甾体激素类药物的分析――特殊杂质检查

1、5-真理惟一可靠的标准就是永远自相符合甾体激素类药物的分析特殊杂质检查第三节特殊杂质检查多由结构改造来，可能带来原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂溶剂 等，是一重要项目。此外，有些甾体药物还规定其他检查项目。一、游离磷酸示例中国药典收载地塞米松磷酸钠的检查，方法为:称取供试品20mg,置25ml量瓶中，加水15ml溶解；另取标准磷酸盐溶液精 密称取经105C干燥2h的磷酸二氢钾0.35g,置1000ml量瓶中，加硫酸溶液（3 10）10ml与水适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀；临用时再稀释10倍4.0ml，置另一 25ml量瓶中，加水11ml;各精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2萘

2、酚4磺酸溶液（另取无水亚硫酸钠5g,亚硫酸氢钠94.3G与1-氨基-萘酚-4-磺酸0.7g, 充分混合，临用时取此混合物1.5g加水10ml使溶解，必要时过滤）1ml,加水 至刻度，摇匀，在20C放置3050min,在740nm的波长处测定考试，大收集整 理吸收度。供试品溶液的吸收度不得大于对照溶液的吸收度。原理：酸性条件下，磷酸与钼酸作用生成磷钼酸铵，再经还原形成磷钼酸蓝（钼蓝），在740nm波长处有吸收。二、甲醇和丙酮示例地塞米松磷酸钠方法:精密量取甲醇101（相当于7.9mg）与丙酮100卩l相当于79mg）,置100ml 量瓶中，精密加0.1%（ml/ml ）正丙醇（内标物质）溶液20

3、ml，加水稀释至刻度, 摇匀，作为对照液；另取本品月约 0.16g,精密称定，置10ml量瓶中，精密加入上述内标溶液2ml，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品。取上述溶液, 照气相色谱法，用高分子多孔小球色谱柱（按正丙醇计算的理论板数应大于 700）,在柱温150C测定。含丙酮不得过5.0% （g/g），并不得出现甲醇峰。本品在生产工艺中使用大量甲醇和丙酮，因此要检查。甲醇的检测限为3.1 ng.三、雌酮炔雌酮中雌酮检查方法如下:取本品5mg溶于0.5ml乙醇，加间二硝基苯0.05g,再加新配制的稀氢氧化 钾-乙醇液0.5ml，在暗处放置1h后，再加乙醇10ml时，溶液呈现的颜色不得比下面

4、的对照液更深。对照液：不加本品同样方法制成。原理：Zimmermann反应，羰基的邻位具有活泼亚甲基的化合物，在碱性的 氢氧化钾乙醇溶液中，与间二硝基苯反应呈红 蓝色。雌酮是17-酮甾类，因此根据该反应生成紫红色化合物，必须使用高纯度的间二硝基苯，否则呈褐色而难于 判定。四、硒五、其他甾体甾体激素药物多由甾体母体或结构类似的其他甾体激素制备而来，也具有一 定的药理作用而又互相不相同，使其他甾体或有关物质的限度检查显得非常必要,成为甾体激素药物纯度检查的一个重要项目。TLC和HPLC为各国近版药典采用 36中原料中34中采用薄层色谱法检查；10中原料已采用HPLC法。薄层色谱法药典色谱条件:1.

5、薄层板：大多采用硅胶 G板，少数采用硅胶GF254或硅胶HF254.2. 供试液和对照液的制备：取一定量供试品和对照品，分别用溶剂（如氯仿甲醇或甲醇或氯仿或丙酮）配成一定浓度的溶液。3. 展开剂系统：各种不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶剂用得最多;还有苯、无水乙醇、二氯甲烷-甲醇-水、氯仿-甲醇、二氯甲烷-醋酸甲酯-水、苯- 丙酮等混合溶剂。4. 显色剂：碱性四氮唑蓝试液；硫酸-乙醇（2： 8或1:1或3： 7）； 20%硫酸；10%磷钼酸-乙醇液。5. 检测法：用碱性四氮唑蓝试液作显色剂时，以展开剂展开后，晾干，在105C干燥10min，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视；用硫酸-

6、乙醇显色剂时,以展开剂展开后，晾干，喷以硫酸-乙醇，在120C或100C加热5min，放冷置紫 外光灯（365nm）下检视；用20%硫酸显色时，用展开剂展开后，晾干，喷以20%硫酸显色，在105C加热10min后检视；用10%磷钼酸-乙醇液时，以展开剂展开 后，晾干，喷以10%磷钼酸-乙醇液，在100 C加热1015mi n,在日光下检视;某些甾体激素药物，如醋酸去氧皮质酮、地塞米考，试大收集整理松磷酸钠、倍 他米松磷酸钠等采用硅胶 GF254薄层板，用展开剂展开后，晾干，直接在紫外灯（254nm）下检视。判定法：按各药品项下规定得杂质斑点的数目和颜色的要求进行判定。（二）高效液相色谱法色谱条件如下:1.色谱填充柱：十八烷基硅烷键和硅胶。2.流动相：各种不同比例的甲醇-水混合溶剂。3.检测器：紫外(214 nm, 254nm, 281 nm, 230nm, 288nm)。4.供试液和对照液的制备：将供试品用甲醇溶解配制成高（1）、低（2） 二 种浓度的溶液。5.判定法：溶液（1）显示的杂质峰数不