗一乙醇脱色（20-30S ） 一水洗一番红 1min 一水洗一干燥一镜检（油镜）注意事项：1 .要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。2 .革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节脱色不

23、足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。3 .染色过程中勿使染色液干涸，用水冲洗后，应吸去玻片上的水渍，以免染色液被稀释影响 染色效果。7、药典中有关微生物限度检验的相关内容，如细菌总数、霉菌酵母菌数、大肠菌群数等指 标检验时所用培养基种类和培养时间、温度以及操作的过程和结果报告方式 附录微生物限度检查法微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度1 0 0 0 0 级下的局部洁净度 100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的

24、措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬 浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。供试品检查时，如 果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性，除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30 -35 ° C;霉菌，酵母菌培养温度为 23-28 ° Q检验结果以l g l m l 1 0 g 1 0 m l 或1 0 c m 2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报 告。所用培养基的种类和培养时间，温度，结果报告方式验证方法验证试验至少应进行3次独立的平行试验， 并分别计算

25、各试验菌每次试验的回收率。另有规定外，细菌培养3天，霉菌、酵母菌培养 5天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数.必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。 若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于1 5,则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉月东葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培

26、养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠 琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的 细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果菌数报告规则细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于 300cfu、霉菌宜选取平均菌落数小于 lOOcfu的稀释级，作为菌数报告（取 两位有效数字）的依据。以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告l g l m l 或10cm2供试品中所含的菌数。如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长， 但平均菌落数小于 1时，以1乘以最低稀释 倍数的值报告菌数。8、细菌菌落总数的检验方法和计算1、测定方法：菌落总数的测定， 一般将

27、被检样品制成几个不同的 10倍递增稀释液，然后从 每个稀释液中分别取出 1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合， 在一定温度下，培养一 定时间后（一般为48h）,记录每个平皿中形成的菌落数量， 依据稀释倍数，计算出每克（或 每毫升）原始样品中所含细菌菌落总数。2、计算：1.操作方法：培养到时间后，计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察，必要时 用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数， 计算处原始样品中每克（或每ml）中的菌落数，进行报告。2 .到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0-4C,但不得超过24h。3 .计数时应选取菌

28、落数在 30300之间的平板（SN标准要求为25250个菌落），若有二个 稀释度均在30300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于 2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。4 .若所有稀释度均不在计数区间。如均大于 300,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之。如均小于 30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。如菌落数有 的大于300,有的又小于30,但均不在30300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数 乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。 有的规定对上述几种

29、情况计算出的菌落数按估算值报告。5 .不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。 如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。6 .当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个 菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。7 .当

30、计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。8 .菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1100时，按实有数字报告，如大于 100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。固体检样以克（ g）为单位报告， 液体检样以毫升（ml）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm）报告。9、药典中关于大肠菌群的检验方法验证大肠菌群检查法时，采用大肠埃希菌作为验证菌株验证方法：取规定量供试液及1 0 -1 0 0 c f u试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。当采用薄膜过滤法时，取规定量供试液

31、，过滤，冲洗，试验菌应加在最后 一次冲洗液中，过滤后，注人增菌培养基或取出滤膜接人增菌培养基中。（2）大肠菌群（Coliform） 取含适量（不少于1 0 m l ）的乳糖胆盐发酵培养基管 3支，分 别加入1:1 0 的供试液l m l （含供t品0 . l g 或0 . l m l ） a : 1 0 0 的供试液l m l （ 含供t品0. O l g 或0.0 1 m l ）、l : 1 0 0 0 的供试液l m K 含供试品0 . OOlg或0.0 0 1 m l ）, 另取1支乳糖胆盐发酵培养基管加人稀释液 l m l作为阴性对照管。培养 1 8 -2 4 时。乳糖胆盐发酵管若无菌

32、生长或有菌生长但不 产酸产气，判该管未检出大肠菌群； 若产酸产气，应将发酵管中的培养物分别划线接种于曙 红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养1 8 -2 4 时。若平板上无菌落生长，或生长的菌落与表 4所列的菌落形态特征不符或为非革兰阴性无芽抱杆菌，判该管未 检出大肠菌群；若平板上生长的菌落与表4所列的菌落形态特征相符或疑似，且为革兰阴性无芽泡杆菌，应进行确证试验。TM KF. 皿 / 八一三 E E 人，必皿：J 晒皿13Kl收 .会4大肠曲群苣落彩杳特征培柞与紫券色，第力色笆或粉红色，圆揖,麻平或稿凸起.曳璋腆齐,莪面光梢,灌湖 鲜横虹也塞财£1色，圆形.启平废料小

33、£万豪能齐，禀面光册.蛊科确证试验从上述分离平板上挑选4 -5个疑似菌落分别接种于乳糖发酵管中，培养 24 -48时。若产酸产气，判该乳糖 胆盐发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群。根据大肠菌群的检出管数，按表5报告l g 或l ml供试品中的大肠菌群数。备供试晶址的楼密晶集河牌3大聃谐和数N小，宫磷irb 0.1ml0.01息麻0k 01 ml0. gin 或仇加m*+十+于<10« S可能的大肠苗擒徵注：+代表检出大肠菌群；一代表未检出大肠菌群。10、无国操作方法以及无国操作中需要注意的事项（1）实验前，无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌，用70

34、%酒精擦拭无菌操作台面，并开启无 菌操作台风机运转 10分钟后才可开始实验操作.每次操作只处理一株细胞，以 免造成细胞交叉污染.实验结束后，将实验物品带出工作台.如需要继续进行下一个实验，则用 70%酒精擦拭无菌操作台面，再让无菌操作台风机运转10分钟后才可进行下一个实验操作.（2）无菌操作工作区域应保持清洁与宽敞，必要物品，如试管架，移液器或吸管头等可以暂时放置，其它实验用品用完后应及时移出，以利气体流通.实验用品要用 70%酒精擦拭后才能带入无菌操作台内.实验操作应在操作台中央无菌区域内进行，勿在边缘非无菌区域操作.（3）小心取出无菌实验用品，避免造成污染.切勿碰触吸管与吸头头部或容器瓶口

35、，不要在打开的容器正上方操作实验.容器打开后，用手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45。角取用，尽量勿将瓶盖 盖口朝上放在台面上.11、酒精灯的作用和使用注意事项作用：确保在微生物操作过程中达到无菌的状态。使用注意事项：（1）使用时，究竟不得超过酒精灯的容积的三分之一，也不得少于四分之一。（2）不得向燃着的酒精灯内添加酒精。（3）点燃酒精灯是要用火柴，不得使用酒精灯引燃另一只酒精灯。（4）熄灭时，要用灯帽盖灭，不得用嘴吹灭。（5）加热时受热物体应放在外焰部分，切不可接触灯芯。12、微生物、生长因子、鉴别培养基、灭菌、碳源、氮源、选择培养基、芽抱、菌落、等 词汇的概念微生物：是所有形体微小，单细胞或结

36、构较为简单的多细胞生物，甚至没有细胞结构的生物的通称。生长因子：是细菌在其生长过程中必需的，需要量少但自身不能合成的一类有机物质。鉴别培养基：利用细菌生化反应能力不同，在基础培养基内加入特殊的底物和指示剂，以达到鉴别细菌的目的。化导源转转碳指将质粒或其他外源 DNAI入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程 由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息转移过程也称转导。在微生物生长过程中能为微生物提供碳素来源的物质。氮源：凡是能被用来构成菌体物质中或代谢产物中氮素来源的营养物质。免疫应答：抗原性物质进入机体后激发免疫细胞活化，分化和效应过程称之为免疫应答。选择培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。芽抱：某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成的一个圆形或椭圆形、厚壁、折光性强、含水量低、抗逆性强的休眠构造。菌落：将单个微生物细胞或一小堆同种细胞接种在固体培养基的表面（有时为内部），当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件。灭菌：指可杀灭一切细菌繁殖体（包括结核分枝杆菌）达到灭菌水平的方法。13、微生物消毒灭菌的方法及需要注意的安全事项干热灭菌：小