ABO血型鉴定操作规程

1、1.02.03.04.05.05.15.26.06.16.26.36.46.56.66.77.07.1ABO血型鉴定操作规程原理根据红细胞上和血清或血浆中有无 A抗原和或B抗原及其抗体,将血型分为A型、B型、AB型及O型.可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型鉴定ABO血型.正定型正定是指用抗-A、抗-B血清来检测受检红细胞上有无相应的A抗原和或B抗原；反定型反定 是指用 A1型、B型红细胞来检测受检血清或血浆中有无相 应的抗-A和或抗-B.原始样品要求5 mL静脉全血.样品容器和添加剂真空试管,EDTA.K2抗凝/普通试管,不抗凝.检测环境要求温度：18c27C,湿度：30%70%.所需材料和

2、设备设备 普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器.材料抗-A、抗-B血清、ABO标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 NS、干净空试管.检测操作过程将受检标本以1000g离心5min,使标本血浆/血清与红细胞别离,吸取红细胞,用 NS 洗涤三次后,配成 3%5%红细胞悬液.取6支小试管,分别标记 -'A"、-B'、自身"、“Ac'： "Bc'："O&在浓、-B'管中分别参加抗-A和抗-B血清各50 L ,其余管参加受检血浆/血清各 100 L .在-'A"、-B&

3、#39;、自身管中参加受检者 3%5%红细胞悬液各 50L ,摇匀.在"Ac'： "Bc'："OCf中分另J参加 Ai、B、O红细胞试剂各 50 L ,摇匀.1000g离心15sec,轻轻悬浮红细胞,观察结果并记录.根据实验需要,除室温下观察结果外,另可增加在4C、37c下观察结果.结果判断凝集强度判断标准见表 1.表1凝集强度判断标准表凝集强度判断标准4+红细胞凝集成一大块,液体背景透明,无游离红细胞3+数个大凝集块,液体背景透明,无游离红细胞2+有很多小凝集块,液体背景透明,无游离红细胞1+有许多很小的凝集块,肉眼可见,液体背景不透明,有游离红

4、细胞+微小的凝集块,肉眼很难看清,需要用显微镜观察.或0无凝集,无溶血,全是游离红细胞MF混合凝集外观,镜下可见少数红细胞凝集,而大局部是游离红细胞pH局部溶血H完全溶血7.2ABO血型结果判断见表2：表2 2血型结果判断表反定型定正定型AcBcOc自身对照血型抗-A血清血抗-B血清血十一一十一一A一 +一一一B +十一一O十十一一一一AB注：午表示凝集或溶血；“一表示不凝集.7.37.48.09.0正反定型不一致、ABO抗原减弱、抗-A或抗-B减弱、O细胞凝集时,排除人为操作 错误后,执行?疑难血型鉴定操作规程?进行最终确认.根据上述判断标准,作出结论并记录在?免疫血液学检查实验记录?.结果

5、报告根据实验结果,打印?免疫血液学实验报告?.报告的形式为：A型/B型/O型/AB型.实验结果解释实验结果为 A型、B型、AB型,O型,说明受检者 ABO血型分别属于 A型、B型、 AB型,O型.红细胞上分别有 A抗原、B抗原、皆有 A抗原和B抗原、皆无 A抗 原和B抗原；血浆中分别有抗-B、抗-A、抗-AB、皆无抗-A(B).10.0质量限制当受检标本与正、反定型试剂反响,凝集强度少于2+时,取标准抗-A、抗-B或A、B、O红细胞与正、反定型试剂反响,以验证试剂效能是否下降11.1 考前须知11.2 试管必须清洁、枯燥,预防溶血.11.3 加样顺序一般先加血清,再加红细胞悬液,以便容易核实是

6、否漏加血清.11.4 分型血清效价太低,抗原抗体比例不适当,可使反响不明显误判为阴性反响.11.5 用立即试管法可能不能测出亚型如Ax,需延长作用时间.11.6 观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度,此有助于亚型、类 B或cisAB的发现.11.7 各种原因引起的红细胞溶解,容易误判为不凝集；局部溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体,也会造成不凝集.11.8 受检者红细胞上抗原位点过少如亚型或抗原性减弱多见于白血病或恶性肿瘤以及类B或cisAB等,易被误判为不凝集.11.9 ABO正反定型不一致常见原因11.9.1 分型血清效价太低,亲和力不强.11.9.2 漏加、错加试剂或标本,试剂

7、被污染或失效.11.9.3 红细胞悬液过浓或过淡,抗原抗体比例不适当,使反响不明显误判为阴性结果.11.9.4 受检者红细胞上抗原位点过少如亚型或抗原性减弱多见于白血病或恶性肿瘤以及类B或cisAB等.11.9.5 受检者血清蛋白紊乱高球蛋白血症或实验温度过高,常引起细胞呈缗钱状排列.11.9.6 受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B,如丙种球蛋白缺乏症.11.9.7 各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集；局部溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体.11.9.8 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因.11.9.9 血清中有意外抗体,如抗-I等,常干扰定型.11.9.

8、10 患者近期曾输过异型血,使其血液标本成为不同型别的红细胞混合物,定型时显示混合外观凝集现象.11.9.11 嵌合体血型,体内有两群红细胞,定型时显示混合外观凝集现象.11.9.12 获得性类B的影响：由于革兰氏阴性杆菌的作用,红细胞可获得类B的活性.11.9.13 药物等因素的影响：药物、右旋糖酊及静脉注射某些造影剂聚集而类似凝集.11.9.14 老年人血清中抗体水平大幅度下降.11.9.15 新生儿尚未形成 ABO同种抗体,故三个月内的新生儿只要求做正定型来确定血型.11.10 红细胞在保存期内会逐渐变为暗红色,只要其未被细菌污染,抗原性不受任何影响.每次使用前,检查试剂有无明显溶血发生

9、,明显溶血者弃掉.11.11 标本保存不当、试剂过期变质、试剂被污染、不同批号的试剂混用、离心力或离心时间不符合要求、孵育时间不准确、孵育温度未达试剂实验要求等均可出现较大的变异.12.0相关文件单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂说明书ABO标准抗原红细胞试剂说明书全国临床检验操作规程第三版临床输血技术标准中国输血技术操作标准1997年版为什么ABO血型鉴定要正、反定型都做？原因如下：正定型属于细胞抗原定型,反定型属于血清抗体定型.ABO血型鉴定必须正、反定型都要做,有相互印证的作用.由于单做正定型来鉴定ABO血型,在某些情况下不可靠,易造成 ABO血型误判.如：1 .抗-A、抗-B血清效价低时

10、试剂失效、被污染或被稀释,可使正定型反响不明显误判为阴 性反响.那么 A、B、AB型会误判为 O型.2 .受检者红细胞上抗原位点过少如亚型或抗原性减弱多见于白血病或恶性肿瘤,可使 正定型反响不明显误判为阴性反响.那么A、B、AB型会误判为 O型.3 .各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集；局部溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体.可使正定型反响不明显误判为阴性反响.那么 A、B、AB型会误判为 O型.4 .由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集.那么 A、B、O型会误判为 AB型.5 .获得性类B的影响：由于革兰氏阴性杆菌的作用,红细胞可获得 类B的活性.那么 A型 会误判为AB型.ABO血型误判,对于临床输血来说风险极大,会造成 ABO血型异型输血,易引起急性溶血 性输血反响的发生,对患者的生命平安造成威胁.ABO血型鉴定要正、反定型都