水解度指标测定

1、水解度的测定精选范本方法一：（茚三酮比色法）（1 ）标准曲线制定:1、20卩g/ml甘氨酸：2mg甘氨酸定容到100ml容量瓶中。2、茚三酮显示剂：水合茚三酮0.5g，果糖0.3g，磷酸氢二钠11.2g，磷酸二氢钾6g,定容到100ml.稍热溶解，避过低温保存1周。3、40%乙醇标准曲线制作试管01 2345678待测样品标液ml0.000.1 0.20.30.40.50.60.71.00.5蒸馏水ml2.001.901.801.701.601.501.401.301.001.5茚三酮显示11 11111111剂ml摇匀，沸水浴15min,用冷水迅速冷却至室温40%乙醇 ml555555555

2、5甘氨酸卩g0246810121420?OD(570nm)水解度计算公式：dH-AxWO%535(如泌)水解液- N生的含鞅啊曲）_原料蛋白质中游离_阻含量（嗣xiOO%所以米樹蛋白的臨产734?N水解液蛋白含量（凯氏定氮）F-米糠蛋白换算系数5.95方法二：采用甲醛滴定法。水解度（%）=（水解后生成的氨基氮的量/样品中总氮含量）X 100%（1）粗蛋白含量的测定：采用凯氏定氮法。（2）氨基氮的测定氨基酸含有氨基和羧基，具有两性，加入甲醛与氨基酸中的氨基作用， 可消除其碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定，即可对氨基酸进行定量。1、酚酞指示剂：0.5g酚酞溶于100ml50%的乙醇中

3、2、中性甲醛溶液：甲醛溶液（3637%，分析纯）50ml，加入0.5%的酚酞指示 剂约3ml，滴加0.1md / L NaOH使溶液显微粉色，储存于棕色瓶中，临用前配制。具体方法如下:分别吸取2mL不同水解度的水解液于烧杯中加蒸馏水 5mL，向烧杯中加入5滴酚酞指示剂，混合后加中性甲醛溶液 2.0ml再混合，用0.1mol /L NaOH滴定显 微粉色。同时取同浓度但未水解的蛋白液2mL做空白实验。氨基氮含量（i】g/i】L）= V-VoXNx14.00810式中:V样品耗用氢氧化钠标准溶液毫升数;V0空白耗用氢氧化钠标准溶液毫升数;N氢氧化钠标准溶液摩尔浓度；14.008 1 mL浓度为1.

4、000 mol/L氢氧化钠标准溶液相当于氮的质量（mg）。方法三:226水解度的测定采用P田S就滴定法回。根据多肽在不同pH的条件卜解离状态不同：为pH值ffi 定时酶水解蛋n后形成的n由竣基、n出®基或氮基酸残基数h不等；肖在碱性条件卞 水解时，释放的氮基酸使溶液PHffl明显卜降，用稀碱液将W滴定回起始pH值，可以 知道蛋白质的肽键断裂的悄况，棍据消耗的碱S计算水解度DH ffl.水解®=（水解的肽键数/总肽键数）X100%计算公瓦 DH = VNaOH'NKaOHJ （a'Mp*Htot） X 100%2-2公式中：V矗OH :滴定消耗的碱体积（】nL

5、）Nns,oh :滴定消耗的碱当量浓度（juol/L）Mp :参加蛋白水解的蛋白总虽（g）Ht,t：每克蛋口小肽键的克当量数（9,2iiimol/g）a : CL氨基酸的平M解离度（5CrC时，PK=7.1 士0.09）EOPH-pK/（+肿徑）PK=7.8+2400* （298-T） /298TT=273J5+t t：反应环境的温度 比）pH:反应起pH值2.3.3水解度CDH）的测定口质的水解程度常以愷口质中的狀噩被断裂的百分率來我示+常见的水解度测定和监 控的方法主要有pH-帥t法（Aldei-Ni器en, 1986）.三硝堆苯琐酸法、屮醉滴定法、三氯乙酸 沉淀法等.由于pH-stat法

6、口有操作简单，连续测定的优点，并11当pH大于&时，木斛过程 中加入碱的就与断裂的肽键的数比有宦肚的关系+阖此，木硏究采用该袪来检测大米蚩白的 水删/；/(%) = xioob = /xA'xl/ccxl / 材 F式中：A单位质屋贵门质中被水解的肽键的城（11111101 g 4；B消耗的碱液休积 inU g-一碱液的浓度，inoVL； 血校匝系数C碱性貳口酶1&=1.01）： 叫底物中議门质的含；;b幻 力陶底物中蛋门质中的肽雜总数.ininol/g （大米蛊门取建40） （Hmmd氛2000）.氮溶指数测定（TCA-NSI）可以通过检测其氮溶解指数来初步判定小肽或寡肽含量。NSI （ % ）=（ N1/ N0） * 100N0 =总氮N1 =可溶性氮（用三氯乙酸可溶性氮测定法）氯乙酸氮溶指数（TCA NSI ）测定方法：20ml 10 % 三氯乙酸（TCA ）溶液添加到20ml待测混合液（混合液氯乙酸（TCA）是一种蛋白质沉淀剂，它可以沉淀蛋白质和较长的肽 。可以被三氯乙酸沉淀的肽段所含的最少氨基酸残基数与底物的种类 关，就特定的底物而言，三氯乙酸氮溶解指数可以定性反映蛋白质的 解