高效液相色谱法测定盐酸环丙沙星血药浓度及其药动学研究

1、    高效液相色谱法测定盐酸环丙沙星血药浓度及其药动学研究        摘要采用高效液相色谱法(HPLC)测定盐酸环丙沙星的血药浓度。色谱条件为：紫外检测波长277nm；分析柱为HP-RP-ODSC18柱，4.6×220mm；流动相：乙腈(溴化四丁基铵0.008mol.L-1+磷酸二氢钾水溶液0.011mol.L-1)=1486，配好后磷酸调pH至2.74±0.02。本法血清最低检出浓度0.01g.ml-1。对10名受试者口服500mg两种盐酸环丙沙星

2、片后进行药动学和生物利用度研究。药-时曲线经拟合为二室开放模型，其T1/2分别为4.68±0.53h与4.40±0.47h，Tmax分别为1.28±0.07h与1.33±0.07h，Cmax分别为6.44±0.61(g.ml-1)与5.88±0.40(g.ml-1)，AUC分别为19.88±1.83(g.h-1.ml-1)和19.24±1.08(g.h-1.ml-1)。供试品片剂的相对生物利用度为103.32±4.81%(99.58±4.63%，经含量校正)，经统计分析两种制剂具有生物等效性。关

3、键词盐酸环丙沙星，高效液相色谱，药物动力学，生物利用度盐酸环丙沙星(Ciprofloxacin Hydrochloride)是新一代的氟喹诺酮类合成抗菌药，具有抗菌谱广、抗菌活性强(尤对革兰阴性杆菌作用强)，同时又具有口服吸收完全，体内分布广泛等特点，国内外已广泛用于临床，取得了良好的治疗效果1.2。10名健康男性志愿者口服两厂家环丙沙星片剂500mg，用自建的HPLC法测定供试品与对照品盐酸环丙沙星不同时间的血药浓度。经药物动力学软件3P87计算盐酸环丙沙星的药动学参数和供试品片剂的相对生物利用度，以评价供试品与对照品盐酸环丙沙星在人体内的作用程度，为临床治疗的有效性和安全性提供依据。1材料

4、和方法1.1受试者汉族健康男性志愿受试者10名，一般体检、实验室检查(血、尿常规，肝、肾功能)及心电均正常，且均无烟酒史。1.2药品与试剂供试品盐酸环丙沙星片剂(250mg/片；含量99.5%；溶出度96.9%；批号941025，由江西东方立可生制药有限公司提供)；对照品盐酸环丙沙星片剂(商品名“环福星”，250mg/片；含量95.9%；批号940701，由上海信谊药厂生产)；盐酸环丙沙星标准品由上海三维制药公司提供；内标二氟哌酸(标准品，由中国医学生物技术研究所提供)；乙腈为色谱纯；磷酸、磷酸二氢钾、溴化四丁基铵、三氯乙酸均为分析纯。1.3仪器和色谱条件高效液相色谱仪(美国惠普公司HPLC1

5、050系统，包括泵、紫外检测器、数据采集与数据处理工作站-HP486/50计算机与3365ChemStation色谱工作站软件)；色谱柱(HP-RP-ODSC18柱，4.6×220mm)；3P87软件运行于PC286计算机。色谱条件：流动相为乙腈(溴化四丁基铵0.008mol.L-1+磷酸二氢钾水溶液0.011mol.L-1)=1486。配好后磷酸调pH至2.74±0.02，0.45m滤膜抽滤，超声脱气。流速1.2ml.min-1，检测波长277nm，灵敏度0.025AUFS。柱温25，取样速率10次.SEC-1。本法盐酸环丙沙星与二氟哌酸的保留时间分别是5.31min和7

6、.51min，有效理论塔板数(Neff=1.2×104，R=8.28)，血清最低检出浓度0.01g.ml-1。1.4生物标本测定方法取血清0.5ml，加入内标二氟哌酸20l(0.816g)，旋涡振荡5min；加入0.5ml甲醇，再旋涡振荡5min；4000r.min-1离心15min，取上清液，真空挥干溶剂，流动相50l溶解，以0.22m微孔滤膜过滤后进样20l。1.5盐酸环丙沙星标准曲线精称盐酸环丙沙星(标准品)用流动相溶解定容，并配成7.263g.ml-1的储备液，再分别稀释成7.263，2.905，0.726，0.175，0.058g.ml-1的溶液，按生物样本的处理方法至加入

7、0.5ml血清起依法测定之。以As(样品峰面积)/Ai(内标峰面积)对浓度C回归，得回归方程：Y=0.492X+2.186×10-3，r=0.9919。回收率为96.38±3.31%；日内、日间RSD分别为4.05%和5.02%。1.6试验方法10名受试者实验前15d未服过任何药物，受试前12h内禁食，当日早晨空腹，随机分成2组：5人分别口服供试品片剂各500mg，另5人分别口服对照品各500mg。给药后3h按统一食谱进餐，试验期间饮水自便。受试者接受交叉给药供试品和对照品各一次，间隔7d。服药后分别于0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，9.0，12

8、.0，24.0h抽取静脉血，室温(约15)放置1h，3000r.min-1离心15min，分离出血清，-20冰箱保存备测。1.7研究数据处理根据药时曲线，用3P87软件在计算机上进行了处理，经F检验，拟合优度，结合AIC进行判断，用具有滞后时间的口服吸收二室开放模型自动拟合，求算药动学参数。统计采用配对t检验。2结果2.1单剂量口服盐酸环丙沙星片剂500mg后，10名志愿者各时间点平均血清中盐酸环丙沙星浓度见表1。表1口服500mg盐酸环丙沙星片后平均血药浓度(±s，n=10)时间(h)供试品组血药浓度(g.ml-1)±s对照品组血药浓度(g.ml-1)±s0.5

9、2.742±0.3652.444±0.2861.05.818±0.7655.158±0.5561.57.121±0.6497.102±0.4332.05.341±0.3974.503±0.3143.03.346±0.3983.475±0.1574.01.785±0.3121.884±0.1996.00.653±0.0600.670±0.0119.00.180±0.0180.225±0.05312.00.109±0.0130.1

10、19±0.03424.00.016±0.0030.015±0.0052.2盐酸环丙沙星片剂药动学特性及供试品相对生物利用度见表2。2.2.1口服供试品片剂及对照品片剂后，吸收迅速，吸收半衰期分别为0.9±0.1h与1.0±0.1h；吸收滞后时间分别为0.33±0.01h和0.33±0.02h;Tmax分别为1.3±0.1h与1.3±0.1h，Cmax分别为6.4±0.6g.ml-1与5.9±0.4g.ml-1；表观分布容积分别为38.4±5.0L与42.7±3.1L

11、；消除半衰期分别为4.7±0.5h和4.4±0.5h；药物血浆清除率分别为25.7±2.2L.h-1与26.1±1.5L.h-1。以上参数均经配对t检验，P0.05，两者之间差异均无显著性，并与文献报道3，4相一致。 表2口服盐酸环丙沙星片后平均药动学参数(±s，n=10)药动学参数供试品片±s对照品片±sKa(h-1)0.5±0.10.5±0.1LagTime(h)0.33±0.010.33±0.02K10(h-1)0.7±0.10.6±0.1K12(h-1)0.

12、08±0.020.09±0.03K21(h-1)0.17±0.020.19±0.03T1/2(h)0.9±0.11.0±0.1T1/2(h)4.7±0.54.4±0.5Tmax(h)1.3±0.11.3±0.1Cmax(mg.ml-1)6.4±0.65.9±0.4V/F(L)38.4±5.042.7±3.1AUC(g.h-1.ml-1)19.9±1.819.2±1.1Cl/F(L.h-1)25.7±2.226.1±1

13、.5F(%)103.3±4.8%(99.6±4.6%，校正后)2.2.2生物利用度供试品与对照品的AUC(024h)分别为19.9±1.8g.h-1.ml-1与19.2±1.1g.h-1.ml-1，口服供试品片剂与对照品片剂的相对生物利用度为103.3±4.8%(经含量校正后为99.6±4.6%)。 3讨论盐酸环丙沙星的血药浓度HPLC测定通常用荧光检测器检测，结果基线易漂移，理论塔板数也不高。本实验建立了灵敏度较高且稳定性好的紫外检测方法，该法回收率高，日内、日间变异系数小，理论塔板数也较高，适用于盐酸环丙沙星的药动学过程检测要求。

14、10例健康志愿者交叉口服盐酸环丙沙星供试品或对照品片剂后的药-时曲线符合二房室开放式模型，实测血清药物浓度-时间曲线与理论曲线基本重合。从药-时曲线看，其血药浓度较高，对全身组织细菌感染能起良好的治疗作用。供试品和对照品片剂在体内吸收迅速，尽管有一个很短的吸收迟滞时间，但达峰时间仍很短，所有药动学参数经配对t检验差异均无显著性，说明两者体内过程相似，人体生物利用度等效。作者单位：周秦秦傅颖君况荣华戴群熊玉卿江西医学院卫生部临床药理基地南昌330006参考文献1Campoli-Richards DM, Mond JP,Price A,Benfield P.Ciprofloxacin a revie w of its antibacterial activity pharmacokinetic properties and therapeutic use. Drugs,1988,35:3732张万革.环丙氟哌酸的作用特点及临床评价.中国药学杂志，1992，27：2973Tom Bergan.Pharmacokinetics of ciprofloxacin intrarenous and increasin g oral doses. The