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文档简介

1、植物体内硝态氮含量的测定植物体内硝态氮含量的测定 实验目的与意义实验目的与意义 植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况,植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况,常作为施肥指标。另外,蔬菜类作物特别是叶菜和根常作为施肥指标。另外,蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐,在烹调和腌制过程中可转化菜中常含有大量硝酸盐,在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康。因此,硝酸盐含量又成为蔬为亚硝酸盐而危害健康。因此,硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。测定植物体内的硝态菜及其加工品的重要品质指标。测定植物体内的硝态氮含量,不仅能够反映出植物的氮素营养状况氮含量,不仅能够反映出植

2、物的氮素营养状况, 而且对而且对鉴定蔬菜及其加工品质也有重要意义。鉴定蔬菜及其加工品质也有重要意义。原理原理 在浓酸条件下,在浓酸条件下,NO3-与水杨酸反应,与水杨酸反应,生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在碱性条件下(碱性条件下(pH12)呈黄色,最大吸)呈黄色,最大吸收峰的波长为收峰的波长为410 nm,在一定范围内,在一定范围内,其颜色的深浅与含量呈正比,可直接比其颜色的深浅与含量呈正比,可直接比色测定。色测定。 材料、仪器与试剂材料、仪器与试剂 植物材料植物材料:菠菜:菠菜 仪器仪器:分光光度计;天平(感量:分光光度计;天平(感量0.1 mg););试

3、管;刻度吸量管试管;刻度吸量管0.1 ml、0.5 ml、5 ml、10 ml各各1支;支;50 ml容量瓶;小漏斗(容量瓶;小漏斗(5cm)3个;个;玻棒;洗耳球;水浴锅;封口膜;玻棒;洗耳球;水浴锅;封口膜;7 cm 定量定量滤纸若干滤纸若干; 。 试剂:试剂: 500 mg/L 硝态氮标准溶液硝态氮标准溶液: 精确称取烘至恒重的精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221 g 溶于蒸溶于蒸馏水中,定容至馏水中,定容至200 ml 5%水杨酸水杨酸-硫酸溶液硫酸溶液: 称取称取5 g 水盐酸溶于水盐酸溶于100 ml 比重为比重为1.84 的浓硫的浓硫酸中,搅拌溶解后,贮于棕色瓶中,置冰箱保存

4、酸中,搅拌溶解后,贮于棕色瓶中,置冰箱保存一周有效。一周有效。8%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液:80 g 溶于溶于1 L蒸馏水中即可。蒸馏水中即可。 实验步骤实验步骤 1. 标准曲线的制作标准曲线的制作(1)吸取)吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液硝态氮的标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml分别放入分别放入50 ml 容容量瓶中,用无离子水定容至刻度,使之成量瓶中,用无离子水定容至刻度,使之成10、20、40、60、80、100mg/L的系列标准溶液。的系列标准溶液。 (2)吸取上述系列标准溶液吸取上述系列标准溶液0.1 ml,分别放入,分别放入烘干烘干的的试管

5、中,以试管中,以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。再蒸馏水代替标准溶液作空白。再分别放入分别放入0.4 ml 5%水杨酸水杨酸-硫酸溶液,摇匀,在室硫酸溶液,摇匀,在室温下放置温下放置20 min后,再加入后,再加入8% NaOH 溶液溶液9.5 ml,摇匀冷却至室温。则显色液总体积为摇匀冷却至室温。则显色液总体积为10 ml。 (3)绘制标准曲线:以空白作参比,在绘制标准曲线:以空白作参比,在410 nm 波长波长下测定吸光度。以吸光度为横坐标,硝态氮浓度下测定吸光度。以吸光度为横坐标,硝态氮浓度为纵坐标,绘制标准曲线并计算出回归方程。为纵坐标,绘制标准曲线并计算出回归方程。 2.样品

6、中硝酸盐的测定样品中硝酸盐的测定 (1)样品液的制备:样品液的制备: 取一定量的植物材料,剪碎混匀,取一定量的植物材料,剪碎混匀,用天平精确称取材料用天平精确称取材料2 g 左右,放入试管中,加入左右,放入试管中,加入10 ml 去离子水,用塑料封口,置于沸水浴中提取去离子水,用塑料封口,置于沸水浴中提取30 min。到。到时间后取出,用自来水冷却,将提取液过滤到时间后取出,用自来水冷却,将提取液过滤到25 ml容容量瓶中,并反复冲洗残渣,最后定容至刻度。量瓶中,并反复冲洗残渣,最后定容至刻度。(2)样品液的测定:样品液的测定: 吸取样品液吸取样品液0.1 ml放入放入烘干烘干的试管的试管中,

7、然后加入中,然后加入5%水杨酸水杨酸-硫酸溶液硫酸溶液0.4 ml,混匀后置室,混匀后置室温下温下20 min,再慢慢加入,再慢慢加入9.5 ml 8% NaOH溶液,待冷溶液,待冷却至室温后,以空白作参比,在却至室温后,以空白作参比,在410 nm 波长下测其吸波长下测其吸光度。光度。 在标准曲线上查得或用回归方程计算出在标准曲线上查得或用回归方程计算出硝态氮的浓度,再用以下公式计算其含硝态氮的浓度,再用以下公式计算其含量。量。 NO3- -N含量含量= (C )/W 式中式中 C标准曲线上查得或回归方程计标准曲线上查得或回归方程计算得算得NO3- N浓度;浓度; V提取样品液总量;提取样品液总量; W样品鲜重。样品鲜重

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